向 尹，楊 陽,周 杰

(1.四川省樂山市人民醫(yī)院檢驗科 614000；2.西南醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗系，四川瀘州 646000)

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HBVDNA載量與肝硬化和原發(fā)性肝癌的相關(guān)性探究

向 尹1，楊 陽1,周 杰2

(1.四川省樂山市人民醫(yī)院檢驗科 614000；2.西南醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗系，四川瀘州 646000)

目的 探討乙型肝炎病毒(HBV)DNA載量與肝硬化和原發(fā)性肝癌的相關(guān)性。方法 選擇樂山市人民醫(yī)院2014年3月到2015年3月的住院患者中感染HBV的患者552例，用實時熒光定量PCR檢測其入院時的HBVDNA載量，根據(jù)臨床診斷分別統(tǒng)計陽性組與陰性組中肝硬化和原發(fā)性肝癌患者例數(shù)。結(jié)果 統(tǒng)計顯示DNA陽性組345例，DNA陰性組207例，DNA陽性組的肝硬化患病率為44.93%，DNA陰性組的肝硬化患病率為35.75%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。DNA陽性組的原發(fā)性肝癌患病率為8.12%，DNA陰性組的原發(fā)性肝癌患病率為7.25%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 感染HBV病毒的患者HBVDNA載量與肝硬化的發(fā)生有關(guān)，與原發(fā)性肝癌的關(guān)系仍需進一步探討。

肝硬化；肝腫瘤；肝炎病毒，乙型；DNA；HBVDNA；原發(fā)性肝癌

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的以肝臟損害為主的全身性傳染病，是發(fā)病率極高的肝炎之一。HBV 感染者部分發(fā)展成肝炎，部分為正常攜帶者，也有部分發(fā)展成肝硬化和肝癌。相關(guān)報道表明HBV DNA載量高水平是HBV感染者發(fā)生肝硬化和原發(fā)性肝癌的危險因素。但這一結(jié)論是否因地區(qū)的不同而有差異還未見報道。本文通過對四川省樂山地區(qū)HBV感染者的HBV DNA載量和臨床診斷進行分析，探討該地區(qū)感染HBV人群的HBV DNA載量與肝硬化和原發(fā)性肝癌的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年3月至2015年3月在樂山市人民醫(yī)院治療的HBV感染患者552例為研究對象。其中男376例(68.1%)，女176例(31.9%)；年齡16～84歲，平均(53.52±13.80)歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)：入院當(dāng)天檢查HBV DNA載量、乙型肝炎兩對半，兩對半除乙型肝炎表面抗體外的任一項結(jié)果陽性則判斷為HBV感染者。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者臨床診斷符合全國肝硬化和原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。所有患者均未系統(tǒng)使用抗病毒、保肝等藥物，未合并其他類型肝炎病毒感染，同時排除藥物性、 酒精性、 自身免疫性、代謝性等肝炎，以及糖尿病、甲狀腺功能亢進、嚴(yán)重心血管等疾病[2]。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 HBV DNA載量測定使用中山大學(xué)達安基因股份有限公司的DA7600型全自動實時熒光定量PCR儀，試劑采用同公司生產(chǎn)的HBV核酸定量檢測試劑盒(批號2014008-011，2015002-004)。

1.2.2 標(biāo)本采集 所有研究對象均于入院時或入院后1 d清晨空腹抽取靜脈血5 mL，以3 000 r/min離心5 min后取血清備用。

1.2.3 DNA提取及檢測 將待測樣本、陽性定量參考品、陰性質(zhì)控品、HBV 強陽性質(zhì)控品、HBV臨界陽性質(zhì)控品進行同步處理，按試劑盒說明書進行操作。提取的DNA加入PCR反應(yīng)管，用全自動實時熒光定量PCR儀進行檢測。HBV DNA檢測結(jié)果載量大于或等于1 000拷貝為陽性，小于1 000拷貝為陰性。

1.2.4 患者臨床資料的收集 調(diào)查552例研究對象是否患肝硬化和原發(fā)性肝癌，分別統(tǒng)計HBV DNA陽性和HBV DNA陰性結(jié)果中肝硬化和原發(fā)性肝癌的例數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行分析，計數(shù)資料用率表示，組間采用χ2檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

在552例研究對象中HBV DNA陽性者有345例，HBV DNA陰性者有207例。HBV DNA陽性者中患肝硬化者有155例，為44.93%，HBV DNA陰性者中患肝硬化者有74例，為35.75%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。HBV DNA陽性者中患原發(fā)性肝癌者有28例，為8.12%,HBV DNA陰性者中患原發(fā)性肝癌者有15例，為7.25%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 DNA結(jié)果與肝硬化、原發(fā)性肝癌關(guān)系

3 討 論

目前，HBV感染呈世界性流行，據(jù)WHO報道，每年約有 100 萬人死于 HBV 感染所致的肝衰竭、 肝硬化和原發(fā)性肝細胞癌[3]。我國是HBV感染高流行區(qū)，一般人群乙型肝炎表面抗原陽性率約9.75%，大約15.00%～40.00%的慢性HBV感染者會發(fā)展為肝硬化和晚期肝病[4]。

目前多用乙型肝炎兩對半(HBsAg、HBsAb、HBeA、HBeAb、HBcAb)，以及HBV DNA的聯(lián)合檢測來對HBV感染進行診斷。HBV DNA 是 HBV 感染最直接、 最靈敏和最特異性的指標(biāo)，其水平高低可直接反應(yīng)HBV感染者體內(nèi)病毒復(fù)制水平。國內(nèi)外已有研究報道血清HBV DNA 載量可預(yù)測 HBV 慢性感染者的肝硬化發(fā)病率，肝硬化的發(fā)病率以劑量依賴方式，隨 HBV DNA 水平的增加而升高[5]。日本一項關(guān)于HBV載量同HBV相關(guān)肝硬化患者發(fā)生原發(fā)性肝癌關(guān)系的研究發(fā)現(xiàn)， HBV DNA 水平與原發(fā)性肝癌相關(guān)，超過5年的高HBV DNA水平發(fā)生原發(fā)性肝癌的風(fēng)險性明顯增高，維持3年或更長的低HBV DNA水平可能能夠阻止原發(fā)性肝癌發(fā)生。亦有研究認(rèn)為高滴度病毒血癥的波動可能提示嚴(yán)重的肝細胞的破壞，至少在短期內(nèi)會增加發(fā)生原發(fā)性肝癌的危險性[6]。

本文通過對樂山地區(qū)HBV慢性感染者的肝硬化狀況的研究發(fā)現(xiàn)，樂山地區(qū)HBV慢性感染者的HBV DNA載量與肝硬化的發(fā)生有關(guān)，HBV DNA陽性患者的肝硬化發(fā)生率高于HBV DNA陰性患者。國內(nèi)外已有研究報道血清 HBV DNA 載量可預(yù)測 HBV 慢性感染者的肝硬化發(fā)病率[5]。HBV DNA持續(xù)高載量可能導(dǎo)致肝細胞變性或壞死，病因持續(xù)存在，肝細胞的不斷損傷、壞死，導(dǎo)致肝細胞再生、修復(fù)、纖維化，形成假小葉；肝纖維化發(fā)展的同時，伴有顯著的、非正常的血管增殖，使肝內(nèi)門靜脈、肝靜脈和肝動脈3個血管系之間失去正常關(guān)系，出現(xiàn)交通吻合支等，這加重了肝細胞的營養(yǎng)障礙，是促進肝硬化發(fā)展的重要機制[7]。

在對樂山地區(qū)HBV慢性感染者的原發(fā)性肝癌狀況的研究中發(fā)現(xiàn)，樂山地區(qū)HBV慢性感染者的HBV DNA載量與原發(fā)性肝癌患病率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，需進一步探討。原發(fā)性肝癌的病因和發(fā)病機制尚未完全明確，根據(jù)高發(fā)區(qū)流行病學(xué)調(diào)查，原發(fā)性肝癌的發(fā)生與多種因素有關(guān)，如病毒性肝炎食物和飲水，毒物與寄生蟲，遺傳因素等，而HBV感染則是原發(fā)性肝癌發(fā)生的首要危險因素之一[8]。原發(fā)性肝癌的非手術(shù)療法雖然已有進展，但手術(shù)切除仍是目前最有效的治療方法。晚期原發(fā)性肝癌切除后復(fù)發(fā)率高，易轉(zhuǎn)移，有研究顯示，高病毒負(fù)荷是肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)的一項重要危險因素，術(shù)前血清HBV DNA高水平的患者，在術(shù)后出現(xiàn)肝細胞破壞增加、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)升高、肝功能損害加劇的危險性增高[4]。目前HBV 引起肝癌發(fā)生的機制尚未完全明確，有研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌的發(fā)生與 DNA 的損傷密切相關(guān)，幾乎所有 HBV 誘導(dǎo)的肝癌中，都能發(fā)現(xiàn)整合的病毒 DNA。另有學(xué)者指出HBV DNA復(fù)制水平在原發(fā)性肝癌發(fā)生中可能起著一定的作用，原因是HBV DNA的高水平復(fù)制可能導(dǎo)致更多HBV DNA整合到肝細胞核酸中，增加突變概率，激活癌基因，從而導(dǎo)致肝癌的發(fā)生[9]。

病毒的持續(xù)感染，與肝硬化、原發(fā)性肝癌密切相關(guān)。HBV感染是肝硬化最常見的病因，原發(fā)性肝癌患者中約90%有HBV感染的背景，且原發(fā)性肝癌大多在肝硬化的基礎(chǔ)上發(fā)展而來。慢性乙型肝炎，肝硬化與原發(fā)性肝癌的關(guān)系已得到公認(rèn)[10]。對于肝硬化，現(xiàn)有的治療方法尚不能逆轉(zhuǎn)已發(fā)生的肝硬化，對于代償期患者，治療旨在延緩肝功能失代償、預(yù)防肝細胞肝癌；對于失代償患者，則以改善肝功能、治療并發(fā)癥、延緩或減少對肝移植需求為目標(biāo)。當(dāng)前乙型肝炎疫苗的預(yù)防注射已經(jīng)降低HBV的感染及其引起的肝硬化和原發(fā)性肝癌的發(fā)生。對有HBV感染史的HBeAg陰性患者均應(yīng)常規(guī)檢測HBV DNA，并采用適當(dāng)?shù)目共《局委熯M行早期干預(yù)。

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Correlation between HBV DNA load and liver cirrhosis，hepatocellular

XiangYin1,YangYang1,ZhouJie2

(1.TheLaboratoryDepartment,People′sHospitalofLeshan,Leshan,Sichuan614000,China;2.DepartmentofClinicalMedicine,SoutheastMedicalUniversity,Luzhou,Sichuan646000,China)

Objective To investigate the correlation between hepatitis B virus deoxyribonucleic acid (HBV DNA) load and liver cirrhosis,hepatocellular carcinoma (PHC).Methods We chose 552 cases with hepatitis B virus infection in Leshan people′s hospital from 2014 March to 2015 March,and used real-time fluorescence quantitative PCR to detect the HBV DNA load.According to the results,patients were divided into DNA positive group and DNA negative group.The two groups of patients with liver cirrhosis and primary liver cancer patients were statistically analysed separately.Results There were 345 patients in DNA positive group while 207 patients in DNA negative group.Cirrhosis prevalence rate of DNA positive group was 44.93%，while the rate of DNA negative group was 35.75%,and there was significant difference between them(P<0.05).Hepatocellular carcinoma prevalence rate of DNA positive group was 8.12%,while the rate of DNA negative group was 7.25%,and there was no significant difference between them(P>0.05).Conclusion Hepatitis B virus DNA load in the patients infected by HBV is connected with the occurrence of liver cirrhosis,but the relationship with the hepatocellular carcinoma is still need to be further discussed.

liver cirrhosis；liver neoplasms；hepatitis B virus；DNA；HBV DNA；primary hepatic carcinoma

向尹(1977-)，主管技師，本科，主要從事臨床檢驗學(xué)方面研究。

論著·臨床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2016.23.022

R

A

1671-8348(2016)23-3231-02

2016-04-19

2016-06-24)