張 艷,劉海隆,林哲敏,曹宗喜,譚樹義

(1.海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，海南?？?571100；2.海南省熱帶動物繁育與疫病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南?？?571100)

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海南省規(guī)模豬場豬傳染性胸膜肺炎的血清學(xué)調(diào)查

張 艷1,2,劉海隆1*,林哲敏1,2,曹宗喜1,2,譚樹義1,2

(1.海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，海南?？?571100；2.海南省熱帶動物繁育與疫病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南海口 571100)

為了解海南省規(guī)模豬場豬傳染性胸膜肺炎(PCP)的感染情況，采集海南省8個市縣16個不同規(guī)模豬場血清樣品1286份，用ELISA方法對豬胸膜肺炎放線桿菌(APP)ApxⅣ抗體進(jìn)行檢測，分析APP的感染情況。結(jié)果顯示，1286份豬血清樣品共檢出陽性樣品436份，抗體陽性率為33.90%。其中，檢測母豬血清326份，抗體陽性率為47.85%；檢測哺乳仔豬血清324份，抗體陽性率為37.65%；檢測保育豬血清316份，抗體陽性率為18.99%；檢測育肥豬血清320份，抗體陽性率為30.63%。8個市縣均有APP感染，其中文昌市APP抗體陽性率最高；不同規(guī)模豬場均有APP感染，其中中型規(guī)模豬場APP抗體陽性率最高；不同品種豬均有APP感染，其中杜長陸三元雜豬APP抗體陽性率最高。說明PCP在海南省部分規(guī)模豬場中普遍存在，對豬場進(jìn)行PCP的控制是十分必要的。

豬傳染性胸膜肺炎；胸膜肺炎放線桿菌；血清學(xué)調(diào)查

豬傳染性胸膜肺炎 (Porcine contagious pleuropneumonia,PCP) 是由胸膜肺炎放線桿菌 (Actinobacilluspleuropneumoniae,APP) 引起的一種高接觸性傳染的呼吸道疾病，以急性出血性纖維素性胸膜肺炎和慢性纖維素性壞死性胸膜肺炎為特征。APP主要通過咳嗽、噴嚏噴出帶病原的分泌物和滲出物，經(jīng)上呼吸道感染，也可經(jīng)消化道傳播。6周齡～16周齡的豬易感染，尤以3月齡的豬發(fā)病率最高，可達(dá)80%～100%，病死率50%[1]。一些病豬康復(fù)后常伴有慢性肺炎，導(dǎo)致生長停滯且長期帶菌而成為其他豬的傳染源，此病給養(yǎng)豬業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。1957年英國的Pattison等首次報(bào)道該病。在我國自楊旭夫等于1990年報(bào)道此病以來，現(xiàn)已經(jīng)成為嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要呼吸道疾病之一[2]。近年來，隨著養(yǎng)豬業(yè)的規(guī)?；?、集約化發(fā)展，PCP的發(fā)病情況日益嚴(yán)重，感染率呈上升趨勢，有擴(kuò)大蔓延之勢[3-4]。因此，為了解PCP在海南省的流行情況，以確定有效的防控措施，我們于2014年10月到2015年2月，對海南省不同規(guī)?；i場的不同階段豬群進(jìn)行了PCP血清學(xué)調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 待檢樣品 血清樣品來自海南省?？谑小⑽牟?、臨高縣、澄邁縣、瓊海市、屯昌縣、儋州市8個市縣16個規(guī)?；i場，共計(jì)1286份。其中，每個市縣隨機(jī)選擇2個規(guī)?；i場，每個豬場各個階段的豬(哺乳仔豬、保育豬、育肥豬、母豬)都有飼養(yǎng)。每個豬場選母豬、哺乳仔豬(0～30日齡)、保育豬(31日齡～70日齡)、育肥豬(71日齡～150日齡)為采樣對象，每個階段采樣不少于18頭。前腔靜脈或耳靜脈采集血液，離心后分離血清，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 試劑 豬胸膜肺炎放線桿菌ApxIV-ELISA抗體檢測試劑盒，購自武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司，批號為141004。

1.2 方法

采用ELISA 方法進(jìn)行檢測，試驗(yàn)方法按試劑盒說明書進(jìn)行，具體試驗(yàn)方法如下。①試劑的準(zhǔn)備：在使用前所有試劑在常溫下平衡；濃縮洗滌液用蒸餾水作20倍稀釋，混勻，備用；②樣品稀釋：在血清稀釋板中按1∶40的體積稀釋待檢血清樣品(195μL樣品稀釋液中加5μL待檢血清)；③對照稀釋：在血清稀釋板中按1∶4分別稀釋陽性對照和陰性對照(180μL樣品稀釋液中加60μL對照血清)；④取抗原包被板，將稀釋好的待檢血清、陰性對照和陽性對照各取100μL加入到抗原包被板中，待檢血清設(shè)1孔，陰、陽對照各設(shè)2孔。輕輕振勻孔中樣品，置37℃下溫育30min。⑤甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗板5次，200μL/孔，每次靜置3min后倒掉液體，并在干凈吸水紙上拍干。⑥每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100μL，置37℃下溫育30min。⑦洗滌5次，方法同⑤。⑧每孔先加底物液A 50μL，再加底物液B 50μL，混勻，置室溫下(20℃～25℃)避光顯色10min。⑨每孔加終止液50μL，10min內(nèi)測定結(jié)果。

在酶標(biāo)儀上測各孔OD 630nm值。試驗(yàn)成立的條件是：陽性對照孔OD 630nm值均≥0.6；陰性對照孔OD 630nm值均<0.3。如果S(樣品孔OD 630nm值)≥ P(陽性對照孔OD 630nm值)×0.25，判為陽性；如果S

2 結(jié)果

2.1 不同地區(qū)APP的檢測結(jié)果

共檢測1286份豬血清，總陽性率為33.90%，不同采樣點(diǎn)APP檢測結(jié)果見表1。由表1可以看出，APP在所有調(diào)查地區(qū)均有檢出，其中屯昌縣APP抗體陽性率最低，為18.75%；文昌市APP抗體陽性率最高，為51.81%。

表1 不同地區(qū)APP檢測統(tǒng)計(jì)Table 1 Statistics of APP detection in different areas

2.2 不同生長階段豬APP的檢測結(jié)果

APP抗體陽性率與豬的日齡存在一定關(guān)系，具體見表2。其中，母豬的APP抗體陽性率最高，為47.85%；其次是哺乳仔豬，為37.65%，育肥豬為30.63%；保育豬APP的抗體陽性率最低，為18.99%。

表2 不同生長階段豬APP檢測統(tǒng)計(jì)Table 2 Statistics of APP detection in different growth stages of pigs

2.3 不同養(yǎng)殖規(guī)模豬場APP的檢測結(jié)果

APP抗體陽性率與豬場的規(guī)模存在一定關(guān)系，具體見表3。其中，中型規(guī)模場APP的抗體陽性率最高，為40.85%；其次是大型規(guī)模場，為34.17%；小型規(guī)模場APP的抗體陽性率最低，為26.88%。

表3 不同養(yǎng)殖規(guī)模豬場APP檢測統(tǒng)計(jì)Table 3 Statistics of APP detection in different scale pig farms

2.4 不同品種豬APP的檢測結(jié)果

不同品種豬APP的抗體陽性率略有不同，具體見表4。其中，屯昌黑豬的APP抗體陽性率最低，為27.50%；其次是定安黑豬，為32.50%，五指山豬為33.75%，杜長大三元雜豬為34.81%；杜長陸三元雜豬的APP抗體陽性率最高，為35.80%。

表4 不同品種豬APP檢測統(tǒng)計(jì)Table 4 Statistics of APP detection in different breeds of pigs

3 討論

3.1 檢測方法

目前診斷PCP常用的血清學(xué)方法主要有間接血凝反應(yīng)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)[5]。其中，間接血凝反應(yīng)敏感、操作簡單，可進(jìn)行早期診斷，但也存在自身的局限性，如亞臨床感染或帶菌狀態(tài)下易造成假陰性；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)敏感性好，簡便快速，適合于臨床診斷、實(shí)驗(yàn)室檢測和血清學(xué)調(diào)查等[6]。APP是引起PCP的主要病原菌，研究發(fā)現(xiàn)APP的l5個血清型菌株均能在感染豬體內(nèi)分泌外毒ApxIV，且ApxIV種屬特異性強(qiáng)，是一種用于臨床診斷的良好抗原[7-8]。ApxlV -ELISA可有效區(qū)分APP滅活疫苗或亞單位疫苗免疫豬與自然感染豬，并能與其他豬呼吸道疾病病原如豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌等進(jìn)行鑒別診斷[9]。因此，APP ApxIV-ELISA抗體檢測試劑盒更適合基層大批量檢測APP感染情況。

3.2 不同地區(qū) PCP流行情況

我國多個省市均有PCP的血清學(xué)調(diào)查報(bào)告，但是血清抗體陽性率有所差別。如廣東東莞地區(qū)APP抗體總陽性率為20.06%[10]，湖南省部分豬場APP抗體總陽性率為34.46%[11]，湖北西南地區(qū)APP抗體總陽性率為28.18%[12]。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，APP在海南省8個市縣16個規(guī)模豬場均有檢出，APP抗體總陽性率達(dá)到33.90%；其中文昌市APP抗體陽性率最高，為51.81%。說明APP在海南省部分規(guī)模豬場中普遍存在，感染率較高，分析原因可能有：①引種傳播，部分三元雜豬場不能做到自繁自養(yǎng)，需要引種，因檢疫把關(guān)不嚴(yán)，從而將本病引入場內(nèi)；②調(diào)研豬場大多存在單位面積飼養(yǎng)密度大，相互擁擠，造成接觸傳播；③衛(wèi)生條件差，糞便不能及時清理，空氣質(zhì)量差，不通風(fēng)；④防治不及時，所有調(diào)查豬場均未進(jìn)行PCP疫苗的免疫接種，部分豬場PCP的防控意識淡薄，存在發(fā)病后才治療的現(xiàn)象。

此外，豬群感染APP的情況可根據(jù)臨床癥狀的有無和血清學(xué)狀態(tài)依次劃分為3個類型，即臨床癥狀陽性血清學(xué)陽性(1類)；臨床癥狀陰性血清學(xué)陽性(2類)；臨床癥狀和血清學(xué)均為陰性(3類)[13]。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)2類居多，說明海南部分豬場APP的隱性感染普遍。因此，各養(yǎng)殖場和動物防疫部門應(yīng)當(dāng)高度重視，對豬場進(jìn)行PCP的防控，防止2類豬群轉(zhuǎn)化為1類，引起PCP暴發(fā)。

3.3 不同規(guī)模豬場PCP的流行情況

不同規(guī)模豬場APP的感染存在差異。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，中型規(guī)模豬場APP抗體陽性率最高，為40.85%；其次是大型規(guī)模場，小型規(guī)模豬場APP的抗體陽性率最低。這與張光輝等[14]對河南省APP血清學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)的小型養(yǎng)豬場APP抗體陽性率最高，大型養(yǎng)豬場APP抗體陽性率最低的結(jié)果不一致，這可能與當(dāng)?shù)刎i的飼養(yǎng)密度、管理水平、防疫水平、環(huán)境等因素有關(guān)。在海南中、大型規(guī)模豬場飼養(yǎng)密度大，病原傳播風(fēng)險(xiǎn)高。大部分調(diào)研中型規(guī)模豬場飼養(yǎng)管理和疫病防控水平弱于大型豬場，缺乏豬日常保健用藥方案。而部分調(diào)研小型豬場豬的飼養(yǎng)密度較低，管理人員責(zé)任心強(qiáng)于中型養(yǎng)豬場，所以出現(xiàn)中型規(guī)模豬場APP抗體陽性率最高的結(jié)果。

3.4 不同生長階段豬PCP的流行情況

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，APP在所有階段的豬均有感染，其中母豬和哺乳仔豬的陽性率較高，分別為47.85%和37.65%，這與桂文龍等[15]對江蘇興化市PCP的血清學(xué)調(diào)查結(jié)果一致。推測可能由于母豬飼喂時間較長，加之管理不嚴(yán)和飼養(yǎng)條件有限，較易感染APP，如果感染沒有引起發(fā)病，就易成為帶菌者，長期以來就容易產(chǎn)生抗體。而哺乳仔豬的陽性率較高，可能是母源抗體和自然感染的雙重結(jié)果。

3.5 不同品種豬PCP的流行情況

從檢測結(jié)果來看，雜交豬的APP抗體陽性率略高于地方豬，如杜長陸三元雜交豬的APP抗體陽性率為35.80%，杜長大三元雜交豬的APP抗體陽性率為34.81%。這可能與雜交豬場對外引種，檢疫不嚴(yán)，引入本病有關(guān)。

綜上所述，PCP在海南省部分豬場普遍存在，養(yǎng)豬場應(yīng)加強(qiáng)對豬場的飼養(yǎng)管理，提高豬的衛(wèi)生環(huán)境和飼養(yǎng)條件，加強(qiáng)對PCP的防控(尤其是母豬和仔豬)，定期進(jìn)行疫苗免疫接種。

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Serological Investigation on Porcine Contagious Pleuropneumonia in Scale Pig Farms of Hainan Province

ZHANG Yan1,2,LIU Hai-long1,LIN Zhe-min1,2,CAO Zong-xi1,2,TAN Shu-yi1,2

(1.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine,HainanAgriculturalAcademy,Haikou,Hainan,571100,China；2.KeyLaboratoryofTropicalAnimalBreedingandDiseaseResearch,Haikou,Hainan,571100,China)

In order to understand the infection of porcine contagious pleuropneumonia(PCP) in scale pig farms of Hainan province,1286pig sera collected in 16different scaled pig farms in Hainan province were tested withActinobacilluspleuropneumoniae(APP) ApxⅣ antibody detection kit.The results showed the total positive rates were 33.90% (436/1286),among which the positive rate was 47.85% (156/326) in sows,37.65% (122/324) in sucking pigs,18.99% (60/316) in weaned pigs and 30.63% (98/320) in fattening pigs.Wenchang city got the highest positive rate，and middle-scaled pig farms got higher positive rate too.All the breeds were infected with APP,the DLL hybrid pigs got the highest positive rate.The above results indicated that the porcine contagious pleuropneumonia occurred in part scale pig farms of Hainan and the PCP control is necessary.

Porcine contagious pleuropneumonia;Actinobacilluspleuropneumoniae; serological investigation

2015-05-28

海南省科研院所技術(shù)開發(fā)專項(xiàng)(KYYS-2014-32)

張 艷(1979-)，女，山西陽城人，副研究員，博士，主要從事動物疫病防治研究。*通訊作者

S858.28

B

1007-5038(2016)01-0129-04