馬興斌，吳金措姆，拉巴次旦，曾江勇

（1.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，西藏拉薩850009；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730070）

墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬流感病毒的血清學(xué)調(diào)查

馬興斌1,2，吳金措姆1，拉巴次旦1，曾江勇1

（1.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，西藏拉薩850009；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730070）

鑒于墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線是藏豬養(yǎng)殖較為密集區(qū)，為了解該地區(qū)藏豬流感病毒（SIV）的流行情況，采用抗體ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）同時(shí)對墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線工卡鎮(zhèn)、扎西崗鄉(xiāng)、日多鄉(xiāng)、加興鄉(xiāng)和金達(dá)鎮(zhèn)5個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)藏豬的600份血清進(jìn)行H1N1 SIV和H3N2 SIV抗體檢測。結(jié)果顯示，H1N1 SIV抗體檢測分析，陽性血清共248份（41.33%）；H3N2 SIV抗體檢測分析，陽性血清共90份（15.00%）；H1N1 SIV和H3N2 SIV混合感染抗體檢測分析，陽性血清共59份（9.83%）。斷奶仔藏豬和1歲以上藏豬的感染率均以海拔相對較低的加興鄉(xiāng)和金達(dá)鎮(zhèn)為高。研究為墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H1N1 SIV和H3N2 SIV的預(yù)防提供參考依據(jù)。

藏豬；流感病毒；血清學(xué)調(diào)查；ELISA；血凝抑制試驗(yàn)

豬流感病毒（Swine innuenza virus,SIV）在實(shí)驗(yàn)室里所分離出來的病毒，多被辨識為A型流感病毒，或者是C型流感病毒的亞種之一，是豬群中一種可引起地方性流行性感冒的正黏液病毒（Orthomyxoviruses）?？梢栽斐韶i急性和高度接觸性呼吸道疾病，能夠引起不同日齡及品種的豬感染發(fā)病[1]。

豬流感是豬體內(nèi)因病毒引起的呼吸系統(tǒng)疾病。豬流感由A型流感[2]引發(fā)，通常暴發(fā)于豬之間，傳染性很高但通常不會引發(fā)死亡。豬流感病毒有很多個(gè)不同的亞型，計(jì)有H1N1和H3N2等亞型的甲型流感病毒都能導(dǎo)致豬流感的發(fā)生。

自Guan（1996）等[3]從中國南方以及東南亞地區(qū)分離出類禽（Eurasian Avian-1ike,EA）H1N1 SIV以來，EAH1N1 SIV在亞洲地區(qū)豬群中廣泛流行。證實(shí)有豬流感病毒在人際間傳染的病例，其傳播途徑與季節(jié)性流感類似，通常是通過感染者咳嗽和打噴嚏等傳染。豬呼吸道上皮具有2種流感病毒受體，能夠同時(shí)感染人流感病毒和禽流感病毒。因此豬被認(rèn)為是流感病毒的“混合器”，對新型流感病毒的形成起到重要作用。了解豬群中流感的疫情動態(tài)是人類流感防控的重要依據(jù)，具有重大的公共衛(wèi)生學(xué)意義。

為調(diào)查墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬養(yǎng)殖較為密集區(qū)藏豬流感病毒的感染情況，筆者于2015年6月對上述兩縣的5個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)采集的600份血清樣品進(jìn)行了H1N1 SIV和H3N2 SIV的血清學(xué)檢測。

1 材料與方法

1.1 參考毒株與主要試劑

豬流感病毒抗體（SIV Ab-H1N1、SIV Ab-H3N2）檢測ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）試劑盒購自美國IDEXX公司，受體破壞酶（RDE）購自美國Sigma公司。

1.2 樣品的采集

選擇墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線工卡鎮(zhèn)、扎西崗鄉(xiāng)、日多鄉(xiāng)、加興鄉(xiāng)和金達(dá)鎮(zhèn)為采樣點(diǎn)，采集被檢藏豬非抗凝前腔靜脈血液5 mL，共采樣600份，標(biāo)明樣品采集時(shí)間、地點(diǎn)、編號，置于4℃冰箱保存、備用。

采樣原則：每個(gè)采樣點(diǎn)分別采集1歲以上藏豬（公母各半）非抗凝前腔靜脈血液80頭份，每頭份5 mL；斷奶仔藏豬（公母各半）40頭份，每頭份5 mL。

1.3 樣品處理

將采集血液凝固后離心分離血清并標(biāo)記，置-20℃保存，最后低溫送實(shí)驗(yàn)室于-70℃保存?zhèn)錂z。

1.4 檢測方法與數(shù)據(jù)處理

為保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，同時(shí)對采集的600份血清樣品做抗體ELISA檢測和血凝抑制試驗(yàn)（HI）。

按照IDEXX公司的H1N1、H3N2豬流感病毒抗體ELISA檢測試劑盒說明書對采集的600份血清樣品進(jìn)行抗體檢測。

根據(jù)參考文獻(xiàn)[4]通過血凝抑制試驗(yàn)（HI），對采集的600份血清樣品進(jìn)行血清學(xué)檢測。為防止血清學(xué)檢測中非特異性結(jié)果，采用RDE處理血清樣品，去除血清中非特異性抑制因子。根據(jù)各株抗原病毒的血凝（HA）效價(jià)配制4個(gè)HAU（4單位抗原）。依據(jù)OIE標(biāo)準(zhǔn)血清學(xué)診斷手冊說明進(jìn)行HI試驗(yàn)，記錄HI效價(jià)。陽性或陰性的臨界值為1∶40，HI效價(jià)≥1∶40時(shí)，結(jié)果判定為陽性。

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，比較不同地區(qū)、不同年齡藏豬感染情況。

2 結(jié)果

2.1 墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H1N1 SIV抗體檢測結(jié)果

采用抗體ELISA和HI試驗(yàn)同時(shí)對墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H1N1流感病毒抗體檢測分析，陽性血清共248份（41.33%）。斷奶仔藏豬以海拔相對較低的日多鄉(xiāng)（32.50%）和金達(dá)鎮(zhèn)（40%）為高；1歲以上藏豬以加興鄉(xiāng)（46.67%）和金達(dá)鎮(zhèn)（54.17%）為高，見表1。

表1 墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H1N1 SIV抗體檢測情況

2.2 墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H3N2 SIV抗體檢測結(jié)果

采用抗體ELISA和HI試驗(yàn)同時(shí)對墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H3N2流感病毒抗體檢測分析，陽性血清共90份（15.00%）。斷奶仔藏豬以海拔相對較低的金達(dá)鎮(zhèn)（20.00%）為高；1歲以上藏豬以加興鄉(xiāng)（17.50%）為高，見表2。

表2 墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H3N2 SIV抗體檢測情況

2.3 墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H1N1 SIV和H3N2 SIV混合感染抗體檢測結(jié)果

采用抗體ELISA和HI試驗(yàn)同時(shí)對墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H1N1 SIV和H3N2 SIV混合感染抗體檢測分析，陽性血清共59份（9.83%）。斷奶仔藏豬以海拔相對較低的加興鄉(xiāng)（15.00%）和金達(dá)鎮(zhèn)（15.00%）為高；同樣，1歲以上藏豬以加興鄉(xiāng)（11.25%）和金達(dá)鎮(zhèn)（11.25%）為高，見表3。

表3 墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬H1N1 SIV和H3N2 SIV混合感染抗體檢測

3 分析與討論

實(shí)驗(yàn)室抗體檢測同時(shí)進(jìn)行抗體ELISA和HI試驗(yàn)，陽性數(shù)據(jù)基本一致。在此次調(diào)查中，H1N1亞型整體抗體陽性率（41.33%）明顯高于H3N2亞型的（15.00%），差異顯著（P＜0.05），且兩種亞型混合感染率為9.83%。說明H1N1豬流感病毒可能是墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣的川藏公路沿線藏豬中流行的豬流感病毒的主要亞型。共同感染使病毒發(fā)生重組的幾率增加，因此藏豬豬流感病毒抗體共同感染陽性率也說明藏豬已成為流感病毒重組的潛在載體。

此次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，對斷奶仔藏豬和1歲以上藏豬，不論是H1N1亞型、H3N2亞型還是兩者的混合感染率均以海拔相對較低且空氣較濕潤的加興鄉(xiāng)和金達(dá)鎮(zhèn)為高，說明流感病毒與環(huán)境氣候有一定關(guān)系。

由于豬流感病毒在人際間傳染的病例，其傳播途徑與季節(jié)性流感類似，通常是通過感染者咳嗽和打噴嚏等傳染。此次調(diào)查僅為摸底性，由于項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)限制，暫時(shí)未能做具體不同年齡階段藏豬和季節(jié)的動態(tài)學(xué)研究，特別是與旅游季節(jié)相關(guān)性分析。

此次調(diào)查采樣時(shí)間為2015年6月，且采樣地點(diǎn)不同于時(shí)新春（2013）[5]的林芝地區(qū)米林縣和林芝縣，亞型整體抗體陽性率均略低于時(shí)新春（2013）[5]抗體ELISA試驗(yàn)結(jié)果。

本次調(diào)查為騎行旅游人流量相對較多的川藏公路線，且為藏豬養(yǎng)殖較為密集的墨竹工卡和工布江達(dá)兩縣，結(jié)果為制定和實(shí)施有效的藏豬流感防控措施提供參考，并對西藏居民乃至全國人民H1N1 SIV和H3N2 SIV的防控具有十分重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。

[1]Olsen C W.The emeerence of novel swine influenza viruses in Nonh America[J].Virus Res,2002,85(2):199-210.

[2]豬流感病毒[M/OL].http://baike.baidu.com/link?url=T_BGPv8 WXxbcLGh9TjXwKwXTczW9O IB8 t3OPm-Nv49O8QvI5xB8Q aFhyIB75NZTxPyGTUlpfMLFDqJPC7AVfpK.

[3]Guan Y,Shortridge K F,Krauss S,et al.Emergence of avian H1N1 influenza viruses in pigs in China[J].J Virol,1996,70(11): 8041-8046.

[4]何淑儀，馬駿，方博，等.華南地區(qū)豬場豬流感和甲型H1N1/ 2009流感病毒的血清學(xué)調(diào)查[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2015，37（9）：660-664.

[5]時(shí)新春.西藏林芝地區(qū)藏豬群6種傳染病的血清學(xué)流行病學(xué)調(diào)查[D].西安：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2013.（編輯：柳青）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)03-0123-02

2016-03-15

馬興斌（1984-），男，甘肅榆中人，助理研究員，在讀博士研究生，主要從事高原動物疫病防控研究.E-mail：309528454@qq.com

曾江勇（1973-），男，湖南桃源人，研究員，博士，主要從事動物流行病學(xué)研究.E-mail：zengjiangyong@126.com