梁 爽 （上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院，上海市閔行區(qū) 200240）

4個(gè)家兔群體MC1R基因外顯子的遺傳多樣性分析

梁 爽 （上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院，上海市閔行區(qū) 200240）

為探究黑色素皮質(zhì)素受體1（MC1R）基因外顯子與家兔毛色形成之間的關(guān)系，采用PCR-SSCP高溫變性結(jié)合DNA測(cè)序方法，對(duì)4個(gè)家兔群體（白色獺兔、青紫藍(lán)獺兔、九嶷山兔和閩西南黑兔）的MC1R基因的多態(tài)性進(jìn)行了檢測(cè)，并分析了MC1R基因位點(diǎn)突變與家兔毛色之間的相關(guān)性。結(jié)果表明，MC1R基因外顯子發(fā)現(xiàn)了2個(gè)等位基因、3種基因型，103-108位點(diǎn)存在AGACGG插入。所有的群體均處于哈代-溫伯格平衡，在所選的4個(gè)家兔群體的MC1R基因外顯子中，A等位基因在白色獺兔、青紫藍(lán)獺兔和九嶷山兔群體中表現(xiàn)為優(yōu)勢(shì)等位基因，B等位基因在閩西南黑兔群體中表現(xiàn)為優(yōu)勢(shì)等位基因。A等位基因與白色、蛋白色等淺毛色性狀相關(guān)，B等位基因與黑色、青紫藍(lán)色及海貍色等深毛色性狀相關(guān)。

家兔；黑色素皮質(zhì)素受體1；毛色；遺傳多樣性；PCR-SSCP

哺乳動(dòng)物的毛色類型很多，這主要是由黑色素細(xì)胞產(chǎn)生的黑色素的種類和分布引起。毛色歷來(lái)受到生產(chǎn)者的重視，因?yàn)槊ゎ伾粌H是某一品種的重要標(biāo)記，而且具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，尤其是家兔等的毛皮色。近年來(lái)，因家兔毛皮保暖效果高于羊毛，且不需染色，省去加工費(fèi)用，并減少污染，而日益受到重視。

兔毛纖維顏色的形成及遺傳過(guò)程非常復(fù)雜，而黑色素皮質(zhì)激素受體存在多種形式，可在多種細(xì)胞上發(fā)揮作用，且在黑色素細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)中均能表現(xiàn)出不同的藥理學(xué)特性。其中，將存在于黑色素細(xì)胞中的黑色素皮質(zhì)素受體稱為“黑色素皮質(zhì)素受體1（MClR）”。MC1R是獨(dú)特的、雙功能控制受體，是黑色素細(xì)胞接受動(dòng)物激素調(diào)控的主要受體之一，MC1R基因?yàn)镚蛋白偶聯(lián)受體家族成員，由extension基因座編碼，長(zhǎng)度為310個(gè)氨基酸（牛是317個(gè)、雞是314個(gè)）。MC1R基因只有1個(gè)外顯子，其蛋白有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，為最小的G蛋白偶聯(lián)受體。a-MSH（a-促黑色素細(xì)胞激素）與ACTH （促腎上腺皮質(zhì)激素）是MC1R的配體[1]，它們與黑色素細(xì)胞膜上的MC1R結(jié)合后，使與受體偶聯(lián)的G蛋白由無(wú)活性的二磷酸鳥苷（GDP）型轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘娜姿狲B苷（GTP）型，激活膜上的腺苷酸環(huán)化酶系統(tǒng)，三磷酸腺苷（ATP）轉(zhuǎn)變?yōu)榄h(huán)腺苷酸（cAMP），cAMP進(jìn)一步激活酪氨酸激酶，活化酪氨酸酶（tyrosinase，TYR）催化黑色素細(xì)胞內(nèi)的酪氨酸生成多巴，多巴在黑素體內(nèi)聚積到一定量后釋放黑色素。如黑色素細(xì)胞中的TYR過(guò)量，多巴及多巴醌將通過(guò)各自的通道合成真黑色素。相反，如黑色素細(xì)胞中的TYR過(guò)少，酪氨酸則轉(zhuǎn)化為半胱氨酰多巴，導(dǎo)致偽黑色素的廣泛表達(dá)[2]。MC1R接受a-MSH的信號(hào)，一方面通過(guò)黑色素細(xì)胞內(nèi)c-AMP第二信使參與上調(diào)酪氨酸酶的表達(dá)量，進(jìn)而促進(jìn)真黑色素的合成；另一方面可促進(jìn)黑色素細(xì)胞的增殖[3]，對(duì)動(dòng)物毛色形成起到重要作用。近年來(lái)，關(guān)于MC1R的研究，開(kāi)始著眼于其基因型及基因多態(tài)性方面，并已在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠、牛、馬、犬、雞、豬及人類毛發(fā)顏色及膚色等方面取得了一些顯著成果[4-7]。目前，有關(guān)毛用動(dòng)物MC1R基因多態(tài)性的研究報(bào)道較少。本研究借鑒其他動(dòng)物的研究方法，以閩西南黑兔、青紫藍(lán)獺兔、白色獺兔和九嶷山兔為試驗(yàn)材料，采用單鏈構(gòu)象多態(tài)性（Single Strand Conformation Polymorphism，SSCP）分析技術(shù)，研究了家兔的MC1R基因多態(tài)性，以期解釋家兔在MC1R上的基因分型，并為從分子遺傳學(xué)角度揭示家兔被毛顏色形成機(jī)理提供一定的依據(jù)。且MC1R基因位點(diǎn)的全面檢測(cè)將為家兔品種資源的保存和利用提供參考，今后可利用先進(jìn)的分子生物技術(shù)和基因工程技術(shù)來(lái)完善家兔的基因圖譜。另外，從表型出發(fā)對(duì)MC1R基因進(jìn)一步深入研究，將毛色作為一種遺傳標(biāo)記，利用某種毛色來(lái)直接選育近交系，可利用該動(dòng)物的某種毛色，以迎合人們的喜好培育出各色的寵物兔[8]。因此，有必要進(jìn)一步研究家兔的MC1R外顯子的遺傳多樣性。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

本研究選取4個(gè)群體共354只家兔為試驗(yàn)材料，其中，60只閩西南黑兔來(lái)自福建省農(nóng)科院，94只青紫藍(lán)獺兔和132只白色獺兔均來(lái)自浙江余姚兔場(chǎng)，68只九嶷山兔來(lái)自湖南省寧遠(yuǎn)縣九嶷山兔原種場(chǎng)。所有個(gè)體均為隨機(jī)抽樣，耳緣靜脈采血5 mL，并采用酚/氯仿的方法進(jìn)行總DNA提取[3]。

1.1.2 試劑和器材

試劑包括PCR反應(yīng)的試劑[寶生物工程（大連）有限公司]，PBR322/Marker（天根生物工程公司），氯仿、異丙醇、無(wú)水乙醇等常規(guī)試劑（國(guó)藥有限公司）。

器材包括96孔PCR板、Eppendorff移液器（10-1 000 μL）、IQ凝膠成像系統(tǒng)、離心機(jī)、Eppendorff Thermal Cycler PCR儀、恒溫水浴搖床、NanoDrop ND-1 000濃度測(cè)定儀等。

1.1.3 主要試劑配置

（1）0.5%肝素鈉。0.5 g肝素溶于100 mL生理鹽水。

（2）裂解液。蒸餾水600 mL，尿素120.12 g，1M Tris 100 mL，EDTA-Na-2H2O37.2 g，20% SDS 50 mL，蒸餾水定容至1 000 mL。（3）1 M Tris緩沖液（pH 8.0）。800 mL ddH2O中加入121.1 g Tris堿，HCl調(diào)節(jié)pH至8.0，定容至1 000 mL，分裝后高壓滅菌。（4）10% SDS（500 mL）。將50 g SDS加入400 mL水中，加熱攪拌溶解，定容后高壓滅菌。（5）TE緩沖液（pH 8.0）。10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA。（6）20 mg/mL蛋白酶K。100 mg蛋白酶K溶于5 mL滅菌ddH2O，-20 ℃保存?zhèn)溆?。?）30%丙烯酰胺（丙烯酰胺∶甲叉雙丙烯酰胺=49∶1）。800 mL水中溶解294 g丙烯酰胺，6 g甲叉雙丙烯酰胺，定容至1 L，置于4 ℃保存。（8）10 × TBE。Tris-Base 108 g，硼酸55 g，EDTA 7.444 g，800 mL水中溶解，調(diào)節(jié)pH至8.0，定容至1 L，室溫保存。（9）50×TAE。Tris-Base 242 g，EDTA 37.2 g，57.1 mL醋酸，定容至1 L，室溫保存。（10）10%過(guò)硫酸胺（AP）。l0 mL水中溶解1 g過(guò)硫酸銨，加水至10 mL，置于4 ℃保存。（11）含10%丙烯酰胺PAGE膠（總量30 mL）。30%丙烯酰胺貯存液10 mL，1×TBE 20 mL，TEMED 30μL，10%AP 200μL。（12）100 ng/ μL DNA。分別吸取4個(gè)兔品種100 ng/μL DNA各20μ L，至同一個(gè)1.5 mL 離心管中，用100μL移液器緩慢吹打混勻，4 ℃保存?zhèn)溆谩?.1.4 DNA提取

使用醫(yī)用一次性真空采血管（肝素鋰抗凝）從供試家兔耳緣靜脈采取血樣，每只采樣量為5～10 mL，0.5%肝素鈉抗凝，置冰盒帶回實(shí)驗(yàn)室，低溫低速離心5 min小心去除上層血漿，于-20 ℃低溫保存血細(xì)胞。血液基因組DNA參照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》[9]，略加修改，進(jìn)行抽提，解凍后取紅細(xì)胞20μL于1.5 mL 離心管中，加入500μL兔血裂解液、10μL 10%SDS、10μL蛋白酶K（20 mg/mL），混勻，55℃水浴過(guò)夜；加入等體積Tris飽和酚，搖20 min后，于12 000 rpm離心10 min；移出上清液，加入等體積酚/氯仿/異戊醇（25∶24∶1，V/V/V），搖15 min后，再于12 000 rpm離心10 min；再加入等體積酚/氯仿/異戊醇（25∶24∶1，V/V/V），搖15 min后，于12 000 rpm離心10 min；抽提上清液中加入等體積氯仿∶異戊醇（24∶1，V/V）搖15 min，于12 000 rpm離心10 min；抽提上清液中加入2倍體積的無(wú)水乙醇，輕搖、沉淀DNA。于7 500 rpm離心5 min，小心傾倒出乙醇；70%乙醇洗滌2次。自然干燥，加300μL TE溶解。待DNA完全溶解后，采用NanoDrop ND-1000濃度測(cè)定儀檢測(cè)樣本DNA的濃度和純度，并將其稀釋到100 ng/μL分裝備用。DNA原液置于-20 ℃長(zhǎng)期保存。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 引物設(shè)計(jì)和PCR的擴(kuò)增

本試驗(yàn)參考GenBank中公布的其他物種序列進(jìn)行Blast，利用Primer 5、Oligo 6.0進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。

引物序列為F1：5’-TTGCCATCGCCAAGAACCG-3’

R1：5’-CAGGAAGCAGAGGCTGGACAC-3’

PCR反應(yīng)體系20μL：10×PCR （Mg2+·free） Buffer 2μL，25 mmo1/L MgCl20.8-1.5μL，2.5 mmol/L dNTP 1μL，10μmol/L上下游引物各1μL，Taq DNA聚合酶1.0 U，100 ng/μL DNA模板1μL，ddH2O補(bǔ)齊20μL。

PCR擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性40 s，62 ℃退火40 s，72 ℃延伸40 s，35個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。PCR產(chǎn)物用2%瓊脂糖膠電泳檢測(cè)。1.2.2 瓊脂糖檢測(cè)

稱取0.4 g瓊脂糖于三角瓶中，用40 mL 1×TAE緩沖液在微波爐中加熱溶解；待液體冷卻至60 ℃左右時(shí)，加入1.0μL GoldView核酸染色劑，混合均勻，倒入載膠板中，冷卻10～20 min至完全凝固；小心拔下梳子，將瓊脂糖凝膠放入電泳槽中，注入足量的1×TAE；取5μL待檢測(cè)產(chǎn)物和0.5μL上樣緩沖液，吹打均勻后用微量移液器將樣品混合液和DNA Marker（PB322 Marker）分別移入凝膠孔中；在150 V電壓下電泳15 min左右，結(jié)束后用凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)，有產(chǎn)物條帶可進(jìn)行后續(xù)工作。

1.2.3 PCR-SSCP分析

將5μL PCR產(chǎn)物和5μL上樣緩沖液[98%甲酰胺、0.025%溴酚藍(lán)、0.025%二甲苯青、10 mmol/L EDTA（pH 8.0）、2%甘油]，于98 ℃變性10 min，迅速插入冰中，放置10 min，使之保持單鏈狀態(tài)。樣品在聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行電泳，清洗制膠用的玻璃板、墊條和梳子，晾干后用夾子夾緊玻璃板和墊條間的縫隙，略傾斜放置以備用。配制10%聚丙烯酰胺凝膠，向50 mL錐形瓶中加入10 mL 30%丙烯酰胺貯存液（49∶1）、16 mL 1×TBE緩沖液、200μL 10% AP和30μL TEMED，混均后迅速灌膠（注意灌膠時(shí)不要有氣泡）；當(dāng)灌膠至離玻璃板上約0.5 cm時(shí)停止，小心插入梳子（注意排出氣泡），將玻璃板平放于桌面上，室溫等待20 min左右（視具體情況而定），使膠充分凝固；取出下側(cè)墊條及上端梳子，放入盛1×TBE的電泳槽，沖洗加樣孔（用力適度，勿沖壞點(diǎn)樣孔），于80 V電壓下預(yù)電泳5～10 min；取10 μL PCR產(chǎn)物與3μL上樣緩沖液充分混合，再取5μL混合液，用微量移液器加入點(diǎn)樣孔中；插上電源，于250 V電壓下電泳跑膠等條帶分開(kāi)后，將電壓調(diào)至130 V電泳跑膠8 h左右。電泳結(jié)束后，銀染顯帶。取膠，用固定液固定l0 min，倒掉固定液，用蒸餾水洗2～3次；然后用硝酸銀溶液染色20 min，倒掉染色液，用蒸餾水洗2～3次（注意清洗速度要快）；加入NaOH溶液，3～5 min后加入甲醛，直至出現(xiàn)清晰的條帶染色結(jié)束，用蒸餾水洗2～3次，整個(gè)過(guò)程都在水平搖床上進(jìn)行。裝膠，標(biāo)號(hào)，凝膠成像系統(tǒng)拍照備用。根據(jù)聚丙烯酰胺凝膠電泳條帶結(jié)果，進(jìn)行SSCP分析。

1.3 數(shù)據(jù)分析

統(tǒng)計(jì)基因型頻率、等位基因頻率、多態(tài)信息含量（PIC）、

期望雜合度（He），并對(duì)各群體基因型分布差異進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，采用Align軟件進(jìn)行序列比對(duì)和突變位點(diǎn)的篩查。

2 結(jié)果與分析

2.1 PCR擴(kuò)增及測(cè)序結(jié)果

MC1R基因外顯子PCR產(chǎn)物經(jīng)SSCP檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)3種基因型（AA、AB和BB型）（見(jiàn)圖1）。B等位基因在所擴(kuò)增序列103-108位點(diǎn)存在AGACGG插入（見(jiàn)圖2），從而導(dǎo)致所編碼的多態(tài)鏈可能插入了2個(gè)精氨酸。

圖1 PCR-SSCP產(chǎn)物電泳

圖2 部分外顯子不同基因型測(cè)序結(jié)果注：103-108位點(diǎn)處存在AGACGG插入。

2.2 不同家兔群體的遺傳多樣性分析

在本研究檢測(cè)的群體中，3種基因型在4個(gè)群體中都有被檢測(cè)到，且家兔群體均處于哈代-溫伯格平衡（見(jiàn)表1）。青紫藍(lán)獺兔群體表現(xiàn)為中度多態(tài)，其余3個(gè)群體表現(xiàn)為低度多態(tài)。其中，青紫藍(lán)獺兔期望雜合度和多態(tài)信息含量最高，分別為0.474和0.362；白色獺兔群體期望雜合度和多態(tài)信息含量最低，分別為0.100和0.095。青紫藍(lán)獺兔、閩西南黑兔分別與其他3個(gè)家兔群體之間基因型分布差異達(dá)極顯著（P＜0.01），白色獺兔與九嶷山兔之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）（見(jiàn)表2）。

表1 4個(gè)家兔群體MC1R基因外顯子的遺傳特性

表2 不同群體間基因型分布的卡方檢驗(yàn)

3 結(jié)論與討論

目前，對(duì)哺乳動(dòng)物中的MC1R基因已有部分研究報(bào)導(dǎo)，有人認(rèn)為，MC1R是迄今唯一發(fā)現(xiàn)的控制人部分正常色素色譜的基因[10]；鼠MC1R（E位點(diǎn)）已被識(shí)別，并發(fā)現(xiàn)MC1R位點(diǎn)的編碼區(qū)序列的差異性與毛發(fā)顏色有關(guān)[11]；犬MC1R基因已定位，同時(shí)犬全基因組測(cè)序也已初步完成[12]；MC1R基因是雞黑色素性狀的主效基因，或是與雞控制黑色素性狀的主效基因連鎖[13]；豬MC1R基因定位于6號(hào)染色體短臂末端[14]；牛黑色素皮質(zhì)素受體基因不僅與毛色有關(guān)，而且與牛乳中乳蛋白的含量有關(guān)，其定位在第18號(hào)染色體上[15]；Guiling Dun等利用PCR-RFLP和PCR-SSCP等技術(shù)對(duì)杜洛克、長(zhǎng)白、大白豬的MC1R基因進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)了5個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，其中，5′非編碼區(qū)668位點(diǎn)發(fā)生G（C）突變，其余4個(gè)多態(tài)位點(diǎn)為894位點(diǎn)CC插入，1 318C（T），1 554G（A）和1 197G（A）突變發(fā)生在編碼區(qū)；894位點(diǎn)CC插入導(dǎo)致編碼蛋白過(guò)早終止；所有突變位點(diǎn)無(wú)雜合子出現(xiàn)；并推測(cè)668G（C）、1 318C（T）和1 554G（A）可能與杜洛克的紅色毛存在相關(guān)，而1 197G（A）突變及894位點(diǎn)CC插入可能與長(zhǎng)白、大白豬的白色毛存在相關(guān)[16]；Evagelia A等利用PCR-RFLP技術(shù)對(duì)希臘野豬、家豬雜交后代中MC1R基因突變進(jìn)行測(cè)定發(fā)現(xiàn)，育種場(chǎng)內(nèi)雜交豬種存在16.7%的突變性，而野生型豬只有5%，并認(rèn)為MC1R基因?qū)Σ溉閯?dòng)物毛囊黑色素細(xì)胞有調(diào)節(jié)作用，MC1R基因的多態(tài)性與動(dòng)物的不同毛色有關(guān)[17]。

在本試驗(yàn)所選的4個(gè)家兔群體的MC1R基因外顯子中，A等位基因在白色獺兔、青紫藍(lán)獺兔和九嶷山兔群體中表現(xiàn)為優(yōu)勢(shì)等位基因，B等位基因在閩西南黑兔群體中表現(xiàn)為優(yōu)勢(shì)等位基因。χ2獨(dú)立性檢驗(yàn)結(jié)果表明，所研究的4個(gè)群體均處于哈代一溫伯格平衡狀態(tài)，說(shuō)明這4個(gè)群體可能在人工選育、遺傳漂變等作用下，這些座位處于動(dòng)態(tài)平衡之中。青紫藍(lán)獺兔期望雜合度和多態(tài)信息含量最高，分別為0.474和0.362；白色獺兔群體期望雜合度和多態(tài)信息含量最低，分別為0.100和0.095，這可能與實(shí)際生產(chǎn)中高度選種選育有關(guān)。青紫藍(lán)獺兔、閩西南黑兔分別與其他3個(gè)家兔群體之間基因型分布差異達(dá)極顯著，白色獺兔與九嶷山兔之間無(wú)顯著性差異。閩西南黑兔毛色主要表現(xiàn)為黑色，青紫藍(lán)獺兔毛色主要以青紫藍(lán)色、黑色居多；而白色獺兔毛色主要以蛋白色、白色居多；九嶷山兔毛色主要以純白色、純灰色居多。即表明A等位基因與白色、蛋白色等淺毛色性狀相關(guān)，B等位基因與黑色、青紫藍(lán)色及海貍色等深毛色性狀相關(guān)。但對(duì)于該突變具體如何影響家兔毛色性狀，還需要做進(jìn)一步的深入研究。

[1] Schaffer J V, Biolognia J L.The melanocortin-1 receptor: red hair and beyond[J].Archives of Dermatology,2001, 137(11):1477-1485.

[2] Robbins L S, Nadeau J H, Johnson K R, et al. Pigmentation phenotypes of variant extension locus alle-les result from point mutations that alter MSH receptor function [J].Cell,1993,72(6）：827-834.

[3] LM Fitzgerald, JL Fryer, T Dwyer, et al.Effect of MELANOTAN, [Nle(4), D-Phe(7)]-alpha-MSH, on melanin synthesis in humans with MC1R variant alleles[J]. Peptides,2006,27(2）：388-394.

[4] Kijas J M, Wales R Tornsten A.Melanocortin receptor 1 (MC1R) mutations and coat color in pigs[J]. Genetics, 1998,150(3）：1177-1185

[5] Vage D I, Klungland H, Lu D, et al. Molecular and pharmacological characterization of dominant black coat color in sheep[J].Mammalian Genome,1999,10(1):39-43.

[6] 巴彩鳳,郭多,蘇玉虹,等.犬MC1R基因多態(tài)性的研究[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志,2003,13(6）：325-328.

[7] Marklund L, Moller JM, Sandberg K, et al. A missense mutation in the gene for melanocyte-stimulating hormone receptor (MCIR) is associated with the chestnut coat color in horses[J].Mammalian Genome, 1997,7(12):895-899.

[8] 李順才.兔的毛色遺傳規(guī)律及其應(yīng)用[J].黑龍江動(dòng)物繁殖, 1999(3）：14-16

[9] Sambrook J,Russell D W,著.黃培堂,譯.分子克隆實(shí)驗(yàn)指南(第3版)[M].北京：科學(xué)出版社,2002.

[10] Sturm RA, Teasdele RD, Box NF.Human pigmentation genes: identification, structure and consequences of polymorphic variation[J].Gene,2001,277(1-2）：49-62.

[11] Flanagan N, Healy E, Ray A,et al. Pleiotropic effects of the melanocortin 1 receptor (MC1R) gene on human pigmentation[J].Human Molecular Genetics,2000,9(17): 2531-2537.

[12] Kirkness EF, Bafna V, Halpern AL, et al. The dog genome:survey sequencing and comparative analysis[J]. Science,2003,301(5641）：1898-1903.

[13] 楊水升,鄧學(xué)梅,李寧,等.MC1R是控制雞黑色素形成的候選主效基因[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展,2004,31(6）：500-505.

[14] P Mariani，MJ Moller，B H?yheim, et al. The exten sion coat color locus and the loci for blood group O and tyrosine aminotransferase are on pig chromosome 6.[J]. Journal of Heredity,1996,87(4）：272-276.

[15] 甘海云,李建斌,王洪梅,等.牛黑色素皮質(zhì)素受體1(MC1R)基因與毛色表型的研究[J].遺傳,2007,29(2）：195-200.

[16] G Dun, X Li, H Cao, et al. Variations of Melanocortin Receptor 1 (MC1R) Gene in Three Pig Breeds[J]. Journal of Genetics and Genomics,2007,34(9):777-782.

[17] EA Koutsogiannouli, KA Moutou, T Sarafidou,et al. Detection of hybrids between wild boars (Sus scrofa scrofa) and domestic pigs (Sus scrofa f. domestica) in Greece, using the PCR-RFLP method on melanocortin-1 receptor (MC1R) mutations[J].Mammalian Biology-Zeitschrift fur Saugetierkunde,2010,75(1）：69-73.

2016-05-09