劉 峰, 俞夢春, 高亞軍*

(1延安大學(xué)附屬醫(yī)院東關(guān)心腦血管病區(qū)神經(jīng)內(nèi)科，延安 716099； 2延安大學(xué)附屬醫(yī)院產(chǎn)一科； *通訊作者，E-mail：gyjwww@163.com)

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Collagen-Ⅵ-alpha-1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及臨床意義

劉 峰1, 俞夢春2, 高亞軍1*

(1延安大學(xué)附屬醫(yī)院東關(guān)心腦血管病區(qū)神經(jīng)內(nèi)科，延安 716099；2延安大學(xué)附屬醫(yī)院產(chǎn)一科；*通訊作者，E-mail：gyjwww@163.com)

目的 探討Collagen-Ⅵ-alpha-1(COL6A1)在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)以及與臨床病理特征的關(guān)系。 方法 采用免疫組織化學(xué)方法檢測35例膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織和22例正常腦組織中COL6A1的表達(dá)，并對其表達(dá)進(jìn)行臨床病理特征分析。 結(jié)果 COL6A1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中陽性表達(dá)率為88.57%(31/35)，而在正常腦組織中僅為9.09%(2/22)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。COL6A1的表達(dá)在不同性別、不同年齡、不同KPS評分的患者中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，但在不同體積的腫瘤及是否完整切除患者中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。COL6A1陽性表達(dá)的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者總生存期明顯短于陰性表達(dá)的患者(P<0.05)。 結(jié)論 COL6A1可能與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，有望成為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤診斷治療的新靶點(diǎn)。

Collagen-Ⅵ-alpha-1； 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤； 生存期

膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(gliobastoma，GBM)是神經(jīng)系統(tǒng)常見的腫瘤，是人類惡性程度最高的腫瘤之一，大約占顱內(nèi)腫瘤的15%。原發(fā)性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的生存期僅在1年左右，手術(shù)及術(shù)后治療效果也不明顯[1]。

Collagen-Ⅵ-alpha-1,簡稱為COL6A1,是膠原蛋白六的組成成分,研究證實(shí)在乳腺癌[2]、肝癌[3]、胰腺癌[4]中都有COL6A1的高表達(dá)，而在正常組織表達(dá)較低甚至不表達(dá)，因此COL6A1可能在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，將可能作為腫瘤診斷治療的新靶點(diǎn)，鑒于在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中COL6A1的研究報(bào)道甚少，本研究進(jìn)行COL6A1表達(dá)的研究，期望能在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的診斷治療中起到一些作用。

1 材料和方法

1.1 材料

收集延安大學(xué)附屬醫(yī)院2009-01～2013-10經(jīng)手術(shù)病理檢查的存蠟塊標(biāo)本，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤手術(shù)標(biāo)本35例，正常腦組織標(biāo)本22例，正常腦組織為腦外傷或顱內(nèi)減壓腦組織等。COL6A1抗體(SC9855)購自Santa公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué) 組織標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，經(jīng)過連續(xù)切片，分別行HE染色及COL6A1抗原標(biāo)記。免疫組化按照標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行，采用PV-6000兩步法，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。用已知陽性切片做陽性對照，設(shè)PBS代替一抗做陰性對照。

1.2.2 免疫組化結(jié)果判定 COL6A1以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒為陽性，隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野，計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)：無細(xì)胞著色為0分，陽性細(xì)胞數(shù)<10%為1分，陽性細(xì)胞數(shù)10%-50%為2分，陽性細(xì)胞數(shù)50%-80%為3分，陽性細(xì)胞數(shù)>80%為4分；染色強(qiáng)度按著色程度分為：無棕黃色為0分，微弱黃色為弱陽性為1分，淺棕色為2分，棕褐色為3分。將上述兩種評分之和作為判斷標(biāo)準(zhǔn)，總分≥4分為陽性表達(dá)。

1.2.3 KPS評分 術(shù)前采用KPS評分對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者術(shù)前功能狀態(tài)進(jìn)行評價(jià)，使用Karnofsky(卡式，KPS)評分標(biāo)準(zhǔn)，KPS<60分為依賴級，生活需要幫助，KPS≥80分為非依賴級，表示患者生活能夠自理。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用χ2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。生存期的計(jì)算從手術(shù)日期起到隨訪日期或死亡日期為止。截止隨訪日期為2016年5月1日，35例膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者全部死亡。應(yīng)用Kaplan-Meier法進(jìn)行單因素生存分析，差異顯著性檢驗(yàn)采用時(shí)序檢驗(yàn)(Log rank test)。

2 結(jié)果

2.1 COL6A1 在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)

COL6A1表達(dá)在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞胞質(zhì)，免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示， 35例膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中COL6A1陽性表達(dá)31例(88.57%)，在正常腦組織中COL6A1表達(dá)率僅為9.09%(見表1，圖1)。免疫組織化學(xué)染色顯示COL6A1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和正常腦組織的表達(dá)有顯著的差異(P<0.05)。

表1 COL6A1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及正常腦組織中的表達(dá) 例(%)

Table 1 Expression of COL6A1 in GBM and normal brain tissues cases(%)

分組n陽性陰性χ2P膠質(zhì)母細(xì)胞瘤3531(88.57) 4(11.43)35.008<0.05正常腦組織222(9.09)20(90.91)

2.2 COL6A1的表達(dá)與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤臨床病理特征之間的關(guān)系

COL6A1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)，在不同年齡、不同性別、不同KPS評分的患者中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，在不同體積的腫瘤及是否完整切除患者中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表2)。腫瘤體積大及未完整切除的患者中C0L6A1的表達(dá)率高。

2.3 生存分析

Kaplan-Meier生存分析結(jié)果顯示，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織中表達(dá)COL6A1的患者生存時(shí)間與不表達(dá)者相比明顯縮短，有顯著性差異(χ2=12.157，P<0.05，見圖2)。

圖1 COL6A1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織及正常腦組織中免疫組織化學(xué)的表達(dá)Figure 1 Immunohistochemical expression of COL6A1 in GBM and normal brain tissues

表2 COL6A1的表達(dá)與GBM臨床病理因素的關(guān)系 (例)

Table 2 Correlation of COL6A1 expression with clinicopathological characteristics of GBM (cases)

項(xiàng)目n陽性陰性雙側(cè)檢驗(yàn)PP性別1.000>0.05 男19172 女16142年齡0.619>0.05 ≤55歲15141 >55歲20173KPS評分1.000>0.05 <7014122 ≥7021192腫瘤體積0.026<0.05 ≤5cm15114 >5cm20200完全切除0.014<0.05 是1394 否22220

圖2 Kaplan-Meier生存分析COL6A1表達(dá)與GBM患者總生存時(shí)間的關(guān)系Figure2 Kaplan-Meier survival curves of the GBM patients with positive or negative COL6A1 expression

3 討論

COL6A1是膠原蛋白六的組成成分,膠原蛋白六由al、a2和a3多肽鏈組成。最近的研究鑒定到了3個(gè)其他膠原六的亞基COL6A4,COL6A5和COL6A6[5,6]，

膠原蛋白六有助于細(xì)胞外基質(zhì)形成纖維網(wǎng)狀,并與其他組分一起支持細(xì)胞結(jié)構(gòu)[7],C0L6A1是細(xì)胞連接蛋白,是胞外基質(zhì)的主要組成部分,主要分布于骨骼、平滑肌和皮膚組織。膠原蛋白六參與調(diào)控細(xì)胞凋亡、自噬、增殖與血管生成、纖維化和炎癥進(jìn)程等相關(guān)。C0L6A1在多種腫瘤中表達(dá)量較高,如在皮膚纖維瘤和青少年血管纖維瘤中表達(dá)量上調(diào)[2]。膠原蛋白六高表達(dá)可促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移[2]。在胰腺癌細(xì)胞系中COL6A1顯著升高,在胰腺癌患者的血清中相較健康人顯著增高,提示C0L6A1可作為潛在的胰腺癌血清診斷標(biāo)志物[4]。

本研究顯示C0L6A1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中過表達(dá)，表達(dá)率為88.57%，而在正常腦組織表達(dá)率僅為9.09%，這與Turtoi等[8]的研究結(jié)果是一致的，其研究還顯示C0L6A1在不同級別的膠質(zhì)瘤中均存在表達(dá)，但C0L6A1表達(dá)與膠質(zhì)瘤級別不具有相關(guān)性，與膠質(zhì)瘤的預(yù)后具有相關(guān)性。Fujita等[9]研究也顯示COL6A1在星型膠質(zhì)瘤中存在過表達(dá)，因此C0L6A1在膠質(zhì)瘤中過表達(dá)的特性使其可以被用作抗腫瘤治療的新靶點(diǎn), 對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的治療具有很大的理論和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

膠質(zhì)母細(xì)胞瘤作為大腦好發(fā)的腫瘤[10]，好發(fā)于大腦半球皮質(zhì)下白質(zhì)，可發(fā)生于任何年齡，但常累及成人，病程短，惡性程度高，播散轉(zhuǎn)移快[11]。本研究顯示C0L6A1的表達(dá)在不同性別、不同年齡、不同KPS評分的患者中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但C0L6A1的表達(dá)在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的不同腫瘤體積及腫瘤是否完整切除間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，腫瘤體積大及未完整切除的患者中C0L6A1的表達(dá)率高，同時(shí)C0L6A1陽性表達(dá)的患者生存期明顯縮短,與預(yù)后相關(guān)。Hou等[12]研究顯示在宮頸癌中COL6A1過表達(dá)，與預(yù)后亦顯著相關(guān)。Chiu等[3]學(xué)者曾研究C0L6A1在肺癌中的作用，發(fā)現(xiàn)在肺癌細(xì)胞中敲除C0L6A1可以降低細(xì)胞遷移和侵襲能力，過表達(dá)C0L6A1后其侵襲和遷移能力得到增強(qiáng)。Zhu等[13]學(xué)者研究顯示COL6A1在前列腺癌中過表達(dá)，并且能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖。因此C0L6A1可能在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，推測C0L6A1的表達(dá)可能與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的惡性增殖和侵襲等生物學(xué)行為密切相關(guān)。有研究指出[14]，C0L6A1促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移的機(jī)制可能是通過改變ECM的特性,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞運(yùn)動。因此C0L6A1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中過表達(dá)作用腫瘤細(xì)胞的機(jī)制值得進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究初步探討了C0L6A1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中表達(dá)的意義，及其與臨床病理、預(yù)后的關(guān)系，同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)它在乳腺癌、肝癌、肺癌[3]等多種腫瘤中過表達(dá)，提示它是一個(gè)有潛在挖掘價(jià)值的腫瘤診斷治療的新靶點(diǎn)。對于C0L6A1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中表達(dá)機(jī)制的進(jìn)一步探討將對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的診斷治療有著重要意義。

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Expression of Collagen-Ⅵ-alpha1 in gliobastoma and its clinical significance

LIU Feng1, YU Mengchun2, GAO Yajun1*

(1DepartmentofNeurology,CardiocerebrovascularAreaofDongguan,AffiliatedHospitalofYan’anUniversity,Yan’an716099,China;2DepartmentofObstetrics,AffiliatedHospitalofYan’anUniversity;*Correspondingauthor,E-mail:gyjwww@163.com)

ObjectiveTo explore the expression of Collagen-Ⅵ-alpha-1(COL6A1) in the gliobastoma(GBM) and analyze its relationship with the clinical pathological parameters of GBM.MethodsCOL6A1 expression was measured in 35 cases of GBM and 22 casess of normal brain tissues by immnohistochemistry. The relationships between the expression of COL6A1 and the clinical pathological parameters of GBM were analyzed.ResultsThe positive expression rate of COL6A1 in GBM tissues was 88.57%, significantly higher than that in normal brain tissue(P<0.05). Positive expression of COL6A1 was not correlated with age,gender, and KPS assessment

劉峰，男，1982-09生，本科，主治醫(yī)師，E-mail：liufengbaotaqu@163.com

2016-08-29

R739.4

A

1007-6611(2016)11-1016-04

10.13753/j.issn.1007-6611.2016.11.014