張偉 譚永勝 馬和平

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·論著·

miR-31協(xié)同5-Fu發(fā)揮抗腫瘤作用的體內(nèi)研究

張偉 譚永勝 馬和平

目的 探討miR-31在胃癌細胞對化療藥物5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性方面的影響，以及在小鼠體內(nèi)miR-31聯(lián)合5-Fu對胃癌生長的影響和機制。方法 實時定量PCR的方法檢測臨床耐藥胃癌患者癌組織和非胃癌患者胃組織中以及PBMC中的miR-31的表達，野生型MFC細胞和耐5-Fu 的MFC-R細胞中miR-31的表達，同時，流式細胞術檢測耐藥胃癌患者癌組織和非胃癌患者外周血中Treg細胞的比例，分析miR-31和FOXP3的相關性。MTS檢測miR-31對MFC細胞增殖的影響。miR-31和5-Fu聯(lián)合用藥后對小鼠體內(nèi)腫瘤生長的影響，LDH釋放實驗檢測CD+8T細胞對MFC的殺傷影響。結(jié)果 臨床耐藥胃癌患者癌組織和PBMC中的miR-31水平顯著低于非胃癌患者(P<0.05)，而外周CD3+CD+4CD25+FOXP3+T細胞比例顯著高于非癌癥患者(P<0.05)，且二者呈負相關(P<0.05)。而在耐5-Fu的MFC細胞中，miR-31的水平降低。當轉(zhuǎn)染miR-31到MFC細胞中后，miR-31的高表達增加了細胞對5-Fu的敏感性(P<0.05)。小鼠體內(nèi)實驗證實，miR-31協(xié)同5-Fu可以顯著抑制MFC細胞在小鼠體內(nèi)生長，并且miR-31可以降低荷瘤小鼠腫瘤浸潤以及外周的Treg的比例，增強CD+8T細胞的CTL功能(P<0.05)。結(jié)論 miR-31能夠抑制胃癌MFC細胞的生長可能是通過直接增加癌細胞對化療藥物的敏感性，并且通過抑制Treg細胞的功能來實現(xiàn)的。

胃癌;miR-31;5-Fu;FOXP3;腫瘤抑制

胃癌是一種極為常見的惡性腫瘤，被認為是導致患者死亡的第三大腫瘤。盡管現(xiàn)在臨床上有諸多抗胃癌的藥物，但是因為該腫瘤的易復發(fā)和易轉(zhuǎn)移性，導致該疾病預后較差，經(jīng)典化療藥物的五年生存率僅有10%，轉(zhuǎn)移性的胃癌患者的生存期不超過1年[1]。目前備受矚目的免疫藥物，如抗VEGFR-2的單抗ramuciru mab，作為二線藥物對于轉(zhuǎn)移性胃癌患者的生存率有所改善。而其他的抗血管生產(chǎn)藥物，如貝伐單抗，舒尼替尼，索拉非尼不能改善生存率[2-4]。隨著免疫調(diào)節(jié)在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中越來越受到重視，越來越多的以免疫分子為靶點的藥物應用到臨床治療中，如PDL-1的單抗，EGFR的單抗，HER2的單抗等，取得了良好的抗腫瘤效果。 調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)具有重要的功能，叉頭蛋白P3(FOXP3)是Treg細胞的重要轉(zhuǎn)錄因子。Treg在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的作用，主要是通過抑制效應性CD+4T細胞和CD+8T細胞的功能而促進腫瘤生長[5,6]。 腫瘤組織中FOXP3+的Treg細胞增多預示腫瘤預后較差以及腫瘤進展較快。在卵巢癌，乳腺癌和肺癌中，Treg細胞含量增加[7-9]。也有研究顯示在胃癌患者中，外周血中的Treg數(shù)量增加[10]。Treg細胞介導的對細胞毒性T細胞，DC以及NK細胞的免疫抑制功能成為腫瘤免疫逃逸的重要機制之一。因此，探究Treg在胃癌中的變化機制對于胃癌的發(fā)生發(fā)展和治療有重要意義。miRNA是一些短的非編碼RNA，是在進化過程中形成的保守的具有多效性功能的小分子RNA。其主要是通過與基因的3’-UTR區(qū)結(jié)合，在翻譯水平或者轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)靶基因的表達，進而參與細胞生長增殖和腫瘤發(fā)生[11-13]。一個microRNA通?？梢哉{(diào)控十幾個靶基因。人體中，約有六百多個microRNA調(diào)控基因組中1/3的mRNA編碼。有研究顯示，miRNA具有抑制癌基因表達而抑制腫瘤生長的作用，某些miRNA在腫瘤生長方面表現(xiàn)出了雙向作用[14-16]。因此，miRNA可以作為腫瘤治療的一個潛在的靶點，以及腫瘤的生物學標志。miR-31 具有多個靶基因，在乳腺癌中，miR-31表達受到抑制后，增加了腫瘤的轉(zhuǎn)移[17]。在前列腺癌中，miR-31的下調(diào)增加了癌細胞對化療藥物的抗藥性[18]。但是miR-31在胃癌中的表達及作用尚不清楚。在本研究中，我們先用軟件TargetScan Human 6.2預測到FOXP3是miR-31潛在的一個靶基因。進一步分析了胃癌患者中Treg與miR-31的表達水平的相關性闡明了miR-31和FOXP3在胃癌進展中的作用，為胃癌的治療提供了新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 外周血，人胃癌組織和非胃癌組織來源于內(nèi)蒙古醫(yī)院腫瘤科患者以及消化科懷疑胃癌但經(jīng)組織病理檢查確診的非胃癌患者，胃癌患者對于化療藥物均產(chǎn)生多藥物耐藥且接受了手術治療。小鼠胃癌細胞MFC培養(yǎng)于含有10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中。SPF級的615小鼠購買于中國科學院上海生物研究所。PE-anti FOXP3 抗體(克隆號150D)購于Biolegend公司。5-氟脲嘧啶(5-Fu)購于Sigma公司。miR-31mimic， miR-31NC，miR-31 inhibitor 和miR-31 inhibitor NC 由invitrogen公司合成。pGL3-FOXP3-3’UTR(含F(xiàn)OXP3啟動子的質(zhì)粒)由本實驗室構(gòu)建。所有實驗均通過了內(nèi)蒙古人民醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會同意。

1.2 5-Fu耐藥細胞株的篩選 根據(jù)文獻報道用逐步增加5-Fu藥物濃度的方法篩選耐5-Fu的MFC細胞。具體方法為先用MTS(Promega公司)法檢測5-Fu對BGC-823的IC50濃度約為7.49 g/ml。MFC細胞在培養(yǎng)過程中首先加入7.5 g/ml的5-Fu培養(yǎng)24 h，將死亡的細胞用PBS洗去，再加入10 g/ml的5-Fu培養(yǎng) 24 h，反復用濃度逐步增加(10、15、20、25 g/ml)的5-Fu培養(yǎng)4次后，將存活的MFC細胞消化下來并維持在7.5 g/ml的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)2周后，去掉5-Fu后進行細胞實驗，得到的抗5-Fu的MFC細胞命名為MFC-R。

1.3 質(zhì)粒的構(gòu)建 pGL3-FOXP3-3’UTR的構(gòu)建方法參照Rouas的方法進行構(gòu)建[19]。

1.4 RT-PCR檢測miR-31的表達 按照說明書，TRizol法提取組織和細胞的總RNA，紫外分光光度計檢測總RNA的濃度。以5 g的總RNA 為模板進行逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA第一鏈。以CDNA為模板，采用SYBR Green real-time PCR Master Mix試劑盒進行實時定量PCR 檢測miR-31的表達，U6為內(nèi)參。所用引物序列為：miR-31 P1：TAATACTGCCTGGTAATGATGA，P2：GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACAGCTAT；U6 P1：GCGCGTCGTGAAGCGTTC，P2：GTGCAGGGTCCGAGGT[19]。結(jié)果采用2-ΔΔCT進行分析。

1.5 細胞處理 MFC細胞按2×105個/ml接種于6孔板，培養(yǎng)24 h細胞達到70%融合的時候， 分別單獨給予50 nmol/L的miR-31 mimic或者miR-31 NC，或者聯(lián)合10 g/ml的5-Fu處理細胞72 h，MTS法檢測細胞的存活率。

1.6 流式細胞術實驗 為了檢測外周T細胞中FOXP3的表達，取胃癌患者和非胃癌者的外周血，用淋巴細胞分離液ficoll分離人PBMC，細胞計數(shù)儀計數(shù)后調(diào)整細胞濃度為2×106個/ml，接種到6孔板中培養(yǎng)，同時加入PMA和離子霉素刺激24 h。收獲細胞，PBS洗滌細胞一次，加入抗人的APC-anti CD4抗體，per-cp-anti CD25抗體，室溫孵育30 min。PBS洗滌細胞1次，離心手機細胞，4%多聚甲醛固定細胞30 min，破膜劑再與細胞孵育20 min后。加入PE-anti FOXP3抗體，孵育40 min，PBS洗滌細胞1次，離心，去上清，細胞過濾后，用C6 accuri 流式細胞儀檢測FOXP3的表達。為了檢測腫瘤細胞的生長增殖情況，MFC和MFC-R細胞經(jīng)5-Fu處理24 h，收獲細胞，然后用70%的冰冷乙醇在-20℃固定細胞1 h。PBS洗滌細胞3次后，去上清，再用100 μl PBS重懸細胞，加入PE-anti Ki67 抗體，避光染色30 min。流式細胞儀檢測Ki67的表達。

1.7 雙熒光報告基因檢測 為了確定FOXP3是否為miR-31的靶基因，將miR-31mimic,miR-31 NC,miR-31 inhibitor,miR-31 inhibitor NC分別與pGL3-FOXP3-3’UTR質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染T淋巴瘤細胞株Jurkat細胞，轉(zhuǎn)染48 h 后收獲細胞，用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)(Promega公司)檢測熒光強度。

1.8 小鼠體內(nèi)實驗 6～8周的615小鼠接種MFC和MFC-R腫瘤細胞1周后，待腫瘤開始長出將小鼠隨機分為8組，每組6只，分別為， MFC組，MFC-R組，MFC+5-Fu組，MFC-R+5-Fu組，MFC+miR-NC+5-Fu組，MFC-R+miR-NC +5-Fu組(50 mg/kg)，MFC+miR-31+5-Fu組，MFC-R+ miR-31+5-Fu組。未接種腫瘤的小鼠為正常對照組。每2天測量腫瘤體積大小，腫瘤體積按V=1/2ab2。21 d后，處死小鼠，取腫瘤組織檢測miR-31的表達。取小鼠瘤組織和脾臟檢測小鼠FOXP3的表達。為了檢測CD+8T細胞的功能，將瘤組織的淋巴細胞分離后，細胞計數(shù)，并調(diào)整細胞濃度到1×106個/ml，該細胞作為效應細胞。同時，將MFC細胞收獲，并調(diào)整細胞濃度，該細胞作為靶細胞。將效靶細胞比例分別調(diào)整為25∶1，10∶1,5∶1,2.5∶1接種到96孔板中，培養(yǎng)12 h。用LDH試劑盒檢測CD+8T細胞的CTL功能。

1.9 統(tǒng)計學分析 應用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，計量資料以±s表示，采用t檢驗，并進行相關性分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-31和FOXP3在胃癌患者和非癌患者中的表達 為了檢測抗化療藥患者組織中miR-31的表達水平，手術切除的癌組織以及非癌組織用來提取總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。同時提取外周血中PBMC的總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。實時定量PCR的結(jié)果顯示胃癌組織中的miR-31的表達水平顯著低于非癌組織(P<0.05)。并且胃癌患者的PBMC中miR-31水平顯著低于非胃癌患者的(P<0.05)。將胃癌患者和非癌患者的外周血分離獲得PBMC后，流式細胞術檢測外周T細胞中FOXP3的表達。結(jié)果顯示胃癌患者的外周T細胞的FOXP3水平顯著高于對照非癌患者(P<0.05)。并且miR-31與FOXP3在胃癌組織中的表達呈負相關(R2分別為0.7863和0.7135,P<0.05)。見圖1，表1。

圖1 胃癌患者和非胃癌患者的組織，PBMC中miR-31和 CD+4CD25+FOXP3的表達;A.胃癌患者和非胃癌患者組織中miR-31的表達水平;B.胃癌患者和非胃癌患者PBMC中miR-31的表達水平;C.胃癌患者和非胃癌患者PBMC中CD+4CD25+FOXP3+ Treg的水平;D.組織中miR-31與FOXP3的相關性。E.PBMC中miR-31與FOXP3的相關性

表1 miR-31在瘤患者和非瘤者中不同組織中的表達水平 n=20,±s

表1 miR-31在瘤患者和非瘤者中不同組織中的表達水平 n=20,±s

注：與腫瘤患者相比較，*P<0.01

項目胃癌非癌患者胃組織0.87±0.093.15±1.01*PBMC0.75±0.083.97±1.08*Treg比例15.37±1.2112.57±0.91*

2.2 miR-31在耐5-Fu和非耐藥胃癌細胞MFC中的表達 為了檢測miR-31是否與胃癌細胞的耐藥性有關，我們篩選出了耐5-Fu的細胞株，MFC-R。MFC和MFC-R細胞分別用10 g/ml的5-Fu處理24 h后，收獲細胞，提取細胞的總RNA。實時定量PCR檢測miR-31在MFC和MFC-R細胞中的表達水平，結(jié)果顯示MFC-R中的miR-31水平顯著低于MFC中的miR-31水平(P<0.05)。為了進一步檢測miR-31與MFC耐藥的相關性，MFC和MFC-R細胞分別用5-Fu 10 g/ml)聯(lián)合miR-31 mimic,miR-31 NC(各50 nmol/L)處理48 h后，流式細胞術檢測胞內(nèi)Ki67的表達水平，以反映細胞存活情況。結(jié)果顯示miR-31顯著促進了MFC和MFC-R對5-Fu的敏感性，這個結(jié)果提示miR-31可增加胃癌細胞對化藥5-Fu的藥物敏感性。見圖2，表2。

圖2 miR-31對小鼠胃癌細胞MFC耐5-Fu的影響;A.野生型MFC和耐5-Fu的MFC-R中miR-31的表達水平;B.流式檢測miR-31在MFC和MFC-R對5-Fu敏感性的影響

表2 流式檢測ki67在不同細胞中的表達水平 n=6,%,±s

表2 流式檢測ki67在不同細胞中的表達水平 n=6,%,±s

注：與vehicle組比較，*P<0.05;與5-Fu+miR-31對照比較，#P<0.05

組別MFCMFC-Rvehicle1.12±0.131.35±0.455-Fu+miR-31對照0.65±0.08*1.14±0.38#5-Fu+miR-310.37±0.05*0.47±0.09*

2.3 miR-31聯(lián)合5-Fu降低了腫瘤在小鼠體內(nèi)的生長速率 將MFC，MFC-R細胞接種到SPF級的615小鼠背部皮下。待7 d后，小鼠腫瘤開始長出時開始給藥，腹腔注射5-Fu，50 mg/kg，尾靜脈注射miR-31 mimics和miR-31 NC(200 nmol/L)，給藥3次/周，共給藥3周。每2天記錄腫瘤大小，計算腫瘤體積。結(jié)果表明，miR-31顯著增加了小鼠體內(nèi)MFC胃癌細胞對5-Fu的藥物敏感性。而且逆轉(zhuǎn)了抗5-Fu的細胞株MFC-R對5-Fu的耐藥性。見圖3，表3。

圖3 miR-31和5-Fu聯(lián)合用藥對小鼠胃癌MFC增殖的影響。A.5-Fu對MFC和MFC-R在小鼠體內(nèi)FOXP3抗體避光孵育40 min，PBS洗滌1次，過濾后，流式細胞儀檢測FOXP3的表達。結(jié)果顯示，miR-31生長的影響。B，C.miR-31聯(lián)合5-Fu用藥對MFC和MFC-R在小鼠體內(nèi)生長的影響。D.小鼠體內(nèi)腫瘤生長代表圖

2.4 miR-31表達增加可以降低外周以及腫瘤浸潤的T細胞中FOXP3的水平 將各組荷瘤小鼠的瘤組織取出，研磨后，濾網(wǎng)過濾，獲得單細胞懸液。細胞計數(shù)后，調(diào)整細胞濃度為5×106個/ml。加入APC-anti mouse CD4，per-cp-anti mouse CD25 抗體，室溫避光孵育30 min后，將細胞固定破膜，再加入PE-anti mouse給藥組的瘤組織中，F(xiàn)OXP3的表達水平顯著下降(P<0.05)。這說明FOXP3是miR-31的潛在作用靶點。為了證實FOXP3與miR-31的相關性，將miR-31mimic,miR-31 NC,miR-31 inhibitor,miR-31 inhibitor 分別于pGL3-FOXP3-3’UTR共轉(zhuǎn)染Jurkat細胞后檢測FOXP3的表達水平。雙熒光報告基因和weatern blot結(jié)果顯示，miR-31 能顯著降低FOXP3的水平，表明FOXP3是miR-31的作用靶點。為了進一步驗證這一結(jié)果，我們將荷瘤小鼠的脾細胞取出后，流式細胞術檢測脾臟中T細胞的FOXP3的表達，結(jié)果與組織浸潤的T細胞的FOXP3水平一致(結(jié)果未顯示)。見表4,圖4。

圖4 miR-31對FOXP3的表達水平的影響;A.各組荷瘤小鼠瘤組織中浸潤的T細胞中FOXP3表達水平;B.轉(zhuǎn)染的Jurkat細胞中FOXP3的表達水平;C.共轉(zhuǎn)染的Jurkat細胞中熒光報告基因水平檢測;D.共轉(zhuǎn)染的Jurkat細胞中FOXP3蛋白水平的檢測

表3 動物體內(nèi)腫瘤重量 n=6,g,±s

表3 動物體內(nèi)腫瘤重量 n=6,g,±s

注：與vehicle組比較，*P<0.05

組別MFCMFC-Rvehicle1.54±0.531.65±0.255-Fu1.04±0.231.34±0.195-Fu+miR-31對照1.09±0.13*1.24±0.1385-Fu+miR-310.57±0.05*0.77±0.09*

表4 腫瘤組織中FoxP3的表達水平 n=6,%,±s

表4 腫瘤組織中FoxP3的表達水平 n=6,%,±s

注：與miR-31 對照組比較，*P<0.05，#P<0.05

類別MFCmiR-31對照1.21±0.09miR-31mimic0.64±0.02#inhibitor對照1.19±0.15miR-31inhibitor1.87±0.07*

2.5 miR-31表達增加可以增強CD+8T細胞的CTL功能 CD+8T細胞在抗腫瘤方面有重要作用，為了檢測miR-31改變FOXP3后是否增強CD+8T的CTL功能，我們將腫瘤組織中的淋巴細胞用淋巴細胞分離液分離后，檢測CD+8T細胞的CTL功能。結(jié)果表明，miR-31高表達的腫瘤組織能誘導更強的CTL功能。見圖5。

圖5 各組藥物處理的腫瘤組織浸潤的CD+8T細胞的CTL功能檢測

3 討論

MicroRNA 已被證實在腫瘤細胞的分化，增殖，凋亡和轉(zhuǎn)移方面具有重要作用[20]。miR-31作為一種小分子非編碼RNA與多種腫瘤細胞的耐藥性有密切的關系，如前列腺癌[21]。 有研究表明，抗凋亡蛋白E2F6是miR-31潛在的靶點，miR-31就是通過該分子發(fā)揮生物學功能的，但是在某些腫瘤細胞中 miR-31表達水平下降，從而導致其抗藥性的出現(xiàn)。在本研究中，我們證實miR-31可以增加胃癌細胞對5-Fu的藥物敏感性，并且miR-31可以FOXP3為靶點，降低Treg細胞的比例。Treg在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮了免疫抑制功能，可以通過分泌抑制性細胞因子IL-10，TGF-b等抑制CD+4T和CD+8T的功能。而CD+8T細胞在抗腫瘤過程中發(fā)揮了重要的作用。因此提高CD+8T細胞的功能也成為抑制腫瘤生長的靶點之一。

我們的研究顯示，miR-31在體外可以提高胃癌細胞MFC對5-Fu的敏感性，其具體的機制可能是通過抑制了E2F6蛋白而發(fā)揮功能[20]。但是更有意義的是對小鼠體內(nèi)的荷瘤的抑制作用，miR-31顯著增強了5-

Fu對MFC在615小鼠體內(nèi)的抑制作用。其機制除了可能直接增加MFC對5-Fu的敏感性外，還可能通過降低Treg細胞的水平，從而進一步提高了CD+8T細胞的殺傷功能。我們的研究發(fā)現(xiàn)，在小鼠荷瘤后，給予miR-31后，與5-Fu組相比，進一步抑制了腫瘤的生長增殖。腫瘤浸潤的T細胞中，miR-31降低了FOXP3的表達，提示Treg的功能被抑制。同時檢測了外周Treg的比例，脾臟中T細胞的FOXP3的表達水平下降，Treg功能被抑制。

目前，免疫分子在抗腫瘤中的作用越來越被重視，并且逐步應用到臨床腫瘤治療中。有研究報道，在小細胞肺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、黑色素瘤等腫瘤浸潤的T細胞中，Treg比例上調(diào)[22,23]。Treg通過分泌IL-10，TGF-b，等細胞因子抑制CD+8T細胞，NK細胞的細胞毒作用。還可以誘導抗原遞呈細胞表面的IDO的表達，發(fā)生免疫耐受。FOXP3作為Treg的重要轉(zhuǎn)錄因子，對其生物功能有重要影響。因此，抑制FOXP3的表達，即可減弱Treg的免疫抑制功能。FOXP3作為miR-31的一個潛在的靶點，可以被其抑制，從而促進了免疫系統(tǒng)的抗腫瘤作用。我們的研究表明，miR-31可以增加胃癌細胞對化藥5-Fu的敏感性，可能是通過抑制E2F6實現(xiàn)的，但是其具體的分子機制尚不清楚，有待于我們后期的進一步研究。在小鼠體內(nèi)，miR-31可以和化藥5-Fu協(xié)同發(fā)揮抗胃癌的作用，其機制為一方面增加了腫瘤細胞對5-Fu的敏感性，另一方面降低了FOXP3的表達，抑制了Treg的比例，增強了T細胞的殺瘤效應，該研究為胃癌的抗腫瘤治療提供了新的思路和靶點。

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Study on the anti-tumor effects of miR-31 combined with 5-Fu in vitro and in vivo

ZHANGWei,TANYongsheng,MAHeping.DepartmentofInterventionTreatment,People’sHospitalofInnerMongoliaAutonomousRegion,Hohhot010017,China

Objective To explore the effects of miR-31 on the sensitivity of 5-fluorouracil (5-Fu) in gastric cancer cells in vitro,and to investigate the effects of miR-31 combined with 5-Fu on mice in vivo.Methods The expression levels of miR-31 in peripheral blood mononuclear cell (PMBC) and the cancer tissues of patients with gastric cancer and with clinical resistance and the expression levels of miR-31 in PMBC and gastric tissues of patients without gastric cancer were detected by Real-time PCR,moreover, which in wild type MFC cells and MFC cells with chemoresistance to 5-Fu (MFC-R cells) were also detected by Real-time PCR in vitro.Meanwhile the proportion of Treg cells (CD+3CD+4CD+25FOXP3+T cells) in gastric cancer tissues of patients with gastric cancer and in peripheral blood of patients without gastric cancer were detected by flow cytometry,moreover, the correlation between miR-31and FOXP3 was analyzed. The effects of miR-31on proliferation of MFC cells were detected by MTS,moreover, the effects of miR-31 combined with 5-Fu on tumor growth of mice in vivo were detected by MTS. Besides the effects of CD+8T cells on MFC were detected by LDH releasing assay.Results The expression levels of miR-31 in cancer tissues and PMBC of patients with gastric cancer as well as clinical resistance were significantly lower than those of patients without gastric cancer (P<0.05), however, the proportion of CD+3CD+4CD+25FOXP3+T cells in peripheral blood of patients with gastric cancer was significantly higher than that of patients without gastric cancer (P<0.05),furthermore, there was an negative correlation between them (P<0.05). However in MFC cells with chemoresistance to 5-Fu,the expression levels of miR-31were decreased. After miR-31was transfected into MFC cells, the high-expression of miR-31increased the sensitivity to 5-Fu (P<0.05). The experimental results in mice in vivo showed that miR-31combined with 5-Fu could obviously inhibit the growth of MFC cells in mice in vivo,moreover, miR-31 could decrease tumor infiltration of mice with tumor and could decrease the proportion of Treg cells in peripheral blood of mice and enhance CTL function of CD+8T cells (P<0.05).Conclusion miR-31can inhibit the growth of gastric cancer MFC cells by increasing the sensitivity of cancer cells to chemotherapeutic drugs directly and by inhibiting the function of Treg cells.

gastric cancer；miR-31；5-fluorouracil；FOXP3；tumor inhibition

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.22.009

010017 呼和浩特市，內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院介入診療科

R 735.2

A

1002-7386(2016)22-3395-06

2016-05-24)