羅 燕

(四川省遂寧市農(nóng)業(yè)局，四川 遂寧 629000)

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用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)豬O型口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)及分析

羅 燕

(四川省遂寧市農(nóng)業(yè)局，四川 遂寧 629000)

為切實(shí)了解、掌握遂寧市生豬口蹄疫免疫效果，以科學(xué)有效預(yù)防該病，2015年，隨機(jī)抽取全市部分規(guī)模場(chǎng)、散養(yǎng)戶以及屠宰場(chǎng)豬血清3100份，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)監(jiān)測(cè)O型口蹄疫免疫抗體。結(jié)果表明，豬O型口蹄疫免疫抗體整體合格率為80.98%，其中抗體最好的是規(guī)模場(chǎng)，四個(gè)季度的免疫抗體合格率差異不大，各規(guī)模場(chǎng)商品豬在不同季度，豬O型口蹄疫免疫抗體群體合格率均達(dá)到80%以上，種豬多數(shù)場(chǎng)免疫抗體群體合格率達(dá)到了90%以上；散養(yǎng)戶及屠宰場(chǎng)免疫抗體合格率分別為74.71%、71.96%。說(shuō)明我市始終堅(jiān)持“規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)按程序進(jìn)行免疫，散養(yǎng)畜禽實(shí)行春秋兩季集中免疫、每月及時(shí)補(bǔ)免”的工作制度，堅(jiān)持“應(yīng)免盡免，不留空檔”的工作標(biāo)準(zhǔn)，把口蹄疫等重大動(dòng)物疫病免疫放在防疫工作的突出位置，成效顯著。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；O型口蹄疫；抗體監(jiān)測(cè)

口蹄疫(Foot and mouth disease，F(xiàn)MD)俗稱“口瘡”，是由口蹄疫病毒引起的一種偶蹄獸急性發(fā)熱性接觸性傳染病，對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)和國(guó)際貿(mào)易造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，并嚴(yán)重影響到人民的生活和健康[1]。主要表現(xiàn)口腔粘膜、蹄部和乳房發(fā)生特征性水泡和潰瘍,豬為易感動(dòng)物。此病的危害極大，我國(guó)將其列為一類(lèi)病種，是國(guó)家制定強(qiáng)制免疫對(duì)象之一。免疫預(yù)防是防控該疫病發(fā)生的有效措施，因此，加強(qiáng)豬口蹄疫免疫工作已成為養(yǎng)豬業(yè)日常工作的重點(diǎn)[2]。為此，遂寧市對(duì)豬口蹄疫全面推行強(qiáng)制免疫，口蹄疫應(yīng)免數(shù)量免疫密度常年維持在100%，免疫抗體合格率全年應(yīng)保持在70%以上。要求散養(yǎng)戶春秋兩季集中免疫與月月補(bǔ)針相結(jié)合。規(guī)模場(chǎng)常年按程序免疫，屠宰場(chǎng)加強(qiáng)屠宰管理、屠宰檢疫，最終達(dá)到凈化效果[3]。遂寧市要求豬為使免疫效果得到保障，2015年，遂寧市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心隨機(jī)抽取部分規(guī)模場(chǎng)、散養(yǎng)戶以及屠宰場(chǎng)的生豬進(jìn)行了豬O型口蹄疫的免疫抗體監(jiān)測(cè)，旨在分析評(píng)估口蹄疫的疫情風(fēng)險(xiǎn)，完善各防疫措施。

1 材料與方法

1.1 疫苗與免疫程序

1.1.1 免疫疫苗 豬O型口蹄疫滅活疫苗由政府統(tǒng)一采購(gòu)自新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司，由區(qū)縣獸醫(yī)主管部門(mén)統(tǒng)一下發(fā)。

1.1.2 免疫程序 規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)采取仔豬28～35d首免，免疫劑量為肌注1mL/頭，首免30d后加強(qiáng)免疫1次，免疫劑量為肌注2mL/頭；種公豬和母豬每4個(gè)月接種1次，每次免疫劑量為肌注3mL/頭；散養(yǎng)豬采用春秋兩季集中免疫，定期補(bǔ)免措施，每次免疫劑量為2mL/頭。

1.2 采樣點(diǎn)選擇

每季度隨機(jī)選取市轄區(qū)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)15場(chǎng)(次)，屠宰場(chǎng)10場(chǎng)(次)，散養(yǎng)戶30戶(次)進(jìn)行血液樣品采集、分離血清。

1.3 采樣要求

每季度，每個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)隨機(jī)采集血樣20份，每個(gè)散養(yǎng)戶采集5～10份，每個(gè)屠宰場(chǎng)采集20份，并記錄采集地點(diǎn)、豬場(chǎng)規(guī)模、免疫時(shí)間、免疫次數(shù)、疫苗品種、生產(chǎn)廠家、批號(hào)及豬群健康狀況等資料，每份樣品采血量大于1.5mL。

1.4 樣品采集數(shù)量

全年共采集豬血清3100份，其中規(guī)模豬場(chǎng)商品豬血樣1157份，規(guī)模豬場(chǎng)種豬血樣412份，屠宰場(chǎng)血樣723份，散養(yǎng)戶血樣808份。

1.5 診斷試劑與方法

豬口蹄疫抗體監(jiān)測(cè)ELISA試劑：購(gòu)自深圳市真瑞生物有限公司，診斷試劑在有效期內(nèi)使用，批號(hào)為2015101377；試驗(yàn)嚴(yán)格按照診斷試劑說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行操作[4]。

1.6 結(jié)果判定

以空白對(duì)照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm(630nm作參比波長(zhǎng))讀取吸光度A值。PI(阻斷率)>35%則判斷為陽(yáng)性；PI≤35%則判斷為陰性。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 不同采集點(diǎn)抗體合格率

由表1可見(jiàn)，全年平均免疫抗體合格率，規(guī)模場(chǎng)商品豬合格率(85.15%)>散養(yǎng)戶(74.71%)>屠宰場(chǎng)(71.96)；在規(guī)模場(chǎng)中，種豬合格率(92.08%)>商品豬(85.15%)。

表1 不同場(chǎng)點(diǎn)各季度豬O型口蹄疫免疫抗體合格率

圖1 不同場(chǎng)點(diǎn)各季度豬O型口蹄疫免疫抗體合格率曲線圖

2.2 四個(gè)季度抗體合格率狀況

由表1、圖1看出，對(duì)不同季度采集的豬血清進(jìn)行O型口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，不同養(yǎng)殖類(lèi)型的不同場(chǎng)點(diǎn)，群體免疫抗體合格率均高于農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%的要求。規(guī)模場(chǎng)商品豬及種豬各自所在群體四個(gè)季度的免疫抗體合格率差異不大，并且抗體持續(xù)處于較高水平；散養(yǎng)戶、屠宰場(chǎng)第二、四季度的抗體合格率均高于第一、三季度，其中散養(yǎng)戶第三季度抗體水平處于最低，屠宰場(chǎng)相比規(guī)模場(chǎng)、散養(yǎng)戶抗體水平較低，且第一季度抗體水平處于最低；由表2得出，規(guī)模場(chǎng)商品豬各養(yǎng)殖場(chǎng)在不同季度，豬O型口蹄疫免疫抗體群體合格率均達(dá)到80%以上，種豬多數(shù)場(chǎng)免疫抗體群體合格率達(dá)到了90%以上。

3 分析與討論

(1)我市要求豬口蹄疫應(yīng)免群體免疫密度常年維持在100%，從2015年監(jiān)測(cè)的結(jié)果來(lái)看,在抽取的3100份豬血清的豬O型口蹄疫免疫抗體合格率達(dá)80.98%，超過(guò)了農(nóng)業(yè)部規(guī)定的要求(70%)，說(shuō)明我市始終堅(jiān)持“規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)按程序進(jìn)行免疫，散養(yǎng)畜禽實(shí)行春秋兩季集中免疫、每月及時(shí)補(bǔ)免”的工作制度，堅(jiān)持“應(yīng)免盡免，不留空檔”的工作標(biāo)準(zhǔn)，把口蹄疫等重大動(dòng)物疫病免疫放在防疫工作的突出位置，成效顯著。

(2)全年監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)來(lái)看規(guī)模場(chǎng)各季度豬O型口蹄疫免疫抗體群體合格率差異不大，一直處于較高水平；散養(yǎng)戶由于第一季度處于屠宰或出欄高峰期，存欄數(shù)量、抽檢數(shù)量均較少。第一季度在秋防結(jié)束后經(jīng)過(guò)幾個(gè)月，抗體水平逐漸降低，雖每月進(jìn)行補(bǔ)免，但屠宰季節(jié)多數(shù)散養(yǎng)戶不進(jìn)行疫苗免疫，個(gè)別豬處于免疫空檔期，致使免疫抗體水平合格率相對(duì)較低。第三季度處于春、秋防過(guò)渡臨界期，抗體水平也相對(duì)處于較低水平。對(duì)部分散養(yǎng)戶的調(diào)查了解，畜主擔(dān)心豬接種口蹄疫疫苗后導(dǎo)致豬過(guò)敏反應(yīng)，未按規(guī)定程序免疫豬口蹄疫疫苗[5]。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，個(gè)別養(yǎng)殖者認(rèn)為口蹄疫是寒冷季節(jié)發(fā)病率較高的疫病，所以僅注重第一、四季度的免疫預(yù)防，導(dǎo)致口蹄疫抗體合格率在不同季節(jié)的差異較大。但總的合格率仍高于農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%的要求。

(3)由于國(guó)家撥付給村級(jí)防疫員的工資經(jīng)費(fèi)有限，加之免疫注射工作量大，有些村級(jí)動(dòng)物防疫員只做春秋兩季的集中免疫，平時(shí)的月月補(bǔ)針不能及時(shí)到位，存在應(yīng)免未免、補(bǔ)欄不能及時(shí)補(bǔ)免等現(xiàn)象，也是導(dǎo)致第一季度、第三季度散養(yǎng)戶豬O型口蹄疫免疫抗體水平較低的原因之一。

表2 不同規(guī)模場(chǎng)商品四個(gè)季度免疫抗體合格率 單位：頭、%

(4)農(nóng)村散養(yǎng)戶的豬舍通風(fēng)不良，衛(wèi)生條件差，豬群長(zhǎng)期處于應(yīng)激狀態(tài)，導(dǎo)致豬體免疫力下降。飼料變質(zhì)發(fā)霉，比如黃曲霉、褐曲霉等產(chǎn)生毒素抑制免疫應(yīng)答。飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏，影響免疫抗體生成速度和數(shù)量[6]。

(5)個(gè)別屠宰場(chǎng)的免疫抗體合格率低下，存在免疫情況不清等問(wèn)題，可能與免疫期超過(guò)6個(gè)月、漏免或免疫未產(chǎn)生應(yīng)答等原因有關(guān)[7]。

[1]王世若,王興龍,韓文瑜.現(xiàn)代動(dòng)物免疫學(xué)[M].吉林:吉林科學(xué)技術(shù)出版社,1996:320-321.

[2]吳志明,劉蓮芝,李桂喜.動(dòng)物疫病防控知識(shí)寶典[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2006:114-118.

[3]劉桂清,侯喜林.幾種豬口蹄疫疫苗免疫效果觀察[J].中國(guó)獸醫(yī)科技,1999,29(12):38-39.

[4]豬口蹄疫抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)說(shuō)明書(shū)[Z].2010年.深圳市真瑞生物有限公司.

[5]朱玉華,陳亮.生豬注射口蹄疫滅活苗引起免疫應(yīng)激的防治[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào),2007,13(18):223.

[6]謝翠松,羅平,龍清孟,等.仔豬O型口蹄疫疫苗首免與二免抗體水平比較[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2009,36(5):144-146.

[7]金大春,王躍川,季旭仁,等.豬口蹄疫免疫程序和抗體水平研究[J].畜禽業(yè),2003,8:30-31.