王家美 肖淑蘭

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·論著·

COX-2和VEGF與子宮腺肌病的相關(guān)性

王家美 肖淑蘭

目的 探討環(huán)氧合酶-2(COX-2)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在子宮腺肌病患者子宮內(nèi)膜的表達(dá)及臨床意義。方法 選取病理證實為子宮腺肌病標(biāo)本44例(觀察組)和非子宮腺肌病標(biāo)本29例(對照組)，采用免疫組化法檢測子宮腺肌病原位和異位子宮內(nèi)膜COX-2和VEGF表達(dá)。結(jié)果 子宮肌腺病增殖期和分泌期原位和異位內(nèi)膜COX-2蛋白表達(dá)陽性率分別為40.00%和57.89%、88.00%和94.74%，明顯高于對照組(P<0.05)；異位內(nèi)膜COX-2蛋白表達(dá)陽性率高于原位內(nèi)膜(P<0.05)；子宮肌腺病增殖期和分泌期原位和異位內(nèi)膜VEGF蛋白表達(dá)陽性率分別為44.00%和92.00%、73.68%和100.00%，均明顯高于對照組內(nèi)膜(P<0.05)；異位內(nèi)膜VEGF蛋白表達(dá)陽性率高于原位(P<0.05)；COX-2和VEGF在異位內(nèi)膜和原位內(nèi)膜表達(dá)呈正相關(guān)(r2=0.700和0.350，P<0.05)。結(jié)論 子宮腺肌病異位內(nèi)膜COX-2和VEGF高表達(dá)，且呈正相關(guān)性，可能與子宮腺肌病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

子宮腺肌??；環(huán)氧合酶-2；內(nèi)皮生長因子；免疫組化

子宮腺肌癥和子宮內(nèi)膜異位癥為臨床上較為常見的婦科良性疾病，雖然屬于良性疾病，但在病理特征上常具有局部浸潤的特點?；颊叱１憩F(xiàn)為漸進(jìn)性的痛經(jīng)及不孕等，長期的子宮腺肌癥的發(fā)生發(fā)展可導(dǎo)致兩側(cè)卵巢及輸卵管的破壞和機(jī)化，導(dǎo)致卵巢功能的喪失，預(yù)后不佳[1]。對于子宮內(nèi)膜異位癥病因?qū)W的研究表明，子宮內(nèi)膜腺體以及間質(zhì)成分異位于子宮內(nèi)膜以外的區(qū)域是導(dǎo)致疾病發(fā)生發(fā)展的主要因素，而細(xì)胞增生、局部炎癥損傷以及新生血管的形成對于促進(jìn)子宮內(nèi)膜腺體的侵襲具有重要的調(diào)節(jié)意義[2,3]。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及環(huán)氧化酶2(Cyclooxygenase 2,COX-2)在調(diào)控新生血管的形成以及細(xì)胞增殖過程中具有重要意義[4,5]，本研究探討COX-2和VEGF在子宮腺肌病患者子宮內(nèi)膜的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1月至2016年3月在我院行子宮切除術(shù)，且病歷資料完整的患者73例，其中子宮腺肌病44例(觀察組)，無癥狀子宮肌瘤29例(對照組)。所有患者診斷均經(jīng)病理證實，術(shù)前3個月內(nèi)未服用過任何激素類藥物治療。觀察組：年齡35～46歲，平均年齡(41.8±1.9)歲；增殖期25例，分泌期19例；對照組：年齡37～48歲，平均年齡(43.3±2.5)歲；增殖期18例，分泌期11例。

1.2 方法 組織采用石蠟包埋，切片機(jī)切取組織，厚度5 mm，用多聚賴氨酸處理。在脫蠟之前，將切片置于60℃恒溫箱中烘烤60 min。將切片用二甲苯浸泡10 min，更換二甲苯后再浸泡10 min。水化后進(jìn)行抗原修復(fù)，3%H2O2一甲醇溶液處理切片15 min，加入一抗COX-2和VEGF鼠單抗(購自南京碧云天生物科技有限公司)100 μl，37℃，濕盒孵育1 h。加入增強(qiáng)劑50 μl，室溫濕盒孵育20 min。加入HRP標(biāo)記二抗(兔來源，購自南京凱基生物科技有限公司)50 μl，室溫37℃，孵育30 min。每張片子加2滴新鮮配制的DAB溶液，顯微鏡下觀察。

1.3 結(jié)果判斷 以細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒視為陽性細(xì)胞，隨機(jī)選取5個具有代表意義的高倍視野，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)，取平均數(shù)作為最終結(jié)果，陽性細(xì)胞數(shù)<5%為(-)，5%≤陽性細(xì)胞數(shù)<25%為(+)，25%≤陽性細(xì)胞數(shù)≤50%為(++)，陽性細(xì)胞數(shù)>50%為(+++)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件，計量資料以±s表示，采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 COX-2蛋白表達(dá)情況 增殖期COX-2蛋白表達(dá)陽性率在觀察組異位內(nèi)膜為88.00%，在原位內(nèi)膜為40.00%，均明顯高于增殖期對照組內(nèi)膜(χ2=28.592和6.522，P=0.000和0.011均<0.05)；增殖期觀察組異位內(nèi)膜COX-2蛋白表達(dá)陽性率高于原位內(nèi)膜(χ2=12.500，P=0.000<0.05)。分泌期COX-2蛋白表達(dá)陽性率在觀察組異位內(nèi)膜為94.74%，在原位內(nèi)膜為57.89%，均明顯高于分泌期對照組內(nèi)膜(χ2=22.006和6.914，P=0.000和0.009均<0.05)；分泌期觀察組異位內(nèi)膜COX-2蛋白表達(dá)陽性率高于原位內(nèi)膜(χ2=7.134，P=0.008<0.05)。2組增值期和分泌期COX-2蛋白表達(dá)陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，說明沒有周期性變化。見表1。

表1 COX-2在增殖期和分泌期的表達(dá) 例

2.2 VEGF蛋白表達(dá)情況 增殖期VEGF蛋白表達(dá)陽性率在觀察組異位內(nèi)膜為92.00%，在原位內(nèi)膜為44.00%，均明顯高于增殖期對照組內(nèi)膜(χ2=24.845和4.523，P=0.000和0.033均<0.05)；增殖期觀察組異位內(nèi)膜VEGF蛋白表達(dá)陽性率高于原位內(nèi)膜(χ2=11.524，P=0.001<0.05)。分泌期VEGF蛋白表達(dá)陽性率在觀察組異位內(nèi)膜為100%，在原位內(nèi)膜為73.68%，均明顯高于分泌期對照組內(nèi)膜(χ2=15.771和4.043，P=0.000和0.044均<0.05)；分泌期觀察組異位內(nèi)膜VEGF蛋白表達(dá)陽性率高于原位內(nèi)膜(χ2=5.758，P=0.016<0.05)。各組增值期和分泌期VEGF蛋白表達(dá)陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 VEGF在增殖期和分泌期的表達(dá) 例

2.3 COX-2和VEGF蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析 經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析，COX-2和VEGF在異位內(nèi)膜和原位內(nèi)膜表達(dá)呈正相關(guān)(r2=0.700和0.350，P<0.05)。見表3、4。

表3 COX-2和VEGF在異位內(nèi)膜表達(dá)的相關(guān)性 例

表4 COX-2和VEGF在原位內(nèi)膜表達(dá)的相關(guān)性 例

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥為臨床上較為常見的良性侵襲性疾病，在婦產(chǎn)科臨床工作中，子宮內(nèi)膜異位癥的診治已由單純的手術(shù)治療向內(nèi)分泌聯(lián)合手術(shù)根治性治療的階段轉(zhuǎn)化。GNRH類藥物聯(lián)合腹腔鏡下內(nèi)異癥病灶剝除術(shù)雖然可以緩解75%左右的痛經(jīng)癥狀，并使得術(shù)后成功妊娠的幾率增加至45%[6,7]。但回顧性分析研究表明，子宮內(nèi)膜異位癥術(shù)后5年的復(fù)發(fā)率高達(dá)25%以上，且重癥子宮內(nèi)膜異位癥患者的卵巢功能破壞和衰竭的發(fā)生率可達(dá)15%以上[8,9]，提示現(xiàn)階段臨床上對于疾病診治的困境。同時對于異位癥發(fā)展過程中相關(guān)生物學(xué)分子標(biāo)志物的研究，將為疾病的內(nèi)分泌治療提供新的靶點。COX-2參與各種損傷性化學(xué)、物理和生物因子激活磷脂酶A2水解細(xì)胞膜磷脂，生成花生四烯酸，并參與到催化加氧生成前列腺素等病理過程，COX2對于增強(qiáng)子宮內(nèi)膜腺體的侵襲能力并加劇局部炎癥損傷，從而進(jìn)一步促進(jìn)內(nèi)膜腺體以及間質(zhì)成分對于卵巢皮質(zhì)的侵襲[10,11]。相關(guān)研究也證實，通過特異性抑制COX-2可以有效抑制腹腔鏡術(shù)后的卵巢內(nèi)異癥的復(fù)發(fā)率，并提高成功妊娠幾率[12]；VEGF 是參與調(diào)控血管生成的最重要的血管生長因子，VEGF對于維持內(nèi)異癥患者新生組織的血管活性，從而保持卵巢異位癥病灶的腺體活性和增殖能力具有重要意義[13]。本研究的創(chuàng)新性在于通過區(qū)分不同月經(jīng)周期的內(nèi)膜腺體中的COX以及VEGF的含量的變化，并進(jìn)行蛋白水平的分析和二者相關(guān)性的分析，從而為揭示COX以及VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展中的作用作出貢獻(xiàn)。

本研究發(fā)現(xiàn)異位癥患者子宮內(nèi)膜分泌期以及增殖期中的COX含量明顯高于正常對照人群，而異位癥病灶組織中的COX蛋白表達(dá)水平可進(jìn)一步上升，陽性表達(dá)率可達(dá)90%左右，提示COX與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展可能具有顯著的關(guān)聯(lián)。COX對于局部前列腺素合成的影響可以促進(jìn)局部炎癥因子如IL-6以及IL-8的生成，進(jìn)而影響到局部子宮內(nèi)膜腺體的對于輸卵管或者卵巢間質(zhì)的侵襲能力，促進(jìn)間質(zhì)浸潤和卵巢皮質(zhì)的破壞。Machado等[14,15]通過回顧性分析了93例重癥子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔鏡術(shù)后切除組織的免疫組化資料，發(fā)現(xiàn)在發(fā)生子宮直腸凹侵襲和子宮內(nèi)膜腺體侵犯的患者中，COX的表達(dá)陽性率可達(dá)76%以上，且隨著內(nèi)異癥患者臨床分期的增加，COX的陽性率可進(jìn)一步上升。子宮內(nèi)膜異位癥腺體等組織成分需要具有很強(qiáng)的血管生成能力從而維持局部異位內(nèi)膜的血流供應(yīng)，本研究中發(fā)現(xiàn)增殖期以及分泌期的VEGF蛋白表達(dá)陽性率在觀察組異位內(nèi)膜為95.00%左右，特別是在分泌期子宮內(nèi)膜腺體中幾乎全部表達(dá)，而異位內(nèi)膜中的VEGF蛋白表達(dá)陽性率可進(jìn)一步上升，明顯高于原位內(nèi)膜，統(tǒng)計學(xué)差異較為明顯，提示VEGF同樣是促進(jìn)疾病發(fā)生發(fā)展的重要因素。VEGF陽性表達(dá)率的上升可以促進(jìn)異位癥腺體組織侵襲、發(fā)展,使病灶不斷擴(kuò)大,加速異位內(nèi)膜的種植和對于卵巢功能的破壞。另外，對于COX以及VEGF關(guān)系的研究也發(fā)現(xiàn)，COX-2和VEGF在異位內(nèi)膜和原位內(nèi)膜表達(dá)呈正相關(guān)，提示COX-2和VEGF在促進(jìn)腺體侵襲能力的改變以及維持新生血管的活性等方面可能具有一定的協(xié)同作用，但相關(guān)機(jī)制仍然需要進(jìn)一步探討。

綜上所述，子宮腺肌病異位內(nèi)膜COX-2和VEGF高表達(dá)，二者是增強(qiáng)內(nèi)膜腺體的侵襲能力和誘導(dǎo)新生血管的主要調(diào)控因子, 在子宮腺肌病的發(fā)生 、 發(fā)展中可能存在重要的相關(guān)性，但具體機(jī)制仍然需要進(jìn)一步增大樣本量進(jìn)行探討。

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The correlation between COX-2 as well as VEGF and adenomyosis

WANGJiamei,XIAOShulan.DepartmentofObstetrics,TCMHospitalofShiyanCity,Hubei,Shiyan442000,China

Objective To investigate the expression and clinical significance of cyclooxygenase-2 (COX-2) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in endometrium of patients with adenomyosis.Methods The 44 cases of adenomyosis specimens identified by pathological examination were served as observation group,and the other 29 cases of non-adenomyosis specimens were served as control group.The expression levels of of COX-2 and VEGF in situ and ectopic endometrium were detected by immunohistochemisty.Results The positive expression rates of COX-2 protein in situ and ectopic endometrium at proliferative phase and secretory phase in observation group were 40.00% and 57.89%,88.00% and 94.74%,respectively,which were significantly higher than those in control group (P<0.05). The positive expression rate of COX-2 protein in ectopic endometrium was significantly higher than that in situ endometrium (P<0.05). The positive expression rates of VEGF protein in situ and ectopic endometrium at proliferative phase and secretory phase in observation group were 44.00% and 92.00%,73.68% and 100.00%,respectively, which were significantly higher than those in control group (P<0.05). The positive expression rate of VEGF protein in ectopic endometrium was significantly higher than that in situ endometrium (P<0.05).The expressions of COX-2 and VEGF in ectopic endometrium were positicely correlated to those in situ endometrium (r=0.700 and 0.350,respectively,P<0.05).Conclusion The high-expressions of COX-2 and VEGF exist in ectopic endometrium of patients with adenomyosis,moreover, there is a positive correlation between them,which may be related with the pathogenesis and development of adenomyosis.

adenomyosis; cyclooxygenase-2; vascular endothelial growth factor; immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.22.005

項目來源：湖北省自然科學(xué)基金資助項目(編號:2015FFB04210)

442000 湖北省十堰市中醫(yī)醫(yī)院產(chǎn)科

R 711.74

A

1002-7386(2016)22-3382-03

2016-05-02)