姚美珍　譚布珍

HIF-1α因子標(biāo)記在卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤組織中的表達(dá)及意義*

姚美珍①譚布珍①

目的：探討缺氧誘導(dǎo)因子1α（HIF-1α）在卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系。方法：采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)56例卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤組織和38例正常卵巢組織中HIF-1α的表達(dá)因子。結(jié)果：HIF-1α在卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤組織中表達(dá)率為64.3%，明顯高于正常卵巢組織的23.7%，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ χ2=4.224，P<0.01）。結(jié)論：HIF-1α在缺氧環(huán)境下可促使腫瘤發(fā)生與發(fā)展，維持腫瘤生長(zhǎng)，可作為臨床監(jiān)控卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤發(fā)生、發(fā)展的一個(gè)生物學(xué)標(biāo)志和基因治療靶點(diǎn)。

卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤； HIF-1α； 病理

First-author’s address：The Second Affiliated Hospital of Nanchang University，Nanchang 330006，China

卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤是一種復(fù)雜而高度惡性的腫瘤，發(fā)展快，易復(fù)發(fā)，預(yù)后差，死亡率高。缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）是在缺氧條件下廣泛存在于哺乳動(dòng)物和人體內(nèi)的一種轉(zhuǎn)錄因子，由α和β兩個(gè)亞基組成，對(duì)維持腫瘤細(xì)胞能量代謝、細(xì)胞增殖和血管生成具有很重要的作用，其中HIF-1α是決定HIF-1活性的缺氧調(diào)控亞基，可特異性的作用于氧反應(yīng)通路，活性受氧濃度調(diào)節(jié)[1-2]。本研究采用免疫組化SP法，測(cè)定卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤組織和正常卵巢組織中HIF-1α的表達(dá)，旨在探討卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤的HIF-1α表達(dá)及其與臨床病理分型及分期之間的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1一般資料 選擇本院2012年1月-2015年7月手術(shù)治療并經(jīng)病理證實(shí)的卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤患者組織標(biāo)本56例和正常受試者卵巢組織標(biāo)本38例，卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤中包括卵巢內(nèi)胚竇瘤16例，無性細(xì)胞瘤20例，未成熟畸胎瘤17例，胚胎癌3例；患者年齡12～36歲，平均23歲；按照2000年FIGO臨床病理分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期20例，Ⅱ期20例，Ⅲ期14例，Ⅳ期2例，Ⅰ、Ⅱ?yàn)樵缙?，Ⅲ、Ⅳ期為晚期。正常卵巢組織受試者年齡15～35歲，平均24歲，均來自不孕癥腹腔鏡探查行卵巢活檢手術(shù)，病理證實(shí)卵巢組織無異常者。兩組年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2方法 免疫組化SP法：石蠟切片脫蠟至水，3%的過氧化氫室溫孵育10 min，微波修復(fù)，正常山羊血清封閉，滴加一抗（兔抗人缺氧誘導(dǎo)因子-1α單克隆抗體濃縮液），4 ℃過夜，依次滴加生物素標(biāo)記二抗，辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，DAB顯色，復(fù)染，酒精脫水，二甲苯透明，封固。用已知陽性片作陽性對(duì)照，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3免疫組化結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 采用Fromovitz陽性細(xì)胞半定量分級(jí)法。HIF-1α陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)或胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。先根據(jù)陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)計(jì)分，≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，≥76%為4分；同時(shí)根據(jù)陽性細(xì)胞染色深淺計(jì)分：不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。上述兩項(xiàng)評(píng)分相加，0～1分為陰性（-）；2～3分為弱陽性（+）；4～5分為中度陽性（++）；6～7分為強(qiáng)陽性（+++）[3-4]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 10.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤組織與正常卵巢組織HIF-1α表達(dá)比較 HIF-1α在卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤組織中表達(dá)率為64.3%，明顯高于正常卵巢組織的23.7%，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ χ2=4.224，P<0.01），見表1。

表1　卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤組織與正常卵巢組織HIF-1α表達(dá)比較

2.2HIF-1α在不同病理類型的卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤中的表達(dá) 不同病理類型的卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤中惡性程度高、預(yù)后差的卵黃囊瘤、未成熟畸胎瘤及胚胎癌HIF-1α表達(dá)高于惡性程度低、預(yù)后較好的無性細(xì)胞瘤，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（H=27.081，P=0.000），見表2。

表2　HIF-1α在不同病理類型的卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤中的表達(dá)

2.3HIF-1α在不同臨床分期的卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤中的表達(dá) HIF-1α在晚期（Ⅲ～Ⅳ期）卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤中陽性率為100%，明顯高于早期（Ⅰ～Ⅱ期）的50%，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ χ2=3.176，P=0.001），見表3。

表3　HIF-1α在不同臨床分期的卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤中的表達(dá)

3　討論

對(duì)人類腫瘤標(biāo)本的免疫組化分析顯示，在大多數(shù)腫瘤中HIF-1α呈過度表達(dá)，Zhong等[5]利用HIF-1α單克隆抗體檢測(cè)了HIF-1α在多種腫瘤中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)90%的結(jié)腸癌、肺癌及前列腺癌等癌組織中表達(dá)升高，而在腫瘤附近正常組織中沒有或僅有弱陽性表達(dá)；Birner等[6]宮頸癌的研究中也得到類似的結(jié)果。本研究顯示卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤組織中HIF-1α的陽性表達(dá)率明顯高于正常卵巢組織（P<0.05），說明HIF-1α可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生；樊利芳等[7]用免疫組織化學(xué)方法研究HIF-1α在肺癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其與臨床分期，有無轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)；文獻(xiàn)[8]顯示對(duì)206例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的乳腺癌標(biāo)本的HIF-1α表達(dá)進(jìn)行分析，免疫組化顯示HIF-1α陽性表達(dá)率為76.2%（157/206）。本研究顯示在卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤中的表達(dá)明顯高于正常卵巢組織，惡性程度高、預(yù)后差的卵黃囊瘤、未成熟畸胎瘤、胚胎癌中的HIF-1α陽性表達(dá)率明顯高于惡性度低的、預(yù)后較好的無性細(xì)胞瘤；Ⅲ～Ⅳ期卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤組織的HIF-1α的陽性表達(dá)率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期（P<0.05），表明HIF-1α可提示腫瘤的高度侵襲性。

綜上所述，筆者認(rèn)為HIF-1α在缺氧環(huán)境可促進(jìn)腫瘤發(fā)生與發(fā)展，維持腫瘤生長(zhǎng)，故可作為臨床監(jiān)控卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤發(fā)生、發(fā)展的一個(gè)生物學(xué)標(biāo)志，作為基因治療的靶點(diǎn)。抑制HIF-1α蛋白的表達(dá)及轉(zhuǎn)錄活性，有望成為一種新的治療惡性腫瘤的途徑[9-15]。

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The Expression and Significance of HIF-1α Marker in Malignant Ovarian Germ Cell Tumor Tissues/

YAO Mei-zhen，TAN Bu-zhen.//
Medical Innovation of China，2016，13（30）：111-113

Objective：To investigate the expression of hypoxia inducible factor 1α（HIF-1） in ovarian malignant germ cell tumors and its relationship with clinicopathological features.Method：Immunohistochemical technique was used to detect the expression of HIF-1α in 56 cases of ovarian malignant germ cell tumor and 38 cases of normal ovarian tissue.Result：The expression rate of HIF-1α in ovarian malignant germ cell tumor was 64.3%，which was significantly higher than 23.7% of normal ovarian tissue，the difference was statistically significant（ χ2=4.224，P<0.01）.Conclusion：HIF-1α promote tumor occurrence and development，maintain tumor growth，can be used as a clinical monitoring of malignant ovarian germ cell tumor biological sign of development and a target for gene therapy.

Malignant ovarian germ cell tumor； Hypoxia inducible factor 1α； Pathology

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.30.031

江西省衛(wèi)生廳課題（20073085）

①南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院 江西 南昌 330006

姚美珍

（2016-08-08） （本文編輯：李穎）