段雪磊，李得鑫，巴翠晶，康建南，李 林，包永占*，史萬玉*

(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,河北保定 071000;2.湖南圣雅凱生物科技有限公司,湖南湘潭 411228)

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絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物對(duì)育肥豬生長性能和糞便微生物菌群的影響

段雪磊1，李得鑫1，巴翠晶1，康建南2，李 林2，包永占1*，史萬玉1*

(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,河北保定 071000;2.湖南圣雅凱生物科技有限公司,湖南湘潭 411228)

為了研究絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物對(duì)育肥豬生長性能和糞便微生物菌群的影響,選取70頭70日齡“杜×長×大”保育豬，隨機(jī)分為7組，每組10頭，試驗(yàn)期28d。其中，Ⅰ組為不用藥對(duì)照組，Ⅱ組～Ⅳ組分別為未發(fā)酵絞股藍(lán)微粉5、10、15g/kg劑量組，Ⅴ組～Ⅶ組分別為絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物5、10、15g/kg劑量組。在試驗(yàn)期第 1天、第28天時(shí)測定各組育肥豬的體重；每天記錄各組育肥豬的采食量，腹瀉豬頭數(shù)；在試驗(yàn)期第 27天時(shí)，采集各組育肥豬的4份糞樣，測定其糞便微生物菌群。結(jié)果顯示，10g/kg絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物能顯著提高育肥豬的平均日增重、平均日采食量(P<0.05)，顯著降低其料肉比(P<0.05)，降低腹瀉率(P>0.05)；10g/kg絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物可顯著提高糞便中的雙歧桿菌、乳酸桿菌的數(shù)量(P<0.05)，顯著降低大腸埃希菌的數(shù)量(P<0.05)。研究表明，絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物能顯著提高育肥豬的生長性能，顯著促進(jìn)腸道中雙歧桿菌、乳酸桿菌的增殖，顯著抑制腸道內(nèi)大腸埃希菌的繁殖，顯著優(yōu)于未發(fā)酵絞股藍(lán)微粉。

絞股藍(lán)；生長性能；糞便微生物菌群；育肥豬

飼料中添加抗生素引發(fā)的細(xì)菌耐藥性、藥物殘留等問題日益引起人們的廣泛關(guān)注。因此，為促進(jìn)畜牧業(yè)健康發(fā)展，保證動(dòng)物性食品安全衛(wèi)生，開發(fā)能夠安全替代抗生素的綠色飼料添加劑便成為迫切要求[1]。中草藥以其綠色、高效、無毒副、無殘留等優(yōu)點(diǎn)，可作為抗生素的有效替代品，逐漸被應(yīng)用到養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)中。

絞股藍(lán)[Gynostemmapentaphyllum(Thunb) Makino]為葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物，具有益氣健脾、化痰止咳、清熱解毒等功效[2]。本試驗(yàn)通過在育肥豬日糧中添加不同劑量的絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物，探討絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物對(duì)育肥豬生長性能和糞便微生物菌群的影響，為絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物作為新型綠色飼料添加劑在養(yǎng)豬業(yè)中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1 材料

1.1.1 試驗(yàn)用動(dòng)物 體重、胎次相近的70日齡“杜×長×大”三元雜交豬70頭，由中食保定畜禽發(fā)展有限公司豬場提供。

1.1.2 試驗(yàn)用中藥 未發(fā)酵絞股藍(lán)微粉、絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物，均由湖南圣雅凱生物科技有限公司負(fù)責(zé)加工生產(chǎn)。

1.1.3 試劑 麥康凱瓊脂、BL瓊脂培養(yǎng)基、MRS瓊脂由青島高科園海博生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)(批號(hào)：20140710、20150515、20150310)。

1.1.4 主要儀器設(shè)備 分析天平(型號(hào)為MP200A)為上海第二天平儀器廠產(chǎn)品；醫(yī)用型潔凈工作臺(tái)(型號(hào)為DL-CJ-2N)為北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司產(chǎn)品；旋渦混合器(型號(hào)為GL-88B)為江蘇省海門市其林貝爾儀器制造有限公司產(chǎn)品；隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱(型號(hào)為PYX-DHS-BY-Ⅱ)為上海龍躍儀器設(shè)備有限公司產(chǎn)品；立式壓力蒸汽滅菌器(型號(hào)為LDZX-50KB)為上海申安醫(yī)療器械廠產(chǎn)品。

1.1.5 基礎(chǔ)日糧 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧配方按照 NRC(1998)育肥豬營養(yǎng)需求并結(jié)合豬場實(shí)際情況進(jìn)行配制，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選用70頭70日齡的“杜×長×大”健康雜交豬，隨機(jī)分為7組，每組10頭豬，雌雄性各半。其中Ⅰ組為不用藥對(duì)照組，Ⅱ組～Ⅳ組分別為未發(fā)酵絞股藍(lán)微粉5、10、15g/kg 劑量組，Ⅴ組～Ⅶ組分別為絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物5、10、15g/kg劑量組。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平( 風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Basic dietary composition and nutritional level(dry basis)

將未發(fā)酵絞股藍(lán)微粉和絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物按上述不同比例添加到育肥豬的日糧中進(jìn)行飼喂。試驗(yàn)期為 28d。

1.2.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)前將豬舍清洗消毒，免疫消毒和驅(qū)蟲程序按豬場常規(guī)方法進(jìn)行。試驗(yàn)豬由同一飼養(yǎng)員管理，保持豬舍干燥衛(wèi)生、環(huán)境溫濕度適宜。試驗(yàn)豬自由采食，自由飲水。

1.2.3 測定指標(biāo)

1.2.3.1 生長性能的測定 于試驗(yàn)期第 1天、第28天清晨 8：00，對(duì)各組豬進(jìn)行空腹稱重，并記錄各組豬的個(gè)體重，用以計(jì)算平均日增重；記下各組豬每天的喂料量和剩料量，計(jì)算出平均日采食量和料重比；試驗(yàn)期間每天察看各組豬的精神狀態(tài)、糞便情況，記下各組豬每天的腹瀉數(shù)，用以計(jì)算腹瀉率。

1.2.3.2 糞便微生物菌群的測定 試驗(yàn)結(jié)束的前1天，各組隨機(jī)采集4頭育肥豬(公母各半)的新鮮糞便，用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行糞便微生物菌群的測定。在潔凈工作臺(tái)內(nèi)，稱取1.0g糞便放到裝有9mL的滅菌生理鹽水試管中，用漩渦混合器混勻后，各管用微量移液器取1mL稀釋液到9mL滅菌生理鹽水試管中，以10倍比例稀釋，以此類推，稀釋到10-7。用微量移液器吸取1mL糞樣的稀釋液，接種到各鑒定培養(yǎng)基中，用曲波棒涂勻。每個(gè)菌種選取3個(gè)稀釋梯度，每個(gè)梯度設(shè)2個(gè)重復(fù)。大腸埃希菌用麥康凱瓊脂培養(yǎng)，梯度為10-3、10-4、10-5，37℃恒溫有氧培養(yǎng) 24h±2h；雙歧桿菌用BL瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)，乳酸桿菌用MRS培養(yǎng)基培養(yǎng)，梯度均為10-5、10-6、10-7，均為37℃恒溫厭氧培養(yǎng) 48h±2h。糞便微生物菌群的數(shù)量用菌落形成單位的常用對(duì)數(shù)值lg(CFU/g)表示。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析 各組數(shù)據(jù)使用SPSS 19.0軟件進(jìn)行處理，以單變量方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物對(duì)育肥豬生長性能的影響

從表2可知，10g/kg、15g/kg絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物組和10g/kg未發(fā)酵絞股藍(lán)微粉組的末重、平均日增重明顯高于其他試驗(yàn)組(P<0.05)，且10g/kg絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物組的末重和平均日增重值最高；10g/kg絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物組的平均日采食量高于其他試驗(yàn)組，且10g/kg絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物組的料重比在所有處理組中數(shù)值最低(P<0.05)。

2.2 絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物對(duì)育肥豬腹瀉率的影響

從表3可知，未發(fā)酵絞股藍(lán)微粉和絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物對(duì)育肥豬腹瀉率均有下降作用。與不用藥對(duì)照組相比，絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物組和10g/kg未發(fā)酵絞股藍(lán)微粉組的腹瀉率在試驗(yàn)期第14、21、28天下降明顯；且10g/kg絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物組的腹瀉率在所有試驗(yàn)組中下降程度最大。

2.3 絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物對(duì)育肥豬糞便微生物菌群的影響

由表4可知，絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物組、10g/kg未發(fā)酵絞股藍(lán)微粉組的糞便大腸埃希菌數(shù)明顯低于其他試驗(yàn)組，差異顯著(P<0.05)，且10g/kg絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物組的大腸埃希菌數(shù)最低(P<0.05)；絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物組、10g/kg未發(fā)酵絞股藍(lán)微粉組的糞便雙歧桿菌數(shù)、乳酸桿菌數(shù)明顯高于不用藥對(duì)照組(P<0.05)，10g/kg絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物組的糞便雙歧桿菌數(shù)、乳酸桿菌數(shù)與5g/kg、15g/kg絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物組和10g/kg未發(fā)酵絞股藍(lán)微粉組相比，差異顯著(P<0.05)。

表2 不同試驗(yàn)組育肥豬的生長性能Table 2 Growth performance of fattening pigs in different experimental groups

表3 不同試驗(yàn)組育肥豬的腹瀉率Table 3 Diarrhea rate of fattening pigs in different experimental groups %

表4 不同試驗(yàn)組育肥豬的糞便微生物菌群Table 4 Fecal microbial flora of fattening pigs in different experimental groups CFU/g

3 討論

3.1 絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物對(duì)育肥豬生長性能的影響

中草藥含有多種生物活性成分，能夠改善飼料營養(yǎng)，刺激動(dòng)物食欲，促進(jìn)動(dòng)物健康生長，提高動(dòng)物體重[3]。益生菌主要包含芽胞桿菌[4]、乳酸桿菌[5]、酵母菌[6]等菌種，能夠平衡動(dòng)物消化道菌群，提高動(dòng)物抗病力、代謝能力、消化吸收能力，起到防病與促生長的作用[7]。益生菌與中草藥之間存在協(xié)同作用，益生菌能夠促進(jìn)中草藥的吸收和利用，而中草藥在口服后，需經(jīng)過消化道微生物的作用后，才能被腸道選擇性吸收[8]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與其他試驗(yàn)組相比，10g/kg絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物能顯著提高育肥豬平均日增重、平均日采食量，降低料重比。因此，10g/kg絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物能顯著提高育肥豬的生長性能。

3.2 絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物對(duì)育肥豬腹瀉率的影響

研究發(fā)現(xiàn)，益生菌能有序地定植于黏膜、皮膚等表面或細(xì)胞之間而形成生物屏障，起到占位保護(hù)、爭奪營養(yǎng)、互利共生或拮抗作用，阻止病原菌的入侵、黏附、定居和增殖，從而對(duì)有害菌的繁殖產(chǎn)生抑制作用[9]。絞股藍(lán)含有皂苷、多糖、黃酮等活性成分，具有一定的抗菌活性[10-11]。絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物能有效降低育肥豬的腹瀉率，可能因益生菌的自身抗病原、抗感染活性與絞股藍(lán)的抗菌活性相結(jié)合，能有效抑制致病菌的生長，增強(qiáng)豬自身機(jī)體的免疫功能，從而降低了育肥豬的腹瀉率。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與其他試驗(yàn)組相比，10g/kg絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物在降低育肥豬腹瀉率上作用效果最好，而各組間育肥豬腹瀉率差異不顯著，可能與各組樣品數(shù)少、用藥時(shí)間短等因素有關(guān)。

3.3 絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物對(duì)育肥豬糞便微生物菌群的影響

當(dāng)動(dòng)物機(jī)體受到各種不良因素的影響，優(yōu)勢菌群會(huì)遭到破壞，腸道微生態(tài)平衡失調(diào)，病原微生物大量繁殖，造成機(jī)體發(fā)病[12]。有研究報(bào)道，益生菌與中草藥配合使用既能促進(jìn)益生菌的增殖，又能提高中草藥吸收利用率[13-14]。在本試驗(yàn)中，與其他試驗(yàn)組相比，10g/kg絞股藍(lán)微粉發(fā)酵物能顯著提高育肥豬糞便中雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量，顯著減低糞便中大腸埃希菌的數(shù)量，有效改善育肥豬腸道微生物菌群，提高腸道消化吸收能力，促進(jìn)豬的健康生長。

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Effects of Fermented Gynostemma Superfine Powder on Growth Performance and Microbial Flora in Feces of Fattening Pigs

DUAN Xue-lei1,LI De-xin1,BA Cui-jing1,KANG Jian-nan2,LI Lin2,BAO Yong-zhan1,SHI Wan-yu1

(1.CollegeofVeterinaryMedicine,AgriculturalUniversityofHebei,Baoding,Hebei,071000,China;2.HunanShengyakaiBiologicalTechnicalCo.,Ltd,Xiangtan,Hunan,411228,China)

To investigate the effects of fermented ultrafine powder ofGynostemmaon grow performance and microbial flora in feces of fattening pigs,a total of 70crossbred ( Duroc×Landrace×Yorkshire) nursery pigs at 70days were selected and randomly divided into 7groups,10pigs each,for 6-week-trial.The piglets in each group had statistically no significantly different body weight.Group Ⅰ was the control group,receiving no herbs.Groups Ⅱ-Ⅳ were fed with 5，10，15g/kg unfermentedGynostemmasuperfine powder in diet.Pigs in group Ⅴ-Ⅶ were given with 5，10，15g/kg fermented ultrafine powder ofGynostemmain diet,respectively.The body weights of pigs were determined in trial 1d,28d; feed intake and diarrhea counts of fattening pigs were recorded daily.4fecal samples of fattening pigs were gathered,and its microbial flora in feces were measured in trail 27d.The results indicated that 10g/kg fermented ultrafine powder ofGynostemmacould increase significantly the average daily feed intake(ADFI),average daily gain(ADG) of fattening pigs(P<0.05),and decrease significantly pig's feed/gain(F/G),reduce pig's diarrhea rate，reduce the diarrhea rate(P>0.05); 10g/kg fermented ultrafine powder ofGynostemmacould increase significantly the number ofBifidobacteriumandLactobacillusin feces of fattening pigs(P<0.05),and decrease significantly the number ofEscherichiacoil(P<0.05).The results suggested that the fermented ultrafine powder ofGynostemmacould significantly increase the growth performance of fattening pigs,and significantly promote the proliferation of intestinalBifidobacterium,Lactobacillus,significantly inhibit the reproduction ofEscherichiacoilin the gut,and have significantly better results than the unfermentedGynostemmasuperfine powder.

Gynostemma; growth performance; microbial flora in feces; fattening pig

2015-07-17

國家公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)“中獸醫(yī)關(guān)鍵技術(shù)研究與示范(201403051)”子課題“豬重大瘟病辨證論治關(guān)鍵技術(shù)研究與示范(201403051-08)”

段雪磊(1988-)，男，河北沙河人，碩士研究生，主要從事中藥藥理學(xué)研究。 *通訊作者

S853.75

A

1007-5038(2016)01-0063-05