亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        小葉樸組織培養(yǎng)無菌體系的建立

        2016-12-09 05:29:35王斯彤
        安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年31期
        關(guān)鍵詞:污染

        王斯彤

        (遼寧省固沙造林研究所,遼寧阜新 123000)

        ?

        小葉樸組織培養(yǎng)無菌體系的建立

        王斯彤

        (遼寧省固沙造林研究所,遼寧阜新 123000)

        [目的]建立小葉樸組織培養(yǎng)初代無菌體系。[方法]通過對不同消毒劑及消毒時(shí)間的對比,篩選出能夠有效控制小葉樸初代培養(yǎng)的污染率,且不抑制小葉樸莖段萌發(fā)的消毒處理。[結(jié)果]小葉樸莖段經(jīng)70%乙醇消毒30 s 2次,再用氯化汞消毒6 min所得莖段污染率低,萌發(fā)率高。對于后期出現(xiàn)的真菌污染采用多菌靈作為消毒劑和添加劑,用200 mg/L多菌靈浸泡外植體60 min能有效地控制污染,且具有較高的萌發(fā)率。在培養(yǎng)基中添加200 mg/L多菌靈也能抑制真菌污染,且效果優(yōu)于多菌靈浸泡處理。[結(jié)論]建立了小葉樸組織培養(yǎng)無菌體系,為小葉樸組培苗的增殖和生根提供參考。

        小葉樸;消毒處理;組織培養(yǎng)

        小葉樸(Celtisbungenana)為榆科樸屬落葉喬木,其樹形端正,遮陰好,是常用的庭院綠化及行道樹種,也可以利用其鄉(xiāng)土樹種的優(yōu)勢,進(jìn)行荒山造林。由于小葉樸生長緩慢,主要繁殖方式是播種繁殖,繁殖時(shí)間長,極大地制約了小葉樸在林業(yè)上的推廣應(yīng)用。將組織培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用于小葉樸的繁殖上,不僅可以縮短繁育年限,同時(shí)對小葉樸的良種選育起到促進(jìn)作用。污染是小葉樸組織培養(yǎng)過程中的技術(shù)難題。外植體材料、培養(yǎng)基、接種工具、接種室消毒不嚴(yán)格或無菌操作不規(guī)范及植物內(nèi)生菌的存在等因素均可導(dǎo)致污染的發(fā)生。乙醇、氯化汞等消毒試劑的使用能夠很好地消滅莖段表面的細(xì)菌,但對于植物莖段內(nèi)的內(nèi)生菌及真菌難以消除。筆者采用多菌靈作為消除內(nèi)生菌和真菌的藥劑,采用消毒劑和添加劑2種形式進(jìn)行對比,建立初代無菌體系,為小葉樸組培苗的增殖和生根提供參考[1-5]。

        1 材料與方法

        1.1 試驗(yàn)材料 供試材料采自沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)后山的小葉樸,枝條應(yīng)在連續(xù)3個(gè)晴天后采集,采集當(dāng)天天氣晴朗,時(shí)間在11:00~15:00,選取小葉樸當(dāng)年萌發(fā)的幼嫩莖段作為外植體進(jìn)行消毒對比試驗(yàn)。消毒試劑:乙醇、氯化汞、次氯酸鈉、青霉素、多菌靈。

        1.2 試驗(yàn)方法

        1.2.1 外植體的預(yù)處理。選取生長良好、無病蟲害的小葉樸新萌發(fā)枝條,將枝條剪成長約5 cm帶腋芽或頂芽的小段,去除葉片,加少量洗衣粉清洗表面的雜質(zhì),用流水沖洗30~60 min后,再用蒸餾水沖洗4~5次(不斷振蕩燒杯),置于超凈工作臺上備用。

        1.2.2 外值體的消毒。①乙醇(70%、75%)、氯化汞(0.1%)配合使用進(jìn)行消毒,消毒后無菌水沖洗3~4次,接種至培養(yǎng)基中。②使用次氯酸鈉(2%)消毒6、9、12、15 min,消毒后無菌水沖洗3~4次,接種至培養(yǎng)基中。③使用多菌靈(3%)溶液浸泡消毒20、40、60 min,消毒后無菌水沖洗3~4次,再用乙醇和氯化汞配合消毒,接種至培養(yǎng)基后進(jìn)行觀察。與多菌靈作為添加劑進(jìn)行對真菌抑制對比。

        1.2.3 培養(yǎng)基中消毒劑的添加。在配制培養(yǎng)基過程中,加入瓊脂、植物生長調(diào)節(jié)劑和蔗糖后,在各組培養(yǎng)基中分別單獨(dú)加入不同濃度的青霉素和多菌靈,青霉素濃度為25、50、100、200 mg/L ,多菌靈(50%)為25、50、100、200 mg/L。

        1.3 數(shù)據(jù)分析 采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì),通過腋芽萌發(fā)率、污染率等指標(biāo),研究消毒劑和消毒時(shí)間對污染率和萌發(fā)率的影響。計(jì)算公式:

        萌發(fā)率=萌發(fā)的莖段數(shù)/外植體數(shù)×100%

        污染率=污染的莖段數(shù)/外植體數(shù)×100%

        2 結(jié)果與分析

        2.1 不同乙醇與氯化汞配合處理對外植體的影響 由表1可知,乙醇與氯化汞配合使用能有效地控制污染率,促進(jìn)莖段萌發(fā)。隨著乙醇和氯化汞消毒時(shí)間的增加,污染率逐漸降低,但消毒時(shí)間過長會抑制莖段的萌發(fā),降低莖段的萌發(fā)率。綜合考慮,處理⑤污染率偏低,萌發(fā)率較高,為小葉樸較好的消毒處理。

        方差分析結(jié)果表明,乙醇對小葉樸莖段的預(yù)處理具有顯著影響,乙醇具有較強(qiáng)的穿透性,利用此特性,可以清除小葉樸莖段表面細(xì)菌,同時(shí)加強(qiáng)了氯化汞的消毒效果。2.2 不同次氯酸鈉消毒時(shí)間對外植體的影響 用2%次氯酸鈉對小葉樸莖段進(jìn)行不同時(shí)間的消毒處理,其污染率及萌發(fā)率見表2。由表2可知,隨著消毒時(shí)間的增加,污染率逐漸降低,當(dāng)消毒時(shí)間達(dá)15 min時(shí)污染率降低不明顯,且會抑制莖段萌發(fā)。因此,最適消毒時(shí)間為12 min,此時(shí)污染率和萌發(fā)率都控制在較適宜的范圍。

        表1 乙醇和氯化汞對小葉樸莖段的消毒效果

        Table 1 Disinfection effect of Alcohol and mercuric chloride to Celtis bungenana

        處理Treat-ment滅菌時(shí)間Thesterilizationtime乙醇Alcohol氯化汞mercuricchloridemin污染率Pollutionrate∥%萌發(fā)率Germinationrate∥%①70%30s1次355.133.7②70%30s1次638.744.5③70%30s1次936.645.9④70%30s2次349.737.9⑤70%30s2次634.549.1⑥70%30s2次933.347.8⑦75%30s1次355.834.7⑧75%30s1次637.942.3⑨75%30s1次932.539.8⑩75%30s2次347.332.575%30s2次633.142.775%30s2次932.738.6

        注:樣本數(shù)為60。

        Note:Samle number was 60.

        表2 2%次氯酸鈉對小葉樸莖段的消毒效果

        Table 2 Disinfection effect of 2% sodium hypochlorite toCeltisbungenana

        處理Treatment滅菌時(shí)間Thesterilizationtime∥min污染率Pollutionrate∥%萌發(fā)率Germinationrate∥%①655.839.4②943.942.2③1239.745.3④1538.141.9

        2.3 多菌靈對外植體真菌污染的抑制作用 由圖1可知,多菌靈作為消毒劑和添加劑均能降低污染率。隨著多菌靈濃度的升高,污染率降低,多菌靈濃度從50 mg/L升至100 mg/L時(shí)污染率降低最明顯,當(dāng)多菌靈濃度為100~200 mg/L時(shí),污染率降低趨于平緩。而多菌靈作為添加劑的消毒效果優(yōu)于消毒劑,其原因?yàn)槎嗑`作為添加劑加入培養(yǎng)基中,能夠參與其新陳代謝,進(jìn)入植物體內(nèi)起到殺菌消毒的作用。而作為消毒劑時(shí),消毒劑的濃度和消毒時(shí)間都會影響消毒效果。由圖2可知,隨著消毒時(shí)間的增加,污染率降低,消毒時(shí)間在60~80 min時(shí)趨于平緩,污染率變化較小,且萌發(fā)率有所下降,說明當(dāng)消毒時(shí)間達(dá)80 min時(shí),污染率降低不明顯,但會抑制莖段的萌發(fā)。

        圖1 多菌靈作為消毒液和添加劑對真菌污染的影響Fig.1 Effect of Carbendazim as disinfectant and additive on fungi pollution

        圖2 不同消毒時(shí)間對污染率和萌發(fā)率的影響Fig.2 Effect of Different disinfection time on pollution rate and germination rate

        2.4 添加劑的消毒效果 通過在培養(yǎng)基中添加青霉素和多菌靈,對比2種消毒劑的消毒效果,結(jié)果見圖3。由圖3可知,青霉素對細(xì)菌污染的發(fā)生有一定的抑制作用,特別是前10 d,效果明顯,但對真菌污染作用不明顯。多菌靈對細(xì)菌污染的抑制效果一般,但對后期真菌污染有較好的效果,這與李穎等[6]研究結(jié)果一致。

        圖3 添加劑的消毒效果Fig.3 Additive effect of disinfection

        3 結(jié)論與討論

        小葉樸莖段具有污染率高、消毒困難的問題,需要進(jìn)行多種消毒試劑以及消毒時(shí)間的篩選。消毒時(shí)間過長影響萌發(fā)率,過短則消毒不徹底,易污染。該試驗(yàn)對小葉樸莖段進(jìn)行消毒篩選,結(jié)果表明,經(jīng)70%乙醇消毒30 s 2次,再用氯化汞消毒6 min所得莖段污染率低,萌發(fā)率高。在用2%次氯酸鈉進(jìn)行消毒試驗(yàn)中,次氯酸鈉對小葉樸莖段的消毒效果較好,用2%次氯酸鈉浸泡12 min時(shí),消毒效果好,萌發(fā)率高,但與乙醇和氯化汞配合使用相比略有不足。因此,生產(chǎn)實(shí)踐中,追求較低的污染率和較高的萌芽率時(shí)可采用乙醇與氯化汞。

        針對出現(xiàn)的真菌污染,該研究采用的多菌靈效果突出,分別作為消毒劑和添加劑加入到培養(yǎng)基中,發(fā)現(xiàn)其抗污染能力強(qiáng),對外植體的副作用小,且萌發(fā)率高。而作為消毒劑時(shí),長時(shí)間的浸泡會刺激植物表皮,影響莖段萌發(fā)。

        在青霉素和多菌靈作為添加劑的對比試驗(yàn)中,青霉素能夠較好地控制細(xì)菌污染,多菌靈能夠控制真菌污染,且萌發(fā)率高,因此,可嘗試青霉素和多菌靈混合使用,以減少污染。多菌靈和青霉素對小葉樸莖段的生長發(fā)育是否有影響鮮見報(bào)道,因此需要后續(xù)試驗(yàn)進(jìn)行規(guī)范和調(diào)整,以建立小葉樸組織培養(yǎng)的完整體系。

        [1] 王繼飛,胡天華,朱莉華.寧夏賀蘭山珍稀瀕危植物小葉樸資源現(xiàn)狀及保護(hù)對策[J].寧夏農(nóng)林科技,2012,53(6):103-104.

        [2] 彭廣霖,李青,衣淑玉,等.次氯酸鈉防治組培苗污染的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40( 16):8806-8808.

        [3] 劉紹雄,王娟,王明月,等.巨龍竹組培苗污染優(yōu)勢內(nèi)生菌的分離與鑒定[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2013,44(3):416-421.

        [4] 彭廣霖,于詠梅,薛元霞,等.氯化汞防治組培苗污染的研究[J].北方園藝,2012(15):131-133.

        [5] 方麗,汪一婷,呂永平,等.植物組培產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中污染防控技術(shù)研究[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2012,24(6):1074-1078.

        [6] 李穎,李春燕.多菌靈和青霉素在組培污染中的應(yīng)用[J].林業(yè)科技,2012,27(1):6-8.

        The Establishment of Tissue Culture Sterile System ofCeltisbungenana

        WANG Si-tong

        (Sand-fixation Afforestation Institute in Liaoning Province,Fuxin,Liaoning 123000)

        [Objective] The aim was to establish tissue culture sterile system ofCeltisbungenana. [Method]Through the comparison of different disinfectants and disinfection time, tissue culture sterile system ofCeltisbungenanawith lowerpollution rate and higher germination rate were screened. [Result]By comparison with 70% alcohol disinfection 30 s 2 times, with mercuric chloride for 6 minutes from the stem segments were of low pollution, high germination rate.Late for the fungus pollution using carbendazim as disinfectant and additives, soaking with 200 mg/L carbendazim explant 60 min, can effectively control the pollution, and can have better germination rate. 200 mg/L is added in the culture medium carbendazim can restrain fungus contamination, and better than carbendazol soaking process. [Conclusion] The study stablihed tissue culture sterile system ofCeltisbungenana, and provide reference for proliferation and rooting ofCeltisbungenana.

        Celtisbungenana; Disinfection treatment; Tissue culture

        王斯彤(1990- ),女,遼寧阜新人,助理工程師,從事林木遺傳育種研究。

        2016-08-24

        S 723

        A

        0517-6611(2016)31-0153-03

        猜你喜歡
        污染
        河流被污染了嗎?
        什么是污染?
        什么是污染?
        堅(jiān)決打好污染防治攻堅(jiān)戰(zhàn)
        堅(jiān)決打好污染防治攻堅(jiān)戰(zhàn)
        可以喝的塑料:污染解決之道?
        飲用水污染 誰之過?
        食品界(2016年4期)2016-02-27 07:36:15
        對抗塵污染,遠(yuǎn)離“霾”伏
        都市麗人(2015年5期)2015-03-20 13:33:49
        P265GH低合金鋼在模擬污染大氣環(huán)境中的腐蝕行為
        污染防治
        江蘇年鑒(2014年0期)2014-03-11 17:09:46
        久久精品国产屋| 日韩人妻无码精品久久久不卡| 女性女同性aⅴ免费观女性恋| 欧美精品久久久久久久久| 91久久精品国产性色tv| 中文字幕高清不卡视频二区| 亚洲av成人片在线观看| 亚洲日韩精品欧美一区二区一 | 四虎永久免费影院在线| 国产亚洲午夜高清国产拍精品不卡| 蜜桃传媒网站在线观看| 国色天香精品一卡2卡3卡4| 狠干狠爱无码区| 亚洲精品国产主播一区二区 | 亚洲最大av免费观看| 亚洲精品久久蜜桃av| 国产啪亚洲国产精品无码| 久久99国产亚洲高清观看韩国 | 极品少妇高潮在线观看| 亚洲va韩国va欧美va| 又硬又粗又大一区二区三区视频| 国产欧美亚洲精品第二区首页| 日本综合视频一区二区| 国产肉体xxxx裸体784大胆| 亚洲 欧美 唯美 国产 伦 综合 | 91视频免费国产成人| 日美韩精品一区二区三区 | 免费蜜桃视频在线观看| 在线观看老湿视频福利| 国产黄a三级三级三级av在线看| 国产美女亚洲精品一区| 日本午夜理论片在线观看| 国产特级毛片aaaaaa| 久久久久亚洲AV无码专区喷| 偷拍视频十八岁一区二区三区| 欧美熟妇另类久久久久久不卡| 亚洲中久无码永久在线观看软件| 蜜桃伦理一区二区三区| 少妇高潮太爽了在线看| 国产精品白丝喷水在线观看| 精品的一区二区三区|