陜柏峰，原維宇，馮 澤，張柳明

(山西省血液中心檢驗(yàn)科，太原 030024)

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·論 著·

太原市無(wú)償獻(xiàn)血者抗-HIV結(jié)果確認(rèn)和帶型分析

陜柏峰，原維宇，馮 澤，張柳明

(山西省血液中心檢驗(yàn)科，太原 030024)

目的 分析研究太原市無(wú)償獻(xiàn)血者人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體(抗-HIV)陽(yáng)性標(biāo)本的確認(rèn)結(jié)果和帶型。方法 采用蛋白印跡(WB)對(duì)185例初篩陽(yáng)性獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，采用SPSS13.0分析試驗(yàn)結(jié)果和帶型。結(jié)果 確認(rèn)陰性128例，不確定15例、陽(yáng)性42例。確認(rèn)陽(yáng)性標(biāo)本中，gp120、gp160、p24帶型陽(yáng)性率為100.00%，p31、p51和p66陽(yáng)性率均大于90.00%。不確定標(biāo)本中，p24陽(yáng)性率最高，有12例，占80.00%；其次為gp160，有3例，占20.00%。隨著S/CO值增大，帶型出現(xiàn)率逐漸增高，最高為S/CO值>6.00組(χ2=35.16，P=0.009)。結(jié)論 HIV篩查試驗(yàn)存在假陽(yáng)性。確認(rèn)陽(yáng)性標(biāo)本多為病毒感染期。初篩陽(yáng)性標(biāo)本必須進(jìn)行追蹤確認(rèn)試驗(yàn)，確認(rèn)其是否感染。

艾滋病病毒； 蛋白印跡； 確認(rèn)試驗(yàn)； 帶型

目前，我國(guó)無(wú)償獻(xiàn)血者人類免疫缺陷病毒(HIV)檢查方法主要有篩查和確認(rèn)2種。無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本必須經(jīng)過(guò)篩查和確認(rèn)試驗(yàn)才能確定是否感染HIV。無(wú)償獻(xiàn)血是公益性服務(wù)，其發(fā)現(xiàn)HIV感染者的原因，一方面是患者自身被感染且不知情，另一方面可能其存在高危行為故意隱瞞但被發(fā)現(xiàn)。若感染HIV血液流向臨床，將產(chǎn)生重大損失。由于眾多檢測(cè)方法對(duì)人類感染HIV均存在檢測(cè)“窗口期”，易導(dǎo)致“漏檢”現(xiàn)象發(fā)生，所以要求血液中心提高檢測(cè)技術(shù)，并在獻(xiàn)血者招募和征詢中嚴(yán)格把關(guān)。因此，筆者對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者中確認(rèn)HIV陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)一步分析和研究，為血液安全提供理論基礎(chǔ)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年6月至2015年6月山西省血液中心185例HIV抗體(抗-HIV)篩查結(jié)果為陽(yáng)性的無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行蛋白印跡(WB)確認(rèn)研究。

1.2 方法 確認(rèn)試驗(yàn)采用WB進(jìn)行。試劑為HIV 1+2型抗體檢測(cè)試劑盒 (IMT HIV-1/2 Blot確認(rèn)試劑盒)，嚴(yán)格參照試劑說(shuō)明書進(jìn)行試驗(yàn)。判斷標(biāo)準(zhǔn)參考《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2009年版)》。確認(rèn)試劑由上海英旻泰生物技術(shù)有限公司提供，經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)并在有效期內(nèi)使用。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用EXCEL 2003進(jìn)行錄入，SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用%表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 初篩陽(yáng)性標(biāo)本確認(rèn)結(jié)果及帶型分布 185例初篩陽(yáng)性標(biāo)本確認(rèn)陰性128例(69.19%)，陽(yáng)性42例(22.71%)，不確定15例(8.11%)。42例陽(yáng)性標(biāo)本中g(shù)p120、gp160、p24帶型陽(yáng)性率為100.00%，p31、p51、p66和gp41陽(yáng)性率均大于90.00%。不確定標(biāo)本中，p24陽(yáng)性率最高，有12例，占80.00%；其次為gp160，有3例，占20.00%；gp41、p51、p31，p17各1例，各占6.67%。見(jiàn)表1。

表1 初篩陽(yáng)性標(biāo)本確認(rèn)結(jié)果和帶型分布[n(%)]

2.2 不同S/CO值標(biāo)本的確認(rèn)結(jié)果和帶型分析 185例初篩陽(yáng)性標(biāo)本中出現(xiàn)陽(yáng)性帶型共57例，其中有40例S/CO值大于6.00，有14例S/CO值大于1.00且小于或等于3.00，有3例S/CO值大于3.00且小于或等于6.00。陽(yáng)性帶型出現(xiàn)率最高為S/CO值大于6.00組，不同S/CO值的3組間，帶型出現(xiàn)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=35.16，P=0.009)。見(jiàn)表2。

表2 不同S/CO值初篩陽(yáng)性標(biāo)本確認(rèn)結(jié)果和帶型分布[n(%)]

3 討 論

本次研究結(jié)果顯示，185例陽(yáng)性標(biāo)本中，確認(rèn)陽(yáng)性42例，真陽(yáng)性比例為22.71%，低于遼陽(yáng)、遵義等地的報(bào)道[1-2]，高于長(zhǎng)治、邯鄲等周邊地區(qū)的報(bào)道[3-4]。這可能與本中心自2014年起縮小“灰區(qū)”設(shè)置，采用第4代酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑進(jìn)行抗-HIV篩查有關(guān)?？茖W(xué)制訂“灰區(qū)”能有效減少假陽(yáng)性發(fā)生，第4代ELISA試劑在檢測(cè)傳統(tǒng)抗體的同時(shí)，還能檢測(cè)p24抗原，提高敏感性和特異性，但存在交叉反應(yīng)等非特異性反應(yīng)，仍有一定假陽(yáng)性[5]。

HIV感染人體后，不同抗體在人體內(nèi)產(chǎn)生的時(shí)間和作用并不相同。原發(fā)性抗體水平在感染后2～4周開(kāi)始上升，3～6個(gè)月后達(dá)到高峰并持續(xù)整個(gè)潛伏期。血清抗體種類包括中和抗體、抗-p24和針對(duì)病毒不同組分的抗體。本次研究顯示，WB確證陽(yáng)性者均為HIV-1型感染，全帶型陽(yáng)性為41例，占97.62%；出現(xiàn)8條及以上帶型者19例，占45.24%。其中，gp160、gp120、p24出現(xiàn)率為 100.00%，p31、p51、p66帶型出現(xiàn)率均大于90.00%，與俞根龍等[6]的報(bào)道相似。出現(xiàn)全帶型提示患者正處于感染期，且其將持續(xù)整個(gè)潛伏期，表明本地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者抗-HIV陽(yáng)性者多數(shù)處于感染期未進(jìn)入獲得性免疫缺乏綜合征(AIDS)期。由于HIV結(jié)構(gòu)蛋白水平、抗原性強(qiáng)弱和產(chǎn)生相應(yīng)抗體時(shí)間不同，且不同個(gè)體對(duì)不同抗原成分的免疫應(yīng)答強(qiáng)度存在差異，導(dǎo)致WB帶型存在一定差異，但也預(yù)示了疾病感染的進(jìn)展程度。本次研究陽(yáng)性標(biāo)本中，Env gp41缺失率最高，有41例，占97.62%。gp41帶作為外膜蛋白帶，出現(xiàn)晚于gp160和gp120帶，在病毒侵入靶細(xì)胞時(shí)才會(huì)大量存在。gag p55帶型缺失22例，占52.38%。其可能因機(jī)體免疫功能嚴(yán)重受損，免疫應(yīng)答能力減弱，使某些抗體產(chǎn)生量下降，缺失率增高，提示疾病進(jìn)展速度較快[7]。p31缺失3例，占7.14%，其中2例為全帶型，1例僅出現(xiàn)gag基因表達(dá)的p17、p24和Env基因表達(dá)的gp120帶型。p31帶型缺失可能預(yù)示患者為早期感染[8]，尤其是伴隨Env區(qū)帶型的缺失。此外，陽(yáng)性標(biāo)本中還有2例出現(xiàn)p39帶，抗-p39出現(xiàn)可能與不同人群的免疫力差異有關(guān)[9]。

由于含有較ELISA試驗(yàn)更全面的HIV特異性抗原成分，WB試驗(yàn)可以確定參與反應(yīng)的抗原，廣泛應(yīng)用于HIV感染確認(rèn)試驗(yàn)。但是，由于病毒抗體產(chǎn)生時(shí)間和試驗(yàn)敏感性等問(wèn)題，該試驗(yàn)結(jié)果存在不確定性，需要進(jìn)一步追蹤確認(rèn)。本次研究顯示，15例不確定結(jié)果中，p24帶型陽(yáng)性率最高，為80.00%；其次為gp160和p17，為20.00%，與前期報(bào)道相似[10]。雖然有報(bào)道認(rèn)為gag 類大部分為非特異性反應(yīng)[11]，但也有部分為感染早期患者，需要進(jìn)一步追蹤確認(rèn)[12]。而本次試驗(yàn)的不確定結(jié)果以p24帶最多，需引起進(jìn)一步重視。

本結(jié)果還對(duì)S/CO值和帶型出現(xiàn)率的關(guān)系進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)隨著S/CO值增高，確認(rèn)符合率逐漸增高，除p24和gp41外，其余帶型出現(xiàn)率逐漸增高，表明隨著病毒增殖活躍，機(jī)體產(chǎn)生的抗體水平逐漸增高，ELISA和WB試驗(yàn)對(duì)抗體的檢出率也逐漸增高。試驗(yàn)中有5例單試劑陽(yáng)性標(biāo)本(S/CO值大于6.00)和2例雙試劑陽(yáng)性結(jié)果(S/CO值為1.31、1.00，5.26、1.02)確認(rèn)為陰性，2例單試劑陽(yáng)性(S/CO值為3.89和1.73)確認(rèn)為陽(yáng)性，表明并不能以初篩S/CO值判斷是否感染，必須進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。

綜上所述，山西省血液中心無(wú)償獻(xiàn)血者HIV篩查試驗(yàn)存在一定假陽(yáng)性結(jié)果，HIV陽(yáng)性獻(xiàn)血者多數(shù)處于感染期，隨著初篩S/CO值增高，帶型出現(xiàn)率逐漸增高，但須進(jìn)行追蹤確認(rèn)試驗(yàn)，確認(rèn)其是否感染。

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Analysis of the confirmation results and banding patterns of the HIV antibody of unpaid blood donors in Taiyuan City

SHANBaifeng,YUANWeiyu,FENGZe,ZHANGLiuming

(DepartmentofClinicalLaboratory,ShanxiBloodCenter,Taiyuan,Shanxi030024,China)

Objective To analyze the confirmation results and banding patterns of the HIV antibody of unpaid blood donors in Taiyuan city.Methods Western blot was used to confirm the positive samples of 185 blood donors in primary screening.SPSS 13.0 analysis was used to analyze the experimental results and banding patterns.Results A total of 128 negative cases were confirmed,15 cases were not confirmed and 42 cases were positive.The positive rates of banding patterns of gp120,gp160 and p24 were all 100.00%,and which of p51,p66 and p31 were all higher than 90.00%.In the undetermined samples,there were 12 positive cases of p24,which accounted for 80.00%,followed by gp160,3 positive cases and accounted for 20.00%.With the increase of S/CO value,rates of banding patterns gradually increased,and the highest rate group was the S/CO higher than 6.00(χ2=35.16,P=0.009).Conclusion There are some false positive results in the HIV screening test.The specimens which are confirmed positive are mostly in the virus infection period.Positive samples in primary screening must be conducted confirmed test so as to determine whether the cases are infected.

HIV; Western blot; confirmed test; banding patterns

陜柏峰，男，主管技師，主要從事病原微生物及血液免疫學(xué)方面的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.21.025

A

1673-4130(2016)21-3017-03

2016-04-11

2016-06-22)