王享利

（中南大學(xué)湘雅醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410008）

論著

白藜蘆醇對(duì)人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3增殖及TGF-β1/Smad2信號(hào)通路影響研究

王享利

（中南大學(xué)湘雅醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410008）

目的探討白藜蘆醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3增殖及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）/Smad2信號(hào)通路的影響。方法不同濃度白藜蘆醇干預(yù)體外培養(yǎng)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3白藜蘆醇不同時(shí)間。MTT檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)PC-3細(xì)胞生長(zhǎng)情況的影響，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的變化情況，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和蛋白免疫印跡法（Western blot）分別檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TGF-β1和Smad2 mRNA和蛋白表達(dá)水平的變化情況。結(jié)果MTT結(jié)果顯示白藜蘆醇顯著抑制了前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。流式細(xì)胞結(jié)果表明白藜蘆醇明顯降低了前列腺癌細(xì)胞S期含量而增加了G0/G1期含量。而TGF-β1和其下游因子Smad2的mRNA和蛋白水平的表達(dá)也明顯受到白藜蘆醇的抑制，且這種抑制作用呈濃度一時(shí)間依賴(lài)性。結(jié)論白藜蘆醇可能夠通過(guò)阻斷TGF-β1/Smad2信號(hào)通路抑制前列腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)前列腺癌。

白藜蘆醇；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1；前列腺癌

前列腺癌是一種常見(jiàn)的老年男性疾病，其發(fā)病率具有地區(qū)差異性，在歐美，前列腺癌在腫瘤中是致男性死亡的第2病因，僅次于肺癌[1]。東亞地區(qū)發(fā)病率較低，但有增高趨勢(shì)，我國(guó)前列腺癌的發(fā)病率較20世紀(jì)60年代前明顯增高[2]。前列腺癌的細(xì)胞生物學(xué)行為極不確定，疾病自然進(jìn)展過(guò)程存在極大的個(gè)體差異性。有的患者短期內(nèi)迅速死亡，而有的則預(yù)后較好，較長(zhǎng)時(shí)間疾病也不會(huì)有太大進(jìn)展，患者可以存活較長(zhǎng)時(shí)間[3]。因此尋找前列腺癌治療的新方法具有重要臨床意義。GOTZMANN等研究發(fā)現(xiàn)[3]，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)

因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）在前列腺上皮細(xì)胞惡變?yōu)榍傲邢侔┘?xì)胞過(guò)程中發(fā)揮重要作用。因此，靶向TGF-β1是前列腺癌治療的潛在有效靶點(diǎn)。（無(wú)環(huán)）單萜白藜蘆醇是在檸檬、天竺葵及其他從醫(yī)用植物中提取精油中含量極低的天然化合物。白藜蘆醇具有抗氧化、抗微生物和抗炎活性[4]。此外，白藜蘆醇還能通過(guò)靶向細(xì)胞周期和凋亡過(guò)程抑制多種人類(lèi)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)[5-7]。本研究主要探討白藜蘆醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞株生長(zhǎng)的影響及其與TGF-β1信號(hào)通路的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源

1.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3購(gòu)自中南大學(xué)細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)中心，細(xì)胞在37℃，含5%二氧化碳CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)，用含10%小牛血清的DMEM高糖培基（美國(guó)Hyclone公司）培養(yǎng)，培養(yǎng)基中分別加入終濃度為100 mg/L的鏈霉素與青霉素，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)24 h。細(xì)胞用0.05%胰蛋白酶-乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）消化傳代，選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 試劑來(lái)源白藜蘆醇購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，Trizol、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR）試劑盒購(gòu)自大連寶生物公司，偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluo ride，PVDF）膜購(gòu)自美國(guó)Millipore公司，抗體TGF-β1和Smad家族成員2（Smad family member 2，Smad2）購(gòu)自美國(guó)Santacruz公司。

1.2 方法

1.2.1 四甲基噻唑藍(lán)（Thiazolyl blue tetrazolium bromide，MTT）法檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3生長(zhǎng)的影響PC-3細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后，消化計(jì)數(shù)，以105個(gè)/ml接種于96孔板，培養(yǎng)過(guò)夜后，分別用1、2、4、6、8、16mmol的白藜蘆醇干預(yù)PC-3細(xì)胞24、48和72 h，對(duì)照組細(xì)胞僅加入相應(yīng)培養(yǎng)基。藥物干預(yù)完成后，棄去培養(yǎng)基，加入200 ml 5 mg/ml MTT繼續(xù)培養(yǎng)4 h，最后用50 ml DMSO處理，酶標(biāo)儀測(cè)定OD450 nm時(shí)細(xì)胞吸光值（optical density，OD），然后計(jì)算抑制率。抑制率=（1-藥物干預(yù)組OD/對(duì)照組OD）×100%。并在倒置顯微鏡下觀察未經(jīng)白藜蘆醇處理及經(jīng)白藜蘆醇處理的PC-3細(xì)胞形態(tài)。

1.2.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3細(xì)胞周期的影響1、2、4、6、8和16 mmol的白藜蘆醇干預(yù)PC-3細(xì)胞48 h（根據(jù)MTT結(jié)果篩選出的最佳作用時(shí)間點(diǎn)）后，棄去培養(yǎng)基，PBS漂洗細(xì)胞2次，4%多聚甲醛固定過(guò)夜，PI染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)其細(xì)胞周期。

1.2.3 RT-PCR檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3細(xì)胞TGF-β1和Smad2 mRNA表達(dá)的影響采用Oligo 7.0軟件設(shè)計(jì)TGF-β1、Smad2及β-actin引物，并交由美國(guó)Invitrogen公司合成。引物序列如下：TGF-β1，5′-CCTTGCTGGACCGCAACAAC-3′（正向），5′-CAGCAGCCGGTTACCGAC-3′（反向）；Smad2，5′-CAGGTTCCAGCTATGGAGC-3′（正向），5′-TTCATGGCCGAATCCCAT-3′（反向）；β-actin，5′-C AGGTCATACTCCTGCGGCTG-3′（正向），5′-CGGGA CCTCACTGACTACCTC-3′（反向）。Trizol提取細(xì)胞tRNA，采用易步發(fā)RT-PCR試劑盒擴(kuò)增。擴(kuò)增結(jié)束后，PCR產(chǎn)物行1.8%瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)下觀察電泳結(jié)果，并進(jìn)行灰度值分析。

1.2.4 蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3細(xì)胞TGF-β1和Smad2蛋白表達(dá)的影響白藜蘆醇作用PC-3細(xì)胞48 h后，收集細(xì)胞，加入1 ml細(xì)胞裂解液，超聲粉碎，離心，取上清液。分別取100μg樣品蛋白/孔上樣，SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白，濕轉(zhuǎn)1 h（4℃，100 v），5%脫脂奶粉封閉2 h，然后分別用β-actin（1∶1 000），TGF-β1（1∶500）、Smad2（1∶500）一抗4℃平搖過(guò)夜，辣根過(guò)氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記二抗（1∶1 000）避光孵育2 h，顯色液顯色，顯影，定影，掃描條帶并行分析，以目的條帶與β-actin條帶吸光度的比值作為目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間均值比較用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析或單因素方差分析，兩兩比較用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 白藜蘆醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3生長(zhǎng)及形態(tài)的影響

1、2、4、8及16 mmol白藜蘆醇干預(yù)組分別與對(duì)照組干預(yù)后24、48和72 h OD450值比較，采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析，結(jié)果：①1、2、4 mmol白藜蘆

醇干預(yù)組不同時(shí)間點(diǎn)間OD450值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.176、1.482及1.153，P=0.284、0.462及0.517），8和16 mmol白藜蘆醇干預(yù)組不同時(shí)間點(diǎn)間OD450值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=10.873、11.285，P=0.001、0.000）；②8和16 mmol白藜蘆醇干預(yù)PC-3細(xì)胞72 h，OD450值分別（0.747±0.138）和（0.426± 0.106），低于對(duì)照組（1.125±0.589），經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.694、4.826；P=0.003、0.001）（見(jiàn)圖1和表1）。MTT結(jié)果表明，白藜蘆醇以時(shí)效性和劑效性抑制PC-3生長(zhǎng)。

在不同濃度白藜蘆醇干預(yù)的細(xì)胞分別于培養(yǎng)24，48和72 h后，于倒置相差顯微鏡下觀察，人前列腺癌PC-3細(xì)胞經(jīng)白藜蘆醇處理后出現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)改變。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，比較白藜蘆醇藥物作用組和對(duì)照組，未受到白藜蘆醇干預(yù)的細(xì)胞均呈單層細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞間結(jié)構(gòu)緊密，細(xì)胞增殖生長(zhǎng)（見(jiàn)圖2A）。隨藥物干預(yù)的劑量和時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞形態(tài)逐漸變圓，細(xì)胞間間隙增大，細(xì)胞密度逐漸變小，細(xì)胞內(nèi)中毒顆粒增多，折光度下降，部分細(xì)胞喪失貼壁能力，懸浮在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，隨機(jī)視野可見(jiàn)細(xì)胞密度明顯減少。在相同的時(shí)間內(nèi)，細(xì)胞對(duì)不同濃度藥物的反應(yīng)存在差異。隨白藜蘆醇藥物濃度的增大，前列腺癌PC-3細(xì)胞脫落的比例增多，細(xì)胞碎裂的比例明顯增多。上述結(jié)果提示白藜蘆醇可以抑制PC-3細(xì)胞的增殖（見(jiàn)圖2B～D）。

2.2 白藜蘆醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3細(xì)胞周期的影響

方差分析顯示，各組間G0/G1、S及G2/M其細(xì)胞均有差異，與對(duì)照組比較，當(dāng)白藜蘆醇濃度為1、2、4 mmol/L時(shí)，處于G0/G1的PC-3細(xì)胞的比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；當(dāng)白藜蘆醇濃度為8 mmol/L時(shí)，G0/G1期PC-3細(xì)胞的比例較對(duì)照組增加（P=0.006），而S期和G2/M的比例則下降（P=0.007和0.012）（見(jiàn)表2）。

2.3 白藜蘆醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3 TGF-β1和Smad2 mRNA和蛋白表達(dá)的影響

RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，白藜蘆醇以時(shí)間劑量效應(yīng)抑制PC-3 TGF-β1和Smad2 mRNA和蛋白表達(dá)（見(jiàn)圖2～4）。

圖1 白藜蘆醇干預(yù)對(duì)前列腺癌細(xì)胞株增殖的影響

表1 白藜蘆醇干預(yù)不同時(shí)間OD450值比較（mol/L，±s）

表1 白藜蘆醇干預(yù)不同時(shí)間OD450值比較（mol/L，±s）

干預(yù)時(shí)間16 24 h1.342±0.8721.185±0.2981.174±0.1761.152±0.2530.947±0.1180.826±0.214 48 h1.175±0.7741.164±0.3891.095±0.2260.896±0.1420.753±0.2270.617±0.118 72 h1.125±0.5891.162±0.2540.935±0.1750.784±0.2160.747±0.1380.426±0.106白藜蘆醇干預(yù)濃度0 1 2 4 8

表2 不同濃度白藜蘆醇對(duì)PC-3細(xì)胞周期的影響（±s）

表2 不同濃度白藜蘆醇對(duì)PC-3細(xì)胞周期的影響（±s）

注：t值指不同濃度組白藜蘆醇分別與對(duì)照組比較；F值指所有處理組不同細(xì)胞周期的組內(nèi)比較

組別細(xì)胞周期G0/G1t值P值St值P值G2/Mt值P值對(duì)照組60.9±7.224.8±4.714.3±6.1 1 mmol/l62.4±6.30.5440.87224.9±3.80.6150.74612.7±2.80.5320.885 2 mmol/l 4 mmol/l 8 mmol/l 16 mmol/l F值P值63.8±5.2 68.5±7.3 74.3±2.1 81.6±8.2 8.947 0.002 0.627 1.728 6.894 9.172 0.744 0.048 0.006 0.001 23.4±6.8 18.3±2.4 15.2±1.7 11.3±1.6 10.726 0.001 0.789 3.584 6.672 9.384 0.522 0.027 0.007 0.001 12.8±1.4 13.2±2.1 10.5±3.2 7.1±2.6 9.835 0.001 0.872 3.573 4.682 10.465 0.392 0.028 0.012 0.001

圖2 PC-3細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察（×200）

圖4 白藜蘆醇對(duì)PC-3 TGF-β1和Smad2 mRNA表達(dá)的影響

3 討論

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）在胚胎形成、細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控、胞外基質(zhì)分泌、血管生成及免疫調(diào)節(jié)等多種生理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。動(dòng)脈粥樣硬化和臟器纖維化與TGF-β1表達(dá)異常密切相關(guān)，特別是TGF-β1與癌癥的相關(guān)性近年來(lái)成為學(xué)者們關(guān)注的焦點(diǎn)[8]。Smads是一類(lèi)十分重要的轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)信號(hào)分子家族，其中Smad2識(shí)別和結(jié)合上游信號(hào)分子，并將其轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核內(nèi)，并激活TGF-β1/Smads信號(hào)通路，因此Smad2是TGF-β1/Smads信號(hào)通路至關(guān)重要的調(diào)控分子。Smad2表達(dá)沉默會(huì)導(dǎo)致TGF-β1/Smads信號(hào)通路發(fā)生紊亂[9]。

TGF-β1/Smads信號(hào)通路在腫瘤不同階段發(fā)揮不同的作用。腫瘤形成時(shí)，TGF-β1/Smads信號(hào)通路抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。在該階段，一旦參與TGF-β1/ Smads信號(hào)通路的信號(hào)分子表達(dá)異常，腫瘤細(xì)胞既能捕捉到該信息，從而“逃避”TGF-β1/Smads信號(hào)通路的抑制作用。而當(dāng)腫瘤處于進(jìn)展期時(shí)，TGF-β1/ Smads信號(hào)通路發(fā)揮促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，并增強(qiáng)腫瘤的侵襲性和惡性程度[10]。

丁國(guó)芳等[11]研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1和Smad2在前列腺癌組織中的表達(dá)高于正常前列腺組織上皮組織，TGF-β1和Smad2基因過(guò)表達(dá)可能在HCC的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮作用。李偉等[12]研究表明，TGF-β可以上調(diào)PC-3細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)，氯化鋰可以增強(qiáng)TGF-β上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的作用，前列腺癌PC-3細(xì)胞中Wnt信號(hào)通路與TGF-β信號(hào)相互激活，對(duì)前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展有一定意義。孔麗等[13]則研究證實(shí)，TGF-β1/Smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被抑制，使TGF-β1介導(dǎo)的抗增殖信號(hào)不能正常下傳，可能是前列腺癌發(fā)生的機(jī)制之一。本研究提示TGF-β1/Smad2信號(hào)通路是前列腺癌發(fā)生、發(fā)展的重要參與者，是前列腺癌治療的潛在有效靶點(diǎn)。

白藜蘆醇已被證實(shí)能夠抑制多種人類(lèi)腫瘤的生長(zhǎng)，其主要通過(guò)抑制多種腫瘤生長(zhǎng)因子、腫瘤代謝酶、轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子及抗凋亡蛋白表達(dá)發(fā)揮腫瘤抑制作用[14]。本研究首先采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞PC-3生長(zhǎng)的影響，結(jié)果證實(shí)白藜蘆醇以時(shí)間和劑量依賴(lài)效應(yīng)抑制前列腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)，這一結(jié)果與以往研究結(jié)果一致[15]。此外，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇能夠抑制S期腫瘤細(xì)胞比例，使多腫瘤細(xì)胞發(fā)生G0/G1期阻滯。而Western blot和RT-PCR實(shí)驗(yàn)表明，白藜蘆醇能夠降低前列腺癌細(xì)胞中TGF-β1和Smad2蛋白和mRNA表達(dá)。本結(jié)果提示，白藜蘆醇能夠抑制前列腺癌細(xì)胞TGF-β1/Smad2信號(hào)通路活性，且該抑制作用有濃度-時(shí)間依賴(lài)性。

總之，白藜蘆醇能夠抑制前列腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)，是其發(fā)生G0/G1期阻滯。其可能機(jī)制是白藜蘆醇通過(guò)抑制TGF-β1和Smad2表達(dá)而阻斷TGF-β1/Smad2信號(hào)通路，本文研究結(jié)果為前列腺癌臨床治療提供了新思路。但是，白藜蘆醇抑制TGF-β1/Smad2信號(hào)通路具體作用機(jī)制仍需進(jìn)行深入探討，并需進(jìn)行體

內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，以便為將白藜蘆醇作為預(yù)防或治療前列腺癌的有效藥物提供最為充分依據(jù)。

[1]赫捷,趙平,陳萬(wàn)青.2012中國(guó)腫瘤登記年報(bào)[M].北京:軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社,2012:85-87.

[2]褚志強(qiáng),吳向未,楊宏強(qiáng),等.原發(fā)性前列腺癌手術(shù)治療的生存率分析及影響因素研究[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2013,29(5):787-789.

[3]GOTZMANN J,HUBER H,THALLINGER C,et al.Hepatocytes convert to a fibroblastoid phenotype through the cooperation of TGF-beta 1 and Ha-Ras:steps towards invasiveness[J].Journal of Cell Science,2002,115(6):1189-1202.

[4]LAPCZYNSKI A,BHATIA S P,FOXENBERG R J,et al.Fragrance material review on resveratrol[J].Food&Chemical Toxicology An International Journal Published for the British Industrial Biological Research Association,2008,46(11):S160-S170.

[5]MADANKUMAR A,JAYAKUMAR S,GOKULADHAS K,et al. Resveratrol modulates tongue and hepatic phaseⅠand phaseⅡconjugation activities and may contribute directly to the chemopreventive activity against experimental oral carcinogenesis[J].European Journal of Pharmacology,2013,705(20):148-155.

[6]JIN X,SUN J,MIAO X,et al.Inhibitory effect of resveratrol in combination with gemcitabine on proliferation of BXPC-3 human pancreatic cancer cells[J].Journal of International Medical Research,2013,41(4):993-1001.

[7]GALLE M,CRESPO R,KLADNIEW B R,et al.Suppression by resveratrol of the growth of A549 human lung adenocarcinoma cells and inhibition of the mevalonate pathway in culture and in vivo:potential use in cancer chemotherapy[J].Nutrition&Cancer, 2014,66(5):888-895.

[8]王芙蓉,李云霞.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2008,14(9):1318-1320.

[9]OTA K,QUINT P,RUAN M,et al.TGF-?induces Wnt10b in osteoclasts from female mice to enhance coupling to osteoblasts[J]. Endocrinology,2013,154(10):3745-3752.

[10]劉錕榮,韋宜賓,陳國(guó)忠.Wnt/β-catenin、TGF-β/Smads及RAS/ MARK信號(hào)通路與大腸癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J].廣東醫(yī)學(xué),2014, 8(17):2785-2788.

[11]丁國(guó)芳,李繼承,徐銀峰.前列腺癌nm23H1 mRNA、TGF-β1 mRNA表達(dá)及其與腫瘤轉(zhuǎn)移、生存率的相關(guān)性研究[J].分子細(xì)胞生物學(xué)報(bào),2006,39(6):544-552.

[12]李偉,辛殿祺,郭應(yīng)祿.前列腺癌PC-3細(xì)胞中Wnt信號(hào)通路與TGF-β信號(hào)通路相互調(diào)節(jié)[J].中華泌尿外科雜志,2006,27(S1): 140-141.

[13]孔麗,姚樹(shù)坤,張瑞星,等.原發(fā)性前列腺癌患者血清TGF-β1、IL-12、IFNγ等細(xì)胞因子水平及臨床演變的關(guān)系[J].臨床肝膽病雜志,2006,22(4):247-249.

[14]付招娣,曹玉,王凱風(fēng),等.白藜蘆醇對(duì)癌的化學(xué)預(yù)防作用[J]. Chinese Journal of Cancer,2004,23(8):869-873.

[15]POLO M P,CRESPO R,BRAVO M G.Resveratrol and simvastatin show a synergistic effect on a human hepatocarcinoma cell line[J].Cell Biochemistry&Function,2011,29(6):452-458.

（張蕾 編輯）

Effect of resveratrol on proliferation and TGF-β1signaling pathway on human prostate cancer cell line PC-3

Xiang-li Wang
(Xiangya Hospital,Central South University,Changsha,Hunan 410008,China)

Objective To observe the effect of resveratrol on proliferation and TGF-β1signaling pathway of human prostate cancer cell line PC-3.Methods Human prostate cancer cell line PC-3 was cultured and treated with resveratrol at different concentrations and different time points．The effect of resveratrol on PC-3 cell proliferation was studied by means of MTT.The cell cycle was detected with flow cytometry.RT-PCR and Western blot were used to detect the expressions of TGF-β1and Smad2 at mRNA and protein levels.Results The viability of Huh-7 cells treated with resveratrol was obviously decreased.Analysis of the cell cycle revealed that resveratrol induced a significant decrease in cells in the S phase and increase in cells in the G1phase.Furthermore,the expressions of TGF-β1and its downstream factor-Smad2 were inhibited at mRNA and protein levels by resveratrol in a concentration-and time-dependent manner.Conclusions Resveratrol perhaps plays inhibitory effect on PC-3 cells through inhibiting the activity of TGF-β1signaling pathway.

resveratrol;TGF-β1signaling pathway;prostate cancer

R737.25

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.22.004

1005-8982（2016）22-0018-05

2016-04-05