米佳 王國強 侯寧 劉勵文 王萌萌 王秀閣*

消渴痹通膠囊對糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠血清MDA、SOD的影響※

米佳1王國強1侯寧2劉勵文2王萌萌2王秀閣1*

（1長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，長春130021；2長春中醫(yī)藥大學研究生學院，長春130000）

目的觀察消渴痹通膠囊對糖尿病周圍神經(jīng)病變（DPN）大鼠血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的影響。方法將60只雄性SD糖尿病大鼠高脂飼料喂養(yǎng)4周后注射鏈脲佐菌素，造模成糖尿病模型的大鼠，再維持高糖狀態(tài)2個月造成糖尿病周圍神經(jīng)病變的模型。隨機分為模型組、硫辛酸膠囊組、消渴痹通膠囊組3組，每組各20只。另選取健康雄性SD大鼠10只為正常對照組。消渴痹通膠囊組0.26 g/(kg·d)灌胃給藥，硫辛酸膠囊組按照0.042 g/(kg·d)灌胃給藥，模型組和空白組灌服同體積10 mL·kg-1的生理鹽水，每天給藥1次，連續(xù)給藥12周。觀察各組大鼠的血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的變化。結(jié)果在治療12周末，與模型組比較，治療組血清SOD活性明顯升高（P＜0.05）、MDA含量明顯降低（P＜0.05），其中以消渴痹通膠囊組效果最佳。結(jié)論消渴痹通膠囊能提高DPN大鼠SOD活性，降低MDA含量，提示抗氧化機制可能是消渴痹通防治DPN的機制之一。

糖尿病周圍神經(jīng)病變；消渴痹通膠囊；MDA；SOD；抗氧化；消渴；痹證

近年來，全球范圍內(nèi)糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）患病率不斷迅猛增長。糖尿病患者持續(xù)的高血糖狀態(tài)，隨著病程的增加，其慢性并發(fā)癥發(fā)病率也逐步上升[1]。有研究表明，約70%的DM患者可能出現(xiàn)糖尿病周圍神經(jīng)損害[2]。糖尿病周圍神經(jīng)病變發(fā)生機制復雜，其中包括氧化應激、多元醇通路激活、糖基化終末產(chǎn)物、蛋白激酶途徑激活、神經(jīng)營養(yǎng)因子缺乏、神經(jīng)微血管病變等假說，很難用單一機制闡明。作為目前研究的熱點，氧化應激不僅可能直接造成神經(jīng)元及神經(jīng)細胞損傷，也可以參與其他如糖脂代謝紊亂、微血管病變等不同發(fā)病機制中[3]。針對此發(fā)病機制，現(xiàn)代醫(yī)學一般應用酶類和非酶類抗氧化劑進行抗氧化治療。但由于人體氧化應激機制復雜，單純應用降糖、抗氧化藥物的臨床療效并不理想。祖國醫(yī)學在整體觀念、辨證論治的基礎上，發(fā)揮中藥多靶點、多途徑的綜合作用，取得了較為滿意的療效。此次動物實驗旨在結(jié)合中醫(yī)古今文獻，在已有的前期研究基礎上[4-5]，進一步深入探討消渴痹通膠囊對DPN大鼠氧化應激的影響，探討消渴痹通膠囊可能的作用機制，并為臨床應用提供新的思路和方法。

1 材料與方法

1材料

1.1.1 實驗動物SPF級4周齡健康雄性SD大鼠，共70只，

體重180～220 g，分籠飼養(yǎng)，室溫（20±2）℃，相對濕度50%~60%，通風良好，室內(nèi)12 h明暗自動切換，自由攝食、飲水。

1.1.2 藥物與試劑消渴痹通膠囊，長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院制劑室提供；硫辛酸膠囊：江蘇萬禾制藥有限公司（批號H20100158）；超氧化物歧化酶試劑盒、丙二醛測定試劑盒，南京建成生物工程研究所提供。

1.2 實驗性動物模型的制作將大鼠適應性喂養(yǎng)1周后，隨機選取60只開始高脂飼料喂養(yǎng)，喂養(yǎng)4周后禁食不禁水12 h后，將鏈脲佐菌素用新鮮配置的0.1 mmol/L檸檬酸鈉緩沖液避光操作中配制成1%濃度的溶液，按40 mg/kg腹腔一次性注射，72 h后取尾靜脈血測血糖，血糖≥16.7 mmol/L即為糖尿病大鼠模型建造成功，建成糖尿病大鼠模型后繼續(xù)維持高脂飼料飼養(yǎng)8周后造成DPN模型[6]。成膜后維持高脂飼料喂養(yǎng)，直至處死。

1.3 分組及給藥方法將造模成功的DPN大鼠隨機分組模型組、硫辛酸膠囊組、消渴痹通膠囊組3組，每組20只。另外10只SD大鼠為正常對照組。將硫辛酸膠囊及消渴痹通膠囊分別配置成混懸液，造模成功后，消渴痹通膠囊使用時按照0.26 g/(kg·d)體重灌胃，硫辛酸膠囊灌胃時給藥劑量為0.042 g/(kg·d)。模型組和空白組灌服同體積10 mL·kg-1的生理鹽水。各組大鼠均連續(xù)灌胃12周，每日1次。用藥治療期間正常對照組大鼠飼以普通飼料，其他組飼以高脂飼料，自由進食、飲水，每周稱重，根據(jù)體重調(diào)整灌胃劑量。

1.4 標本采集在灌胃給藥12周后，所有大鼠尾靜脈取血，以自動血糖儀檢測血糖。電子秤稱取每只大鼠體重，禁食、禁水12 h后，經(jīng)內(nèi)眥于眶后靜脈叢取血，分裝不同試管中，4℃保存?zhèn)錂z，以檢測血清SOD、MDA水平。

2 結(jié)果

2.1 血清MDA的檢測在治療第12周末，模型組、硫辛酸膠囊組、消渴痹通膠囊組大鼠MDA的表達明顯高于正常對照組（P<0.01）。硫辛酸膠囊組和消渴痹通膠囊組與模型組相比均明顯降低（P<0.01，P<0.05），說明消渴痹通膠囊和硫辛酸膠囊均有降低大鼠MDA表達的作用，且消渴痹通膠囊組優(yōu)于硫辛酸膠囊組（P<0.05）（見表1）。

2.2 血清SOD的檢測在治療第12周末，模型組、硫辛酸組、消渴痹通膠囊組大鼠SOD的表達明顯低于正常對照組（P<0.01）。硫辛酸膠囊組和消渴痹通膠囊組與模型組相比均明顯升高（P<0.01，P<0.05），說明消渴痹通膠囊和硫辛酸膠囊均有升高大鼠SOD表達的作用，且消渴痹通膠囊組優(yōu)于硫辛酸膠囊組（P<0.05）（見表1）。

表1 各組大鼠血清MDA、SOD的表達變化（±s，μmol/l）

表1 各組大鼠血清MDA、SOD的表達變化（±s，μmol/l）

注：與正常組相比*P＜0.01；與模型組相比△P＜0.01，△△P＜0.05；與硫辛酸組相比＃＃P＜0.05

組別M D A S O D正常對照組模型組消渴痹通組硫辛酸組3 . 9 9 ± 0 . 3 2 8 . 6 7 ± 0 . 8 3*5 . 7 4 ± 0 . 2 9*△＃＃6 . 3 6 ± 0 . 3 1*△△6 8 . 3 5 ± 4 . 3 3 4 4 . 2 9 ± 2 . 3 5*5 5 . 1 8 ± 3 . 4 3*△＃＃4 9 . 8 5 ± 2 . 5 3*△△

3 討論

祖國醫(yī)學認為，糖尿病周圍神經(jīng)病變可由氣陰兩虛，絡脈瘀阻而致。消渴日久，耗氣傷陰，氣血陰陽虧虛，血行不暢，瘀血內(nèi)生，阻于絡脈，即因虛致瘀，本虛標實。以“益氣活血，化瘀通絡”立法的消渴痹通膠囊由黃芪、桂枝、雞血藤、豨薟草、全蝎等組成。方中黃芪，又稱為“補藥之長”，本病“虛”為本，故重用為君，補益經(jīng)絡之氣，達到氣旺行血，血行瘀去絡通的目的。本病中病機中的“實”為血瘀絡痹，故同時，方中輔用活血、通絡藥物以袪“標”之實邪。《本草便讀》有記載：“凡藤類之屬皆可通經(jīng)入絡”。本方配伍雞血藤，藥達病絡，在活血祛瘀的同時兼具養(yǎng)血的效果，祛邪不傷正。豨薟草，以通經(jīng)活絡見長，與雞血藤同用，用于筋脈瘀阻，肢體麻木之癥[7]，二藥合為臣藥。牛膝能夠強筋骨，袪惡血，以助雞血藤藥力。威靈仙，性猛急，走而不守，宣通十二經(jīng)絡，無論上下皆可用。全蝎，通絡止痛。桂枝，則溫通經(jīng)脈，故以上4種共為佐使藥。全方配伍特點：補氣藥與活血藥相伍，兼之輔以通絡藥，合而用之，補氣、袪瘀、通絡三法并行，標本兼顧，達到氣旺、瘀消、絡通，諸證自愈的目的。且三法相合，使補而不壅滯，絡脈調(diào)達，活血又不傷正。實驗結(jié)果表明，與正常對照組相比，糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠的血清MDA水平明顯升高，血清SOD水平明顯降低。消渴痹通膠囊在一定程度上能抑制糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠血清MDA的表達，同時升高血清SOD水平，提示抗氧化機制可能是消渴痹通防治糖尿病周圍神經(jīng)病變的作用機制之一，這為我們以后開展中藥復方有效物質(zhì)的研究提供了思路。

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Effect of Xiaoke Bitong Capsule on MDA and SOD in Diabetic Peripheral Neuropathy Rats

MI Jia1,WANG Guoqiang1,HOU Ning2,LIU Liwen2,WANG Mengmeng2,WANG Xiuge1*
(1.Department of Endocrinology,the Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130021,China; 2.Graduate School,Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130000,China)

Objective To investigate the effect of Xiaoke Bitong capsule on MDA and SOD in diabetic peripheral neuropathy rats. Methods The sixty male SD rats were made to be the diabetes rats with injecting streptozotocin for one-time after feeding with highfat and high-carbohydrate diet for 4 weeks.Then,those rats were made to be diabetic peripheral neuropathy Rats by feeding with high-fat and high-carbohydrate diet for 2 months.The sixty diabetic peripheral neuropathy rats were randomly divided into the model group,the thioctic acid capsules group and the Xiaoke Bitong group.There were 20 rats in each group.A normal control group was also set up by male SD rats which were feeding of normal diet.The Xiaoke Bitong group and the thioctic acid capsules group were given Xiaoke Bitong decoction 0.26g/(kg·d)and thioctic acid capsules suspension 0.042g/(kg·d)gavage respectively,while the normal group and the model group were given the same amount of normal saline.After twelve weeks,levels were compared between each group.Results Comparing with the model group,levels of SOD significantly increased(P<0.05),levels of MDA significantly decreased(P<0.05),but the Xiaoke Bitong group was better than the thioctic acid capsules group.Conclusion Xiaoke Bitong capsule can improve the activity of SOD,and also can decreased the level of MDA.It suggests that the antioxidant mechanism may be one of the mechanisms of Xiaoke Bitong capsule in the prevention and treatment of diabetic peripheral neuropathy.

Xiaoke Bitong capsule;diabetic peripheral neuropathy;MDA;SOD;antioxidant;consumptive thirst;bi syndrome

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.22.062

1672-2779（2016）-22-0137-02

：李海燕本文校對：陳曦

2016-06-17）

國家中醫(yī)藥管理局全國名老中醫(yī)藥專家傳承工作室項目；吉林省中醫(yī)藥管理局課題（No：2014-Q1）；吉林省衛(wèi)生計生委課題（No：2014z096）

＊通訊作者：362730191@qq.com