楊桂柱 周麗麗 閆少羽 崔 立（上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院 0040;上海藥明康德新藥開(kāi)發(fā)有限公司 003）

MLN4924在人乳腺癌小鼠移植瘤模型BR-05-0028中的藥效學(xué)研究

楊桂柱1，2周麗麗2閆少羽2崔 立1*（1上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院 200240;2上海藥明康德新藥開(kāi)發(fā)有限公司 200131）

為探討MLN4924聯(lián)合X射線放療對(duì)人乳腺癌小鼠移植瘤模型BR-05-0028的治療作用，采用病人來(lái)源的乳腺癌組織構(gòu)建動(dòng)物腫瘤模型，觀察了MLN4924治療對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明，MLN4924聯(lián)合X射線放療能夠明顯抑制BR-05-0028細(xì)胞的增殖。H.E染色結(jié)果顯示，MLN4924聯(lián)合放療對(duì)腫瘤組織壞死較少。

MLN4924；X射線放療；乳腺癌；小鼠移植瘤模型BR-05-0028；應(yīng)用效果

近年來(lái)，乳腺癌是一種嚴(yán)重危害婦女健康的癌癥，其發(fā)病率在全世界范圍內(nèi)呈逐年上升趨勢(shì)，是女性人群主要的惡性腫瘤[1]。MLN4924是新型的NEDD8-活化酶 (NAE)抑制劑[2，3]。為探尋一種新型有效的乳腺癌治療方法，研究了MLN4924聯(lián)合X射線放療對(duì)乳腺癌的治療作用，現(xiàn)將相關(guān)實(shí)驗(yàn)情況報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

本實(shí)驗(yàn)采用病人來(lái)源的腫瘤組織接種到免疫缺陷鼠皮下構(gòu)建實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。共采用BALB/c 裸鼠24只，雌性，體重20-22 g，由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。隨機(jī)平均分為4組，I組為對(duì)照組；II組為放療組；III組為MLN4924治療組；IV組為MLN4924聯(lián)合放療組，具體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（見(jiàn)表1）。

表1 實(shí)驗(yàn)組別與給藥設(shè)計(jì)

1.2 模型制作

將病人來(lái)源的乳腺癌樣本接種到小鼠右側(cè)腋窩皮下處。待腫瘤長(zhǎng)至約130 mm3時(shí)進(jìn)行隨機(jī)分組治療。

1.3 觀察指標(biāo)和測(cè)試方法

動(dòng)物分組給藥后，觀察小鼠健康及活動(dòng)狀況，監(jiān)測(cè)移植瘤的生長(zhǎng)進(jìn)展，每周2次測(cè)量小鼠體重和腫瘤體積。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用CO2將動(dòng)物安樂(lè)死，然后剝?nèi)∧[瘤，用4%甲醛溶液固定，石蠟包埋并切片，進(jìn)行H.E染色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

各組數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)誤 (x-±S.E.) 表示，組間比較采用方差分析，所有數(shù)據(jù)均用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 體重變化

給藥后，對(duì)照組和MLN4924治療組的裸小鼠體重穩(wěn)步增長(zhǎng)，而放療組及MLN4924聯(lián)合治療組的裸小鼠體重增長(zhǎng)緩慢，相對(duì)體重變化率（見(jiàn)表2）。

表2 MLN4924及X射線放療對(duì)裸鼠相對(duì)體重的影響

2.2 腫瘤體積

與對(duì)照組比較，給藥35 d后，MLN4924治療組與對(duì)照組間腫瘤體積在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著差異（P＞0.05），而放療組和MLN4924聯(lián)合放療組的腫瘤體積明顯小于對(duì)照組，與對(duì)照組間有極顯著差異(P＜0.01)。結(jié)果表明，MLN4924劑量30 mg/kg時(shí)對(duì)乳腺癌BR-05-0028抗腫瘤作用不明顯，而放療及聯(lián)合治療表現(xiàn)出較好的抑制腫瘤作用（見(jiàn)表3）。

表3 MLN4924及X射線放療對(duì)裸鼠腫瘤體積的影響

2.3 病理檢測(cè)

在鏡下對(duì)照組出現(xiàn)腫瘤組織伴有壞死、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和

腫瘤細(xì)胞核多極分裂等現(xiàn)象；放療組出現(xiàn)組織壞死和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等現(xiàn)象；MLN4924治療組的腫瘤組織壞死較少，可見(jiàn)炎癥細(xì)胞，同時(shí)腫瘤組織有纖維化傾向；MLN4924聯(lián)合放療組的腫瘤組織壞死較少（見(jiàn)圖1）。

圖1 BR-05-0028乳腺癌裸鼠移植瘤病理切片(HEX400)

3 結(jié)論與討論

MLN4924是一種新型NAE抑制劑，可通過(guò)結(jié)合并失活NEDD8活化酶的方式殺死癌細(xì)胞，在對(duì)肺癌[4]、胰腺癌[5]動(dòng)物模型的治療過(guò)程中表現(xiàn)出較好的治療作用。為降低單一放療對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的副作用[6]，本實(shí)驗(yàn)利用病人來(lái)源的乳腺癌瘤塊接種至BALB/c裸鼠皮下建立模型，通過(guò)MLN4924聯(lián)合X射線放療，在減少放療對(duì)機(jī)體損傷的基礎(chǔ)上，保證了對(duì)癌細(xì)胞的殺傷。結(jié)果表明，MLN4924劑量30 mg/kg作為增敏劑聯(lián)合X射線放療（1Gy）能有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，同時(shí)對(duì)裸鼠體重沒(méi)有產(chǎn)生明顯的影響，且H.E染色結(jié)果顯示，MLN4924聯(lián)合放療組的腫瘤組織壞死較少。

本研究采用的病人來(lái)源瘤塊接種建模方法[7]，較傳統(tǒng)的細(xì)胞系懸液接種法更能保持腫瘤細(xì)胞原有的生物學(xué)特性[8]，有利于真實(shí)呈現(xiàn)原生腫瘤的生理環(huán)境和病理狀態(tài)，使模型有更好的穩(wěn)定性及治療的可靠性。

[1] 李樹(shù)玲.乳腺腫瘤學(xué)[M].北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,2000.

[2] Mori F, Nishie M, Piao Y S, et al. Accumulation of NEDD8 in neuronal and glial inclusions of neurodegenerative disorders[J]. Neuropathology & Applied Neurobiology, 2005,31(1):53-61.

[3] Lijun Jia, Hua Li,Yi Sun.Induction of p21-dependent senescence by an NAE inhibitor, MLN4924, as a mecha nism of growth suppression[J].Neoplasia,2011,13(13):561-569.

[4] 董揚(yáng),黎友倫.MLN4924促進(jìn)人肺癌細(xì)胞株A549凋亡的機(jī)制研究[J].中國(guó)腫瘤臨床,2012,(24):2055-2058.

[5] Dongping Wei, Hua Li, Jie Yu, et al. Radiosensitization of human pancreatic cancer cells by MLN4924, an investigational NEDD8-activating enzyme inhibitor[J].Cancer Research,2012,72(1):282-293.

[6] 謝慧紅.乳腺癌術(shù)后放療的副作用及護(hù)理[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志,2008,(2):392-393.

[7] 楊桂仙,張大方.乳腺癌動(dòng)物模型的研究現(xiàn)狀與評(píng)價(jià)[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2007,23(2): 82-83.

[8] 丁健.人類炎性乳腺癌移植腫瘤裸鼠動(dòng)物模型的建立和生物學(xué)特性的研究[J],中華外科雜志,2001,39(10):796-798.

2015-12-17

*為通訊作者。