姜雪琪，張衛(wèi)東

(佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江佳木斯 154007)

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龍葵超聲波乙醇提取物抑菌作用研究

姜雪琪，張衛(wèi)東*

(佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江佳木斯 154007)

[目的]研究龍葵乙醇提取物的抑菌作用。[方法]以天然植物龍葵為原料，采用超聲輔助乙醇提取龍葵生物活性成分，將提取物配置成50、100、150、200 mg/mL 4種不同濃度的溶液，利用濾紙瓊脂擴(kuò)散法研究不同濃度龍葵生物成分對(duì)枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌3種菌種生長的影響。[結(jié)果]一定濃度的龍葵乙醇提取液對(duì)3種菌種均有抑制作用，且隨著龍葵提取液質(zhì)量濃度的增加，3種菌種的抑菌效果越顯著，其中對(duì)金黃色葡萄球菌抑制效果最明顯。[結(jié)論]龍葵提取液具有一定的抑菌作用，且抑菌效果隨著龍葵提取液濃度的增加而增強(qiáng)。

龍葵；乙醇；菌種；抑菌

龍葵(SolanumnigrumL.)為茄科Solanaceace屬，一年至多年生草本野生植物，在全國各地均有分布。龍葵的生物成分主要是龍葵堿[1]。龍葵性寒，味苦、微甘，有小毒，歸肺、胃、膀胱經(jīng)，主治瘡癰腫毒、皮膚濕疹、尿路感染、慢性支氣管炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和前列腺炎等疾病，全草可入藥，有抗腫瘤、抗炎、抗過敏、抗菌、解熱鎮(zhèn)痛等藥理作用[2-4]。傳統(tǒng)的龍葵生物堿提取方法有水或酸水法、醇類溶劑提取法、沉淀法、親脂性有機(jī)溶劑提取法等。用水或酸水提取法，提取液體積較大，濃縮困難[5]。沉淀法操作繁瑣，成本高，且得到純品較難。親脂性有機(jī)溶劑提取法適合于提取脂溶性生物堿，適用范圍比較窄。由于大多數(shù)生物堿均能溶于甲醇或乙醇，可采用醇類溶劑提取法，乙醇為最常用的溶劑提取[6]。隨著科技的發(fā)展，近幾年出現(xiàn)的一些新的技術(shù)，如超聲場(chǎng)強(qiáng)化、超臨界流體萃取，已應(yīng)用于中藥有效成分的提取過程中[7]。有研究表明，應(yīng)用這些新技術(shù)提取中藥龍葵有效成分的方法具有產(chǎn)率高、純度高、提取速度快等優(yōu)點(diǎn)，有廣闊的應(yīng)用前景[8]。該試驗(yàn)利用超聲波對(duì)龍葵乙醇提取法獲取龍葵的生物堿粗提物，研究不同濃度龍葵粗提溶液對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌生長的影響，探討龍葵粗提的抑菌作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 龍葵購自佳木斯中醫(yī)院藥局，菌種來自佳木斯大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 龍葵提取液的提取和滅菌。磨碎的龍葵粉末放入90%酒精溶液中浸泡，12 h后施加超聲波進(jìn)行提取，60 ℃情況下提取30 min，對(duì)提取液進(jìn)行蒸餾得到白色物質(zhì)，將得到的白色物質(zhì)封口放入高壓滅菌鍋中進(jìn)行滅菌，滅菌后的龍葵生物粗提放在室溫中進(jìn)行保存。

1.2.2 培養(yǎng)基的制備。常規(guī)MS培養(yǎng)基，pH 5.8，121.3 ℃下，滅菌20 min，37 ℃培養(yǎng)箱放置1 d后確定無菌后再使用。

1.2.3 菌種活化。菌種轉(zhuǎn)接至試管活化，培養(yǎng)3～5 d后冰箱保藏。

1.2.4 提取物和菌種的共培養(yǎng)。將濾紙剪成0.5 cm直徑的圓紙片，將濾紙片放入盛有龍葵粗提物的燒杯中進(jìn)行浸泡，高壓滅菌后，無菌放置在劃線接菌后的培養(yǎng)基中，在37 ℃的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間3 d。然后取出觀察測(cè)量濾紙片周圍的抑菌圈大小。

1.2.5 枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌對(duì)龍葵乙醇提取物的敏感性測(cè)試。采用瓊脂擴(kuò)散紙片法[9]測(cè)定抑菌圈直徑。通過測(cè)定抑菌圈直徑檢測(cè)枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌對(duì)龍葵乙醇提取物的敏感性。體外抑菌定性結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)[10]：抑菌圈直徑<10 mm，表示不敏感；抑菌圈直徑為10～15 mm，表示中度敏感；抑菌圈直徑為16～20 mm，表示高度敏感。

2 結(jié)果與分析

從表1可知，一定濃度的龍葵提取液對(duì)枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有抑制作用，隨著龍葵提取液質(zhì)量濃度的增加，3種菌種的抑菌圈直徑呈增大趨勢(shì)，當(dāng)龍葵提取液濃度≤150 mg/mL時(shí)，枯草芽孢桿菌對(duì)其表現(xiàn)為不敏感，濃度≥200 mg/mL時(shí)，對(duì)其表現(xiàn)為中度敏感；當(dāng)龍葵提取液≤100 mg/mL時(shí)，大腸桿菌對(duì)其表現(xiàn)為不敏感，濃度≥150 mg/mL時(shí)，對(duì)其表現(xiàn)為中度敏感；當(dāng)龍葵提取液≤50 mg/mL時(shí)，金黃色葡萄球菌對(duì)其表現(xiàn)為不敏感，濃度為100～150 mg/mL時(shí)，對(duì)其表現(xiàn)為中度敏感，濃度≥200 mg/mL時(shí)，對(duì)其表現(xiàn)為高度敏感。通過對(duì)龍葵提取液不同濃度產(chǎn)生的提取液進(jìn)行差異顯著性分析，發(fā)現(xiàn)不同濃度的龍葵提取液產(chǎn)生的抑菌圈直徑之間差異顯著。

表1 枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌對(duì)龍葵乙醇提取物的敏感性測(cè)試

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)?！?”表示不敏感，“+”表示中度敏感，“++”表示高度敏感。

Note：Different lowercases in the same column stand for significant difference(P<0.05).- stands for insensitivity，+ indicates medium sensitivity，++ indicates high sensitivity.

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度的龍葵提取液產(chǎn)生的抑菌圈之間差異顯著，表明一定濃度的龍葵乙醇提取液對(duì)枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有抑制作用，且隨著龍葵提取液質(zhì)量濃度的增加，3種菌種的抑菌效果越顯著，其中，龍葵乙醇提取液對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制效果最明顯。

試驗(yàn)采用的龍葵提取物為粗提物，目前對(duì)龍葵抑菌活性成分的分析及其抑菌活性成分之間的相互作用效應(yīng)的研究較少，日后可對(duì)龍葵活性成分進(jìn)一步分離純化及對(duì)其抑菌活性成分的結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析，也可將龍葵與其他中草藥混合再測(cè)試其抑菌效果，對(duì)臨床應(yīng)用提供更準(zhǔn)確的依據(jù)。此次試驗(yàn)還應(yīng)用了索氏提取法對(duì)龍葵進(jìn)行粗提取，但由于試驗(yàn)條件的限制導(dǎo)致對(duì)龍葵生物成分的提取率非常低，超聲波提取法的提取率非常高，所以舍棄了索氏提取法改用超聲波提取法進(jìn)行試驗(yàn)。

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Study on Antibacterial Effect of Ultrasonic Ethanol Extracts ofSolanumnigrum

JIANG Xue-qi, ZHANG Wei-dong*

(School of Life Science, Jiamusi University, Jiamusi, Heilongjiang 154007)

[Objective] The aim was to study antibacterial effect of ethanol extracts ofSolanumnigrum. [Method]With natural plantSolanumnigrumL. as raw material, by ultrasonic assisted ethanol extraction of bioactive constituents inSolanumnigrum, then configured to 50, 100, 150, 200 mg/mL 4 different concentrations of solution, using filter paper agar diffusion method to study effects of different concentrations ofSolanumnigrumbiological components onBacillussubtilis,EscherichiacoliandStaphylococcusaureusgrowth.[Result] The results indicated that a certain concentration ofSolanumnigrumethanol extracts had inhibitory effects on three bacteria. With the increasing concentration ofSolanumnigrumethanol extracts, the antibacterial effects were more obvious, especially onStaphylococcusaureus. [Conclusion]Solanumnigrumextract has certain antibacterial effects, and the inhibitory effect increased with increasing concentration of the extracts.

Solanumnigrum; Ethanol; Bacteria; Antibacterial

姜雪琪(1990-)，女，黑龍江佳木斯人，碩士研究生，研究方向：植物進(jìn)化生態(tài)學(xué)。*通訊作者，副教授，碩士，碩士生導(dǎo)師，從事植物進(jìn)化生態(tài)學(xué)研究。

2016-09-02

S 58

A

0517-6611(2016)31-0125-01