蒙志平，黎勇明，楊 玲，吳 險(xiǎn)，梁金艷，林麗文，梁 婷，黃川英

(廣西壯族自治區(qū)貴港市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 537100)

?

·論 著·

宮頸細(xì)胞HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)在宮頸病變?cè)\斷中的價(jià)值研究*

蒙志平，黎勇明，楊 玲，吳 險(xiǎn)，梁金艷，林麗文，梁 婷，黃川英

(廣西壯族自治區(qū)貴港市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 537100)

目的 探討宮頸細(xì)胞人乳頭狀瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA檢測(cè)對(duì)于診斷宮頸病變的應(yīng)用價(jià)值。方法 選取2014年10月至2015年10月在該院婦產(chǎn)科因?qū)m頸炎性反應(yīng)、陰道異常出血或排液門診患者就診的407例患者，行新柏氏液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)(TCT)和HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)，對(duì)TCT結(jié)果異常的34例患者行病理科組織病理學(xué)檢查，以病理報(bào)告為“金標(biāo)準(zhǔn)”。統(tǒng)計(jì)分析HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)對(duì)宮頸病變的應(yīng)用價(jià)值。結(jié)果 TCT檢測(cè)出異?；颊?4例，占總患者數(shù)的8.35%，無上皮內(nèi)瘤變或惡性病變(NILM)患者373例，占總患者數(shù)的91.65%；HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)異?；颊?7例，占總患者數(shù)的21.37%。2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。TCT 不同結(jié)果與HPV E6/E7 mRNA 拷貝數(shù)的比較表明，從意義不明的不典型鱗狀細(xì)胞(ASC-US)到不能排除高度上皮內(nèi)病變的不典型鱗狀上皮(ASC-H)、鱗狀上皮內(nèi)低度病變(LSIL)、鱗狀上皮內(nèi)高度病變(HSIL)，隨著細(xì)胞學(xué)診斷級(jí)別的升高，HPV E6/E7 mRNA 陽性率同步升高(P<0.05)。結(jié)論 宮頸細(xì)胞HPV E6/E7 mRNA診斷可較大程度降低過度檢查和治療的可能性，診斷宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅱ+的準(zhǔn)確性較高，可降低宮頸病變的漏診率，其對(duì)于宮頸病變的診斷有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

宮頸病變； 人乳頭狀瘤病毒； 宮頸活檢； 診斷價(jià)值

宮頸癌是一種惡性腫瘤，也是迄今為止已明確致癌因素的癌癥之一。此類癌癥主要是指發(fā)生于陰道處及鱗狀上皮細(xì)胞、宮頸管內(nèi)膜柱狀上皮細(xì)胞交界處的腫瘤。宮頸癌由多因素綜合作用而產(chǎn)生，其發(fā)病率已經(jīng)僅次于乳腺癌，在女性惡性腫瘤疾病中占第2位。其發(fā)病趨勢(shì)呈年輕化，發(fā)病率逐年上升。某些患者在患上宮頸病變后因?yàn)榕R床癥狀較不顯著，造成對(duì)病情嚴(yán)重程度的錯(cuò)誤估計(jì)，進(jìn)而逐漸發(fā)展為較嚴(yán)重的情況。雖然目前對(duì)于宮頸病變的檢測(cè)不斷完善，許多地區(qū)的宮頸浸潤癌發(fā)病率和病死率已大幅下降，但在我國，該病的診斷水平卻仍然需要提高。已有研究表明，高危型人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染是導(dǎo)致宮頸癌的主要病因，其E6、E7等基因能夠表達(dá)出干擾正常細(xì)胞周期、染色體穩(wěn)定，并促使其凋亡的蛋白質(zhì)，使女性的宮頸疾病不斷惡化，最終演變成宮頸癌。所以，在病變?cè)缙谶M(jìn)行治療、再治療過程中，不斷隨訪對(duì)于宮頸癌防治有一定的積極意義。這不僅對(duì)患者治療過程中的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)估、篩查、術(shù)后病情觀察具有應(yīng)用價(jià)值，更能夠提高宮頸癌高危人群的生命質(zhì)量。

近年來，臨床通常采用諸如HPV DNA檢測(cè)等方法對(duì)宮頸病變進(jìn)行篩查，雖能一定程度降低宮頸癌的發(fā)生率，但因HPV DNA檢測(cè)是1種病因檢測(cè)，對(duì)致癌基因轉(zhuǎn)錄和活動(dòng)等方面的預(yù)測(cè)作用較低。而HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)，可有效地預(yù)測(cè)病毒的活動(dòng)程度及病變程度，從而制訂更好的治療方案。本研究探討了高危型HPV E6/E7 mRNA在宮頸病變的臨床診斷價(jià)值，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年10月至2015年10月在本院婦產(chǎn)科因?qū)m頸炎性反應(yīng)、體檢發(fā)現(xiàn)宮頸贅生物、白帶增多、白帶帶血、性交后異常出血或排液門診患者共407例，患者年齡21～67歲，平均年齡為(40.2±9.5)歲，所有患者宮頸均完整，身體健康狀況良好，均自愿進(jìn)行新柏氏液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)(TCT)和HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)。2項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果均為“陰性”判定為正常；對(duì)TCT結(jié)果異常的34例患者行病理科組織病理學(xué)檢查，以病理報(bào)告為“金標(biāo)準(zhǔn)”進(jìn)行最終比較分析。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者自身患有免疫抑制疾病；(2)作者患有精神疾病不愿配合治療；(3)患者自身患有慢性疾??；(4)患者有宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)治療史。本次試驗(yàn)所有女性患者在其年齡、學(xué)歷、宮頸疾病分級(jí)等方面的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本次試驗(yàn)研究已通過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，每位女性患者均簽署個(gè)人知情同意書。

1.2 方法 TCT檢測(cè)。以專用拭子，緊貼宮頸口稍用力順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5周，放入專用、含有細(xì)胞保存液的試管瓶中。采用膜式液基超薄細(xì)胞學(xué)和離心沉淀檢測(cè)技術(shù)，按宮頸細(xì)胞學(xué)TBS分類系統(tǒng)進(jìn)行分級(jí)，即:無上皮內(nèi)瘤變或惡性病變(NILM)、意義不明的不典型鱗狀細(xì)胞(ASC-US)、不能排除高度上皮內(nèi)病變的不典型鱗狀上皮(ASC-H)、鱗狀上皮內(nèi)低度病變(LSIL)、鱗狀上皮內(nèi)高度病變(HSIL)和鱗狀細(xì)胞癌(SCC)。

HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)。用專用宮頸刷于宮頸外口及頸管內(nèi)旋轉(zhuǎn)5圈，折斷刷柄，置于專用保存液瓶中待用，根據(jù)科蒂亞(新鄉(xiāng))試劑盒檢測(cè)要求，經(jīng)過信號(hào)放大、加入標(biāo)記熒光物質(zhì)底物后，在配套冷光儀光度計(jì)上檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果為拷貝數(shù)，經(jīng)公司計(jì)算軟件自動(dòng)判斷結(jié)果。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn) 依據(jù)陰道鏡病理活檢為“金標(biāo)準(zhǔn)”，將診斷結(jié)果為高級(jí)別宮頸病變(CINⅡ+級(jí)及宮頸浸潤癌)及慢性宮頸炎、CINⅠ級(jí)患者。宮頸細(xì)胞檢查診斷，本院采用TCT行宮頸細(xì)胞學(xué)檢查方式(根據(jù)2001年國家制訂的TBS分類系統(tǒng))，可對(duì)患者做出描述性診斷報(bào)告。具體分類如下：(1)TCT正常：患者皮膚無上皮內(nèi)病變或者惡性的改變(但是也包括自身存在的炎性反應(yīng)或者正常情況)；(2)TCT異常：鱗狀細(xì)胞發(fā)生異常且人體腺細(xì)胞異常等情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本次研究數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 TCT及HPV E6/E7 mRNA對(duì)患者的陽性檢出率 TCT異?；颊吖?4例，占總患者數(shù)的8.35%；NILM患者373例，占總患者數(shù)的91.65%；HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)異常患者87例，占總患者數(shù)的21.37%。2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 2種方法檢測(cè)結(jié)果的比較 TCT 不同結(jié)果與HPV E6/E7 mRNA 拷貝數(shù)的比較表明，從ASC-US 到ASC-H、LSIL、HSIL，隨著細(xì)胞學(xué)診斷級(jí)別的升高，HPV E6/E7 mRNA 陽性率同步升高(P<0.05)。見表1。

表1 TCT及HPV E6/E7 mRNA的標(biāo)本結(jié)果[n(%)]

3 討 論

我國針對(duì)宮頸癌臨床診斷主要采用 “三階梯篩查”方案，其基礎(chǔ)為“細(xì)胞學(xué)”，依靠進(jìn)一步陰道鏡檢查或?qū)m頸活組織的病理學(xué)檢查等。但上述檢查均基于形態(tài)學(xué)，檢測(cè)出的細(xì)胞形態(tài)結(jié)果其實(shí)是HPV感染后的結(jié)果，而部分細(xì)胞可能受到細(xì)菌或者其他微生物影響而未表現(xiàn)出典型癥狀，加上檢驗(yàn)或者試驗(yàn)過程中的操作誤差、制片誤差、計(jì)算誤差及閱片主觀性，都會(huì)制約“細(xì)胞檢測(cè)”的準(zhǔn)確性，容易造成較高的漏診率。已有研究表明，宮頸癌與CIN的主要誘發(fā)因素為HPV的持續(xù)感染，而歐美國家已將高危型HPV作為聯(lián)合檢測(cè)的最初篩選方式。定期檢查高危型HPV感染能有效判斷宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，這已成為1種有效的調(diào)查手段。但是，目前仍未解決HPV持續(xù)感染的無癥狀性、低特異性和可逆轉(zhuǎn)性，意味著HPV DNA檢測(cè)方式有可能檢驗(yàn)出無意義感染，不僅增加患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，還影響患者心態(tài)，從而最終影響到患者的生命質(zhì)量及治療情況。

宮頸癌是嚴(yán)重的臨床婦科疾病，病因復(fù)雜但具有一定規(guī)律性，同時(shí)涉及飲食習(xí)慣、家族史及基因缺陷等原因[1-3]，基因障礙在上述致病因素中占據(jù)主要地位。宮頸癌的形成是惡性腫瘤細(xì)胞在患者子宮口和陰道內(nèi)部異常聚集，導(dǎo)致惡性腫塊[4-6]。隨著臨床診斷技術(shù)的發(fā)展和民眾護(hù)理意識(shí)的增強(qiáng)，近年來宮頸癌診斷率和治療率有所提高[7-12]。但宮頸病變?nèi)匀浑y診斷、難治療，且易發(fā)展為惡性腫瘤，甚至危及生命。HPV DNA檢測(cè)是診斷宮頸病變的有效途徑之一，能較好地診斷患者腫瘤情況，對(duì)于宮頸病變的治療有一定作用，但HPV DNA檢測(cè)對(duì)高危宮頸病變?cè)\斷不靈敏。HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)對(duì)腫瘤情況加劇時(shí)高度表達(dá)的E6/E7較為靈敏，是診斷宮頸癌的有效方式。本次研究采用HPV DNA檢測(cè)和HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)對(duì)宮頸病變患者進(jìn)行診斷，目的在于探討HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)的診斷效果和臨床應(yīng)用價(jià)值。

本研究結(jié)果表明，TCT異?；颊?4例，占總患者數(shù)的8.35%，NILM患者373例，占總患者數(shù)的91.65%；HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)異常患者87例，占總患者數(shù)的21.37%。2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；TCT 不同結(jié)果與HPV E6/E7 mRNA 拷貝數(shù)的比較表明，從ASC-US 到ASC-H、LSIL、HSIL，隨著細(xì)胞學(xué)診斷級(jí)別的升高，HPV E6/E7 mRNA 陽性率同步升高(P<0.05)。HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)對(duì)于高危宮頸病變有較高陽性檢出率(83.3%)，而在一般宮頸病變中的陽性檢出率較低。表明不同宮頸病變級(jí)別HPV E6/E7 mRNA拷貝值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，HPV E6/E7 mRNA 表達(dá)隨宮頸病變級(jí)別升高呈上升趨勢(shì)。

綜上所述，宮頸細(xì)胞HPV E6/E7 mRNA診斷可較大程度降低過度檢查和治療的可能性，診斷CINⅡ+的準(zhǔn)確性較高，可降低宮頸病變的漏診率，對(duì)于宮頸病變的診斷有較高臨床應(yīng)用價(jià)值。提示高危型HPV E6/E7 mRNA若呈陽性，需引起重視，以防漏診宮頸癌。但是，此種方式能否真正作為宮頸病變?cè)\斷的首選方案進(jìn)行大范圍使用，仍需要進(jìn)行更大樣本的檢驗(yàn)，方可得出結(jié)論。

[1]李玲,張秋瑩,劉楊.人乳頭狀瘤病毒持續(xù)感染狀態(tài)下E6、E7蛋白mRNA在宮頸癌不同分期的表達(dá)結(jié)果[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2016,4(4):514-516.

[2]何曉清,唐躍華,胡惠軍,等.惠州地區(qū)高危型HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)在宮頸癌篩查中的臨床意義[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2016,3(3):334-335.

[3]陳法,何保昌,黃江峰,等.HPV感染對(duì)口咽癌無病生存期影響的Meta分析[J].腫瘤防治研究,2016,43(1):30-34.

[4]鄭蓓佳,陳琪,顧華敏.高危型人乳頭狀瘤病毒聯(lián)合TCT檢測(cè)在宮頸癌早期篩查中的應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2016,02(2):247-249.

[5]楊燕芬,邱毅,佟雁,等.HPV多重感染與宮頸病變的關(guān)系研究[J].中國婦幼保健,2016,2(2):254-256.

[6]閆振宇,安玉英,張澍,等.高危型人乳頭狀瘤病毒感染檢測(cè)與宮頸病變影響因素分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2016,1(1):161-163.

[7]Rosa C,Patrick P,Gabriel D,et al.Cervical cancer screening in developing countries at a crossroad:emerging technologies and policy choices[J].World J Clin Oncol,2015,6(6):281-290.

[8]陳海迎,鄭小冬,郭敏,等.高危型人乳頭瘤病毒E6/E7檢測(cè)在宮頸細(xì)胞學(xué)ASC-US分流管理中的應(yīng)用[J].中國婦幼保健,2015,30(35):6186-6188.

[9]王一羽,王立宏,李軍,等.陜西省商洛地區(qū) HPV 感染狀況和分型特征[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2016,2(2):288-291.

[10]張博,張穎,牛力春,等.液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合 HPV mRNA 檢測(cè)對(duì)宮頸癌的診斷價(jià)值[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2016,1(1):118-122.

[11]朱方培,任青玲.宮頸癌及癌前病變?cè)缙诤Y查的新進(jìn)展[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2016,1(1):149-152.

[12]韋彩素,李建湘,藍(lán)燕,等.人乳頭瘤病毒E6/E7 mRNA表達(dá)水平與宮頸病變病理級(jí)別的相關(guān)性分析[J].廣西醫(yī)學(xué),2015(11):1559-1561.

Diagnostic value of the HPV E6/E7 mRNA of cervical cells in the detection of cervical lesions*

MENGZhiping,LIYongming,YANGLing,WUXian,LIANGJinyan,LINLiwen,LIANGTing,HUANGChuanying

(DepartmentofClinicalLaboratory,People′sHospitalofGuigangCity,Guigang,Guangxi537100,China)

Objective To investigate the diagnostic value of the human papilloma virus(HPV) E6/E7 mRNA of cervical cells in the detection of cervical lesions.Methods A total of 407 patients with cervical inflammation and abnormal vaginal bleeding were selected from October 2014 to October 2015 in the department of obstetrics and gynecology.By thinprep cytologic test(TCT),cervical cells of the patients were detected.And the E6/E7 mRNA of cervical cells was also detected.In addition,abnormal TCT results of 34 patients were inspected by pathological examination again,and the results of the pathological examination were the gold standard.Value of HPV E6/E7 mRNA in detection of cervical lesions was analyzed.Results There were 34 cases having abnormal TCT results,which accounted for 8.35% in all the patients.There were 373 cases without intraepithelial neoplasia or malignant lesion,which accounted for 91.65% in all the patients.And 87 cases had abnormal HPV E6/E7 mRNA detection results,which accounted for 21.37%.The difference between the two groups had statistical significance(P<0.05).Along with the levels of cytohistologic diagnosis,the positive rates of the HPV E6/E7 mRNA in the testing of atypical squamous cells of undetermined significance(ASC-US),atypical squamous cells of highly intraepithelial lesion(ASC-H),low-grade squamous intraepithelial lesion(LSIL) and high-grade squamous intraepithelial lesion(HSIL) were also increased(P<0.05).Conclusion Cervical HPV E6/E7 mRNA detection may reduce the excessive examination and treatment and it has the higher accuracy of cervical intraepithelial neoplasia(CIN) Ⅱ+,at the same time,it can reduce the rate of misdiagnosis of cervical lesions.The method has higher clinical value in the diagnosis of cervical lesions.

cervical lesions; HPV; cervical biopsy; diagnostic value

廣西壯族自治區(qū)貴港市科學(xué)技術(shù)局項(xiàng)目(140837)。

蒙志平，男，主管技師，主要從事免疫學(xué)和分子診斷學(xué)方面的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.21.014

A

1673-4130(2016)21-2987-03

2016-02-06

2016-04-26)