肖曦晨，賈鵬暉，黃 琪，許鳳清，吳德玲

(安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230012)

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知母須根化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)

肖曦晨，賈鵬暉，黃 琪，許鳳清，吳德玲

(安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230012)

為初步探索知母須根中的化學(xué)成分，采用試管反應(yīng)法、紙反應(yīng)法以及薄層色譜試驗(yàn)等方法對(duì)知母須根水提取部位、乙醇提取部位以及石油醚提取部位中的化學(xué)成分進(jìn)行初步探究。結(jié)果表明知母須根中可能含有氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、糖類(lèi)、苷類(lèi)、皂苷、黃酮類(lèi)、酚類(lèi)及鞣質(zhì)、甾體、三萜類(lèi)等化學(xué)成分。為后續(xù)提取、分離和分析實(shí)驗(yàn)提供理論依據(jù)，同時(shí)也為深入探究知母須根生物活性及其綜合開(kāi)發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

知母須根；化學(xué)成分；預(yù)實(shí)驗(yàn)

知母為百合科植物知母(AnemarrhenaasphodeloidesBge.)的干燥根莖，具有清熱瀉火，滋陰潤(rùn)燥等功效[1]?，F(xiàn)代研究結(jié)果表明知母具有抗老年癡呆，降血糖等藥理作用[2-3]。在產(chǎn)地調(diào)研過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，知母須根特別發(fā)達(dá)，占根莖總量的20%～30%左右，而在產(chǎn)地加工過(guò)程中，須根則作為非藥用部位去除。大量的須根被丟棄，造成巨大的資源浪費(fèi)，同時(shí)帶來(lái)嚴(yán)重的環(huán)境污染。目前，人們對(duì)知母須根關(guān)注度不高，其化學(xué)成分研究也鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究以亳州產(chǎn)知母的須根為研究對(duì)象，采用系統(tǒng)預(yù)實(shí)驗(yàn)法對(duì)其須根中含有的主要化學(xué)成分展開(kāi)較為全方位的檢測(cè)，確定其化合物種類(lèi)，為知母須根的后期深入研究及其綜合開(kāi)發(fā)利用提供有益參考。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料

知母須根從安徽亳州十九里鎮(zhèn)采收，由安徽中醫(yī)藥大學(xué)劉守金老師鑒定為百合科植物知母(AnemarrhenaasphodeloidesBge.)的須根。

1.1.2 試劑

石油醚(60～90 ℃)、95%乙醇、蒸餾水、氫氧化鈉、鹽酸、硫酸、氯仿均為分析純。茚三酮試劑、10% α-萘酚乙醇液、斐林試劑、鹽酸羥胺甲醇液、雙縮脲試劑、三氯化鐵試劑、氯化鈉明膠試劑、三氯化鋁試劑、碘化鉍鉀試劑、硅鎢酸試劑、碘化汞鉀試劑、鹽酸-鎂粉試劑、醋酸鎂試劑等試劑均自配。

1.2 供試品溶液的制備

1.2.1 石油醚提取液制備

稱(chēng)取知母須根3 g，用打粉機(jī)粉碎后，緩慢加入石油醚(60～90 ℃)100 mL，密塞，室溫下靜置3 h，濾過(guò)，所得濾液即為石油醚提取液，用作油脂、揮發(fā)油和甾體及三萜類(lèi)成分的檢查。

1.2.2 乙醇提取液制備

稱(chēng)取知母須根6 g，用打粉機(jī)粉碎后，緩慢加入乙醇200 mL，水浴加熱回流1 h，過(guò)濾，得濾液。將濾液分為兩部分，其中一份作為乙醇提取液，供做甲項(xiàng)試驗(yàn)。另一部分減壓濃縮至無(wú)醇味，緩慢加入5% 鹽酸溶液30 mL，充分?jǐn)嚢瑁^(guò)濾，得濾液，供做乙項(xiàng)試驗(yàn)。鹽酸溶液不溶的組分緩慢加入乙酸乙酯30 mL使溶解，并使用5% 氫氧化鈉溶液30 mL充分振搖洗滌2次，堿水層溶液棄至廢液缸，乙酸乙酯層用蒸餾水洗滌至水洗液呈中性，棄去水洗液，減壓濃縮樣品得殘?jiān)?，殘?jiān)偌右掖?5 mL使溶解，供做丙項(xiàng)試驗(yàn)。

1.2.3 水提取液制備

稱(chēng)取知母須根6 g，用打粉機(jī)粉碎后，緩慢加入蒸餾水200 mL，室溫下冷浸過(guò)夜，過(guò)濾取20 mL濾液，用作蛋白質(zhì)、多肽和氨基酸的檢查。未濾去的組分在50～60 ℃的溫度下加熱1 h，過(guò)濾，得濾液，用作苷類(lèi)、糖類(lèi)、有機(jī)酸、酚類(lèi)等項(xiàng)目的檢查。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

知母須根經(jīng)三種提取液制備后采用紙反應(yīng)法，試管反應(yīng)法以及薄層色譜檢識(shí)的方法進(jìn)行化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)。根據(jù)各類(lèi)化學(xué)成分的物理化學(xué)性質(zhì)，選擇其特殊的并且在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下易于觀察的反應(yīng)現(xiàn)象，例如顏色反應(yīng)、沉淀反應(yīng)等，檢測(cè)供試品溶液當(dāng)中可能含有的化合物種類(lèi)。結(jié)果見(jiàn)表1～表3。

2 結(jié)果與討論

采用前述方法對(duì)知母須根的三種提取液分別進(jìn)行化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果歸納如表1所示。

表1 知母須根石油醚提取液預(yù)試結(jié)果

注：“+”表示正反應(yīng)，“-”表示負(fù)反應(yīng)。

經(jīng)檢驗(yàn)，知母須根石油醚提取液中可能含有甾體、三萜類(lèi)等成分。

其中在對(duì)甾體、三萜類(lèi)成分進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，有文獻(xiàn)記載在進(jìn)行此類(lèi)化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)可用醋酐-濃硫酸(Liebermann-Burchard)反應(yīng)法，既將供試品溶于醋酐中，加入濃硫酸-醋酐(1：20)數(shù)滴，靜置數(shù)分鐘，三萜皂苷最后呈紅或紫色，甾體皂苷最終呈藍(lán)紫色。然而在實(shí)際的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，我們發(fā)現(xiàn)此種顏色反應(yīng)現(xiàn)象在實(shí)驗(yàn)室中難以觀察到，遂采取了實(shí)驗(yàn)室中最為常見(jiàn)的薄層色譜檢識(shí)方法，通過(guò)不同展開(kāi)劑體系下各展開(kāi)比例對(duì)照，最終確立了展開(kāi)劑為氯仿-丙酮(6：1)。一方面，薄層檢識(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果易于觀察，另一方面，也避免使用了醋酐這種管制試劑。

表2 知母須根乙醇提取液成分預(yù)試結(jié)果

注：“+”表示正反應(yīng)，“-”表示負(fù)反應(yīng)。

經(jīng)檢驗(yàn)，知母須根乙醇提取液中可能含有黃酮類(lèi)、酚類(lèi)及鞣質(zhì)、甾體、三萜類(lèi)和香豆素及其苷類(lèi)等成分。

通過(guò)對(duì)醇提液預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與其他兩種提取液預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，乙醇提取液中化合物種類(lèi)相對(duì)較多，相同類(lèi)型化合物相對(duì)含量較大，從而揭示乙醇對(duì)知母須根的提取效果最佳，并且乙醇相對(duì)環(huán)保，價(jià)格便宜，綜合諸多因素的考量，我們?cè)诤罄m(xù)實(shí)驗(yàn)當(dāng)中確定用乙醇來(lái)對(duì)知母須根藥材進(jìn)行提取。

表3 知母須根水提取液成分預(yù)試結(jié)果

注：“+”表示正反應(yīng)，“-”表示負(fù)反應(yīng)。

經(jīng)檢驗(yàn)，知母須根水提取液中可能含有氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、糖類(lèi)、苷類(lèi)、皂苷及有機(jī)酸等成分。

通過(guò)文獻(xiàn)檢索，我們可以知道知母當(dāng)中的主要化學(xué)成分為皂苷類(lèi)成分，所以在知母須根的化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)中，我們把對(duì)皂苷類(lèi)成分的檢測(cè)作為首要。其中水提液中對(duì)皂苷類(lèi)成分的檢測(cè)方法區(qū)別于前兩種提取液，主要是因?yàn)樵碥兆鳛闃O性較大的化合物在水提液中的含量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于前兩種提取液，利用其與水混合振搖時(shí)可生成持久性的似肥皂泡沫狀物的特性，從而達(dá)到對(duì)皂苷類(lèi)成分的檢測(cè)。這種方法簡(jiǎn)便可行且實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象易于觀察，同時(shí)避免了含水的供試品進(jìn)行薄層色譜檢識(shí)時(shí)的擴(kuò)散效應(yīng)。

3 結(jié) 論

通過(guò)以上的化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)，揭示知母須根中可能含有黃酮類(lèi)、苷類(lèi)、皂苷、氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、糖類(lèi)、酚類(lèi)及鞣質(zhì)、甾體、三萜類(lèi)等化學(xué)成分。

現(xiàn)代天然藥化研究表明，知母主根中含有大量的三萜類(lèi)及黃酮類(lèi)化學(xué)成分，這些化學(xué)成分大多具有較好的生物活性[4-6]。本實(shí)驗(yàn)研究表明知母須根中含有三萜類(lèi)、黃酮類(lèi)成分，這些成分與知母主根中類(lèi)似，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為知母須根中活性成分的提取、分離、純化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)可為知母須根這一知母產(chǎn)地加工過(guò)程中的廢棄物的綜合開(kāi)發(fā)利用提供理論支撐。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:212.

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[3] 芮雯,吳妍,吉星,等.知母降糖有效部位的提取工藝優(yōu)選及成分分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(22):4-8.

[4] 張玉晶,宋少江,馬志強(qiáng),等中藥知母中的一個(gè)新皂苷[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2008,25(4):279-281.

[5] 邊際,徐綏緒,黃松,等.知母化學(xué)成分的研究[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),1996,13(1):34-40.

[6] 劉卓,隋海娟,閆恩志,等.知母皂苷對(duì)脂多糖引起巨噬細(xì)胞分泌TNF-α和NO的影響及機(jī)制[J].中藥藥理與臨床,2013,29(1):65-67.

Preliminary Test for Chemical Components of FibrousofAnemarrhenaasphodeloides

XIAOXi-chen,JIAPeng-hui，HUANGQi,XUFeng-qing,WUDe-ling

(College of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine, Anhui Hefei 230012, China)

To identify the chemical components of the fibrous ofAnemarrhenaasphodeloides,the mixture was extracted from the fibrous ofAnemarrhenaasphodeloideswith water,95% ethanol and petroleum ether were studied with test tube method,test paper method and TLC method. The results indicated that the fibrous ofAnemarrhenaasphodeloidesmight contain amino acid, polypeptide, protein, saccharides, glycosides, saponins, flavonoids, phenols, tannins, sterides, triterpenes, and so on.It not only provided a theoretical basis for subsequent extraction, separation and analysis experiments,but also laid the foundation for further study of biological activity and application of the fibrous ofAnemarrhenaasphodeloides.

the fibrous ofAnemarrhenaasphodeloides; chemical components; preliminary test

中醫(yī)藥行業(yè)科研專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目(201507002-18)；安徽中醫(yī)藥大學(xué)校級(jí)科研基金面上項(xiàng)目(2016zr012)。

肖曦晨(1991-)，男，碩士研究生，研究方向：中藥活性成分研究。

吳德玲(1973-)，男，教授，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向：中藥活性成分研究、中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)研究和中藥新藥的研究與開(kāi)發(fā)。

R284.1

A

1001-9677(2016)022-0042-03