袁玉玶，王 麗，魏學(xué)文，余漢忠，權(quán)翠俠

(徐州醫(yī)科大學(xué)附屬市立醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇徐州 221002)

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·論 著·

NT-ProBNP與脂蛋白a測(cè)定在2型糖尿病腎損傷中的應(yīng)用研究

袁玉玶，王 麗，魏學(xué)文，余漢忠，權(quán)翠俠

(徐州醫(yī)科大學(xué)附屬市立醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇徐州 221002)

目的 探討氨基末端B型利鈉肽前體(NT-ProBNP)與脂蛋白a在2型糖尿病患者中的變化。方法 健康對(duì)照組62例，2型糖尿病患者129例，其中不伴糖尿病腎病64例(DM組)、伴糖尿病腎病65 例(DN組)。干式免疫熒光定量法測(cè)定NT-ProBNP，免疫比濁法測(cè)定血清脂蛋白a與胱抑素C(Cys-C)。結(jié)果 健康對(duì)照組血清NT-ProBNP與脂蛋白a水平為(58.62±24.31)pg/mL、(102.35±43.50)mg/L；DM組為(368.70±356.50)pg/mL、(192.19±184.40)mg/L；DN組為(820.66±730.85)pg/mL、(328.17±285.71)mg/L。健康對(duì)照組血清Cys-C水平為(0.52±24.31)mg/L；DM組為(0.84±0.12)mg/L；DN組為(1.97±1.15)mg/L。結(jié)論 NT-ProBNP、脂蛋白a和糖尿病及其微血管病變密切相關(guān)，可作為診斷糖尿病腎病和評(píng)估腎臟損傷程度的指標(biāo)。

糖尿??； 腎臟損傷； 氨基末端B型利鈉肽前體； 脂蛋白a

糖尿病是由多種病因引起的內(nèi)分泌代謝性疾病，最常見慢性并發(fā)癥為糖尿病慢性腎臟疾病，此為終末性腎衰的主要原因，早期積極干預(yù)是改變患者預(yù)后的關(guān)鍵[1]。研究表明，氨基末端B型利鈉肽前體(NT-ProBNP)可能是預(yù)測(cè)慢性腎臟疾病的新標(biāo)志物[2]。糖尿病引起動(dòng)脈粥樣硬化可導(dǎo)致微血管病變，糖尿病腎病為糖尿病微血管病變的并發(fā)癥。脂蛋白a水平升高與冠狀動(dòng)脈粥樣樣硬化的發(fā)生密切相關(guān)，是當(dāng)前心腦血管疾病極有價(jià)值的危險(xiǎn)性預(yù)測(cè)指標(biāo)。研究表明，脂蛋白a與糖尿病微血管病變密切相關(guān)，是2型糖尿病腎病患者腎損傷進(jìn)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[3]；胱抑素C(Cys-C)反映廣泛內(nèi)皮功能紊亂和血管損傷，是與腎小球?yàn)V過率相關(guān)的重要指標(biāo)，也是評(píng)價(jià)糖尿病腎損傷可靠、敏感的內(nèi)源性指標(biāo)[4]。筆者通過檢測(cè)血清NT-ProBNP與脂蛋白a水平在2型糖尿病患者中的變化，將其與Cys-C進(jìn)行相關(guān)性分析，探討血清NT-ProBNP與脂蛋白a聯(lián)合檢測(cè)對(duì)2型糖尿病患者腎損傷的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 根據(jù)2010年中國糖尿病學(xué)會(huì)研究制訂的中國人2型糖尿病的診斷治療標(biāo)準(zhǔn)[5]，選擇2011～2015年在本院確診的2型糖尿病患者129例[其中不伴糖尿病腎病64 例(DM組)、伴糖尿病腎病65 例(DN組)]，年齡25～82歲。所有入選患者均排除急慢性心力衰竭、急性腦血管意外、冠心病等。健康體檢者62例(健康對(duì)照組)，年齡20～66歲，排除肝臟、腎臟、內(nèi)分泌和心腦血管疾病。

1.2 方法

1.2.1 樣品收集 禁食12 h，早上空腹抽血5 mL，其中2 mL血用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝混勻；3 mL血待血清析出，3 000 r/min離心10 min，分離血漿和血清。

1.2.2 測(cè)量?jī)x器 NT-ProBNP測(cè)定采用干式免疫熒光定量法，試劑和標(biāo)準(zhǔn)品由基蛋生物科技公司提供；儀器為基蛋生物科公司Getein110型分析儀。脂蛋白a與Cys-C測(cè)定采用膠乳增強(qiáng)免疫比濁法和免疫比濁法，試劑和標(biāo)準(zhǔn)品由萬泰德瑞診斷技術(shù)有限公司提供；儀器為貝克曼公司AU5800型生化分析儀。

2 結(jié) 果

血清NT-ProBNP、脂蛋白a與Cys-C檢測(cè)結(jié)果 2型糖尿病患者NT-ProBNP水平顯著高于健康對(duì)照組(P<0.05),脂蛋白a水平顯著高于健康對(duì)照組(P<0.05)。DN組NT-ProBNP與脂蛋白a水平顯著高于DM組(P<0.05)和健康對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

表1 血清NT-ProBNP、脂蛋白a與Cys-C檢測(cè)結(jié)果比較

3 討 論

B型利鈉肽(BNP)由心肌細(xì)胞受刺激后產(chǎn)生，初始產(chǎn)物為前BNP前體(Pro-ProBNP)，該肽的1個(gè)26氨基信號(hào)肽被立即去除，形成含108個(gè)氨基酸的BNP前體(ProBNP)，后者在內(nèi)切酶的作用下裂解為含76個(gè)氨基酸、無生物活性的NT-ProBNP和含32個(gè)氨基酸、有活性的BNP。因?yàn)镹T-ProBNP半衰期長(zhǎng)，穩(wěn)定性好，故臨床通過檢測(cè)血漿NT-ProBNP來了解BNP水平。BNP通過受體介導(dǎo)與利鈉肽受體C(NPR-C)結(jié)合被清除，也可通過血流的中性肽鏈內(nèi)切酶而降解。BNP主要通過與利鈉肽受體A(NPR-A)作用，發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，在調(diào)節(jié)血壓、血容量、水鹽平衡等方面發(fā)揮著重要作用。

2型糖尿病引起慢性組織器官損傷是1個(gè)漫長(zhǎng)過程，在慢性組織器官損傷過程中會(huì)產(chǎn)生多種不良化學(xué)物質(zhì)，導(dǎo)致血管緊張度與水鹽平衡紊亂，發(fā)生細(xì)胞過度肥大、纖維化等病理改變，而腎臟發(fā)生上述變化時(shí)不僅激活BAAS系統(tǒng)使致密斑球旁細(xì)胞產(chǎn)生腎索，同時(shí)也激活心臟利鈉肽系統(tǒng)，可致BNP分泌增加。NPR-A、NPR-C主要存在于腎臟及血管，腎損傷引起腎臟NPR-A、NPR-C受損。NPR-A減少將引起B(yǎng)NP反應(yīng)性增加[6]。BNP的清除主要由NPR-C介導(dǎo)，通過細(xì)胞內(nèi)吞作用，最終由細(xì)胞內(nèi)的溶酶體降解，而NPR-C減少可引起B(yǎng)NP升高。此外，BNP可通過非特異中性肽鏈內(nèi)切酶打開利鈉肽環(huán)狀結(jié)構(gòu)而降解，此酶在肺臟及腎臟中水平較高。腎臟中BNP具有擴(kuò)張腎小球入球動(dòng)脈、收縮出球動(dòng)脈等功能，有助于提高腎小球?yàn)V過率。腎損傷患者腎小球?yàn)V過率下降可能導(dǎo)致BNP升高，促使腎小球?yàn)V過率增加；2型糖尿病腎損傷患者常伴有鈉、水潴留，可致心臟負(fù)荷加重，使BNP分泌增加。糖尿病腎損傷是2型糖尿病的1種慢性并發(fā)癥，BNP可直接作用于出球小動(dòng)脈，加重腎小球高濾過、高灌注狀態(tài)，引起腎臟損傷。本研究結(jié)果顯示，DN組患者NT-ProBNP水平高于DM組患者(P<0.05)，因此2型糖尿病患者除考慮常見急慢性心力衰竭、冠心病等因素引起的NT-ProBNP水平升高，還應(yīng)考慮糖尿病腎臟損傷引起的NT-ProBNP水平升高。

脂蛋白a是1種由肝臟合成的特異脂蛋白，和低密度脂蛋白(LDL)結(jié)構(gòu)相似，除含有載脂蛋白B(ApoB)外，還含有與纖維蛋白溶酶原(PLG)結(jié)構(gòu)相似的載脂蛋白A(ApoA)，其主要生理功能尚未完全闡明，猜測(cè)其可能參與血清脂質(zhì)到組織細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)。由于ApoA與PLG在結(jié)構(gòu)上有同源性，ApoA可能與PLG競(jìng)爭(zhēng)細(xì)胞表面的PMC受體或者直接阻礙PLG的激活，從而抑制纖維蛋白的溶解，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成。血清脂蛋白a水平升高反映了廣泛內(nèi)皮功能紊亂和血管損傷，是與動(dòng)脈硬化病變進(jìn)展過程中疾病演進(jìn)的相關(guān)標(biāo)志。由各種原因?qū)е滤皆龈叩闹鞍譨也可直接促進(jìn)粥樣血栓的形成。2型糖尿病引起的血管并發(fā)癥，以大血管病變引起的冠心病和微血管病變引起的糖尿病腎病最為常見[7-9]。在腎臟中，血清脂蛋白a可滲透到達(dá)內(nèi)膜下與血管壁膠原蛋白、糖蛋白形成動(dòng)脈粥樣斑塊，破壞內(nèi)膜的完整性，還可和血管內(nèi)膜基質(zhì)成分(葡聚糖胺、蛋白聚糖和6-硫酸軟骨素)結(jié)合，引起腎小球基底膜增厚及毛細(xì)血管阻塞，進(jìn)一步導(dǎo)致腎臟微血管內(nèi)皮損傷和功能減退。2型糖尿病患者脂蛋白a水平升高，會(huì)造成腎小球毛細(xì)血管阻塞及微循環(huán)障礙，并通過某些生長(zhǎng)因子的生成，促進(jìn)腎動(dòng)脈血管的硬化，導(dǎo)致腎病綜合征形成。提示脂蛋白a水平與腎病綜合征的發(fā)展過程緊密相關(guān)，其水平高低一定程度上反映糖尿病腎損傷的嚴(yán)重程度。

Cys-C作為1種小分子蛋白(相對(duì)分子質(zhì)量為13×103)，是胱氨酸蛋白酶的1種抑制劑，機(jī)體所有有核細(xì)胞均可表達(dá)。循環(huán)血液中Cys-C能自由透過腎小球，在近曲小管幾乎全部被上皮細(xì)胞攝取并分解。Cys-C水平不受飲食、身高、體質(zhì)量、年齡、惡性腫瘤等影響，是反映腎小球?yàn)V過率的1個(gè)敏感、特異指標(biāo)[10]。2型糖尿病患者腎小球通透性改變，包括腎小球?yàn)V過膜電荷的丟失及基底膜孔徑的改變，在糖尿病腎病的早期均表現(xiàn)為Cys-C水平升高。

筆者研究發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者NT-ProBNP與脂蛋白a水平顯著高于健康對(duì)照組,而DN組患者NT-ProBNP與脂蛋白a水平顯著高于DM組患者。糖尿病患者NT-ProBNP與脂蛋白a檢測(cè)結(jié)果與Cys-C相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)其呈正相關(guān)，表明NT-ProBNP、脂蛋白a水平與糖尿病腎病的腎臟損傷程度平行。NT-ProBNP、脂蛋白a和Cys-C聯(lián)合檢測(cè)可作為診斷糖尿病腎病和評(píng)估腎臟損傷程度的指標(biāo)，對(duì)研究2型糖尿病患者腎損傷具有重要價(jià)值。

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Clinical value of detection of N-terminal pro-brain natriuretic peptide and lipoprotein(a) in patients with type 2 diabetic nephropathy

YUANYuping,WANGLi,WEIXuewen,YUHanzhong,QUANCuixia

(DepartmentofClinicalLaboratory,theMunicipalHospitalAffiliatedofXuzhouMedicalUniversity,Xuzhou,Jiangsu221002,China)

Objective To observe the changes of N-terminal pro-brain natriuretic peptide(NT-ProBNP) and lipoprotein(a)[LP(a)] level in patients with type 2 diabetes and to investigate their clinical significance in patients with diabetic nephropathy.Methods A total of 62 healthy individuals were selected as control group,and 64 patients with type 2 diabetes without diabetic nephropathy were selected as DM group and 65 patients type 2 diabetes combined with diabetic nephropathy were chosen as DN group.The levels of NT-ProBNP and LP(a) was detected by the methods of dry type immune fluorescence quantitative and latex enhanced immune turbidity respectively.Results The level of serum NT-ProBNP in DM group[(368.70±356.50)pg/L] was significantly higher than that in the control group[(58.62±24.31)pg/L],P<0.05.The level of LP(a) in DM group[(192.19±184.40)mg/L] was significantly higher than that in control group[(102.35±43.50)mg/L],P<0.05.And the level of NT-ProBNP[(820.66±730.85)pg/mL] and LP(a)[(328.17±285.71)mg/L] in DN group were significantly higher than that in DM group(P<0.05).Conclusion NT-ProBNP and LP(a) in type 2 diabetic patients may correlate with type 2 diabetes and diabetic microangiopathy,which can be used as the reliable clinical markers for assessing the severity and diagnosis of diabetic nephropathy.

diabetes; diabetic nephropathy; N-terminal pro-brain natriuretic peptide; lipoprotein(a)

袁玉玶，女，副主任技師，主要從事免疫方面的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.21.021

A

1673-4130(2016)21-3007-03

2016-03-28

2016-06-18)