， ， ， ， (.廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院， 南寧 50004；2.亞熱帶生物資源保護(hù)與利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 廣西 南寧 50004； .廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所/廣西作物遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 南寧 50004)

道地藥材射干快繁體系的建立

薛艷霞1,2，張慧英1，郭輝3，洪登偉1,2，劉芳1,2
(1.廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院， 南寧 530004；2.亞熱帶生物資源保護(hù)與利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 廣西 南寧 530004； 3.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所/廣西作物遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 南寧 530004)

目的：建立射干快速繁殖體系，為人工栽培提供優(yōu)良種苗。方法：以道地藥材射干的根莖芽和莖腋芽為外植體，通過正交混合設(shè)計(jì)法篩選出影響誘導(dǎo)叢生芽增殖的主次因素。利用組織培養(yǎng)技術(shù)摸索適宜叢生芽增殖不同附加物的濃度。結(jié)果與結(jié)論：莖腋芽是最佳的外植體，叢生芽增殖的最佳培養(yǎng)基是MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+糖6%+瓊脂5%，叢生芽數(shù)目為207個(gè)，增殖率高達(dá)690.0%。

射干； 叢生芽； 快速繁殖

射干(Belamcandachinensis(L.) DC.)為鳶尾科鳶尾屬多年生草本植物。其主治咽喉腫痛、痰咳氣喘、扁桃體炎、咽喉炎、關(guān)節(jié)炎、牙痛、月經(jīng)不調(diào)等癥。臨床上，以射干為主要成分的復(fù)方有射干口服液；射干麻黃湯；射干麻黃沖劑；加味射干麻黃湯;射干潤喉片[1]。射干常規(guī)繁殖主要有種子繁殖和根狀莖繁殖，種子繁殖發(fā)芽率低且至少需要3年時(shí)間。根狀莖繁殖費(fèi)時(shí)費(fèi)力，用種量大，且長期進(jìn)行無性繁殖導(dǎo)致種質(zhì)退化，影響產(chǎn)量及品質(zhì)，無法滿足目前市場的大量需求和品質(zhì)要求。組織培養(yǎng)可實(shí)現(xiàn)種苗的大量快速繁殖，具有重要的科研和生產(chǎn)意義[2]。前期已經(jīng)建立以葉片為外植體誘導(dǎo)愈傷組織植株再生體系以及對射干試管根莖的誘導(dǎo)做了系統(tǒng)研究[3-5]。王曉煒等[6]以幼莖為外植體誘導(dǎo)愈傷組織建立快繁體系。但以根莖芽和莖腋芽為外植體誘導(dǎo)叢生芽的快速繁殖體系未見有相關(guān)報(bào)道。本研究以根莖芽和莖腋芽外植體建立射干快繁體系技術(shù)，為射干人工栽培提供大量優(yōu)質(zhì)種苗。

1 材料與方法

1.1 材 料

以射干根莖芽和莖腋芽為外植體(經(jīng)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所馬小軍教授鑒定)。

1.2 方法

1.2.1 多因素試驗(yàn)

為摸索影響射干叢生芽誘導(dǎo)的主要因素和次要因素，采用正交混合設(shè)計(jì)法L16(43×21)研究培養(yǎng)基、細(xì)胞分裂素、NAA和外植體不同組合對叢生芽增殖的影響(表1)。試驗(yàn)選取生長健壯的莖腋芽和新鮮的根莖芽接種在不同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。每個(gè)處理接種6瓶，每瓶5塊，每隔3 d觀察1次，1個(gè)月后統(tǒng)計(jì)叢生芽的增殖率。

表1 L16(43×21)正交試驗(yàn)方案

因素A培養(yǎng)基B細(xì)胞分裂素(mg/L)CNAAD外植體試驗(yàn)號1MSBA(1．0)0根莖芽21/2MSKT(1．0)0．5莖腋芽3B5Zip(1．0)1．04N6ZT(0．1)1．5

1.2.2 BA不同濃度對叢生芽增殖的影響

將初代培養(yǎng)獲得的無菌芽切成1.2 cm長，接種到以MS+NAA 0.5 mg/L為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度(0.5，1.0，2.0， 3.0 mg/L)的BA培養(yǎng)基上，每個(gè)處理接種10瓶，每瓶接3個(gè)。每隔3 d觀察1次，1個(gè)月后統(tǒng)計(jì)叢生芽數(shù)、芽增殖率。

1.2.3 不同糖濃度對叢生芽增殖的影響

將無菌苗切割成約1 cm長，3株為1叢接種在以MS+BA 2 mg/L，添加不同糖濃度(2.0%，4.0%，6.0%，8.0%)的增殖培養(yǎng)基上，每個(gè)處理接種10瓶，每瓶接3個(gè)。每隔3 d觀察1次，1個(gè)月后統(tǒng)計(jì)叢生芽數(shù)、芽增殖率。

2 結(jié)果與分析

2.1 多因素試驗(yàn)

試驗(yàn)選取生長健壯的射干根莖芽和莖腋芽接種在不同的增殖培養(yǎng)基上。試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 L16(43×21) 正交試驗(yàn)結(jié)果

因素A培養(yǎng)基B細(xì)胞分裂素(mg/L)CNAA(mg/L)D外植體增殖率(%)試驗(yàn)號11(MS)1(BA)4(1．5)1(根莖芽)501．0722(1/2MS)1(BA)1(0)2(莖腋芽)467．8533(B5)1(BA)3(1．0)2(莖腋芽)421．3344(N6)1(BA)2(0．5)1(根莖芽)428．5451(MS)2(KT)3(1．0)2(莖腋芽)443．3362(1/2MS)2(KT)2(0．5)1(根莖芽)425．4773(B5)2(KT)4(1．5)1(根莖芽)402．3384(N6)2(KT)1(0)2(莖腋芽)397．6591(MS)3(Zip)1(0)1(根莖芽)446．52102(1/2MS)3(Zip)4(1．5)2(莖腋芽)421．92113(B5)3(Zip)2(0．5)2(莖腋芽)395．14124(N6)3(Zip)3(1．0)1(根莖芽)370．20131(MS)4(玉米素)2(0．5)2(莖腋芽)506．71142(1/2MS)4(玉米素)3(1．0)1(根莖芽)487．03153(B5)4(玉米素)1(0)1(根莖芽)422．25164(N6)4(玉米素)4(1．5)2(莖腋芽)403．47Ⅰ1897．631818．791734．273483．41Ⅱ1802．271668．781755．863457．4Ⅲ1641．051633．781721．89Ⅳ1599．861819．461728．796940．81(總和)R297．77185．6833．9726．01

從表2可以看出：第13號試驗(yàn)芽增殖率最高，為506.71%，其培養(yǎng)條件為A1B4C2D2，即用MS作為基本培養(yǎng)基，細(xì)胞分裂素為玉米素，NAA濃度為0.5 mg/L，莖腋芽為外植體。比較Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ，可以得出“算一算”的好條件是A1B4C2D1，因素A、B和C的位極同 “直接看” 一樣，僅D的位極不同。比較極差R，得出影響射干叢生芽增殖率的主次因素依次為培養(yǎng)基A>細(xì)胞分裂素>NAA>外植體。由此可以估計(jì)“直接看”和“算一算”的效果可能差別不大，即利用根莖芽和莖腋芽作為外植體對叢生芽增殖率的影響差異不顯著。BⅣ-BⅠ=0.67，即細(xì)胞分裂素BA和玉米素對叢生芽增殖率的影響差異不大，但從經(jīng)濟(jì)角度考慮，用BA代替玉米素可以大幅度降低成本。綜合上述分析可以得出，較優(yōu)組合為A1B1C2D1：即用MS作為基本培養(yǎng)基，細(xì)胞分裂素為BA，NAA濃度為0.5 mg/L，莖腋芽為外植體。

2.2 BA不同濃度對叢生芽增殖的影響

將無菌芽切成1.2 cm，接種到以MS+NAA 0.5 mg/L為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度(0.5，1.0，2.0， 3.0 mg/L)的BA 的增殖培養(yǎng)基上，試驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 BA不同濃度對叢生芽增殖的影響

BA濃度(mg/L)接種數(shù)(個(gè))叢生芽數(shù)(個(gè))增殖率(%)株高(cm)葉片數(shù)(張)苗生長勢BA0．53062206．674．914．2+BA1．030124413．336．034．4++BA2．030187623．336．215．1+++BA3．03065216．675．433．6++BA0．53070233．335．515．2+

注：增殖率(%)=叢生芽數(shù)(個(gè))/接種數(shù)(個(gè))；“+”表示生長一般，“++”表示苗生長較好，“+++”表示生長良好。下同。

從表3可以看出：BA濃度對射干叢生芽增殖有較大的影響。以莖腋芽為外植體，當(dāng)BA濃度為2.0 mg/L時(shí)，叢生芽增殖率最高(623.33%)，比BA濃度為0.5，1.0 mg/L時(shí)分別提高了416.66%和210.00%，且長勢良好。BA濃度繼續(xù)提高，叢生芽增殖率卻降低，當(dāng)BA濃度為3.0 mg/L時(shí)，叢生芽增殖率有下降趨勢，為216.67%，以上分析可以得出，叢生芽增殖的最佳BA濃度為2.0 mg/L。

2.3 不同糖濃度對叢生芽增殖的影響

將無菌苗切割成約1 cm長，3株為1叢接種在以MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L，添加不同濃度(2.0%，4.0%，6.0%，8.0%)白糖的增殖培養(yǎng)基上，試驗(yàn)結(jié)果見表4。

表4 不同糖濃度對叢生芽增殖的影響

糖濃度(%)接種數(shù)(個(gè))叢生芽數(shù)(個(gè))增殖率(%)株高(cm)葉片數(shù)(張)苗生長勢230106353．334．854．6++430162540．005．105．1+++630207690．007．056．3+++830139463．337．136．0+++

從表4可以看出：當(dāng)糖濃度為6%時(shí)，叢生芽增殖率為690%，增殖率比糖濃度為2%和4%時(shí)分別提高了336.67%和150%，苗的長勢良好。隨著糖濃度的提高，叢生芽增殖率卻降低，當(dāng)糖濃度為8%時(shí)，叢生芽的增殖率降低了226.67%。以上分析可以得出，試管苗增殖率最佳糖濃度為6%。

3 結(jié) 論

本試驗(yàn)采用正交混合設(shè)計(jì)法L16(43×21)研究培養(yǎng)基、細(xì)胞分裂素、NAA和外植體不同組合對不定芽增殖的影響。試驗(yàn)結(jié)果得出，細(xì)胞分裂素的種類及濃度對不定芽增值的影響差異顯著，外植體的影響差異不顯著，但莖腋芽消毒易于根莖芽且莖腋芽量比較大，因此莖腋芽是理想的外植體。本試驗(yàn)初步探索出射干不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg /L+糖6%+瓊脂5%，叢生芽數(shù)最多，為207個(gè)，增殖率高達(dá)690%。生根和移栽參照前期本課題組張慧英等報(bào)道的生根培養(yǎng)基1/2 MS+NAA 1.0 mg/L+糖2%+瓊脂5%和移栽方法。

[1]中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志第十六卷第一分冊[M].北京:科學(xué)出版社,1985:131-133.

[2]劉合剛,劉國杜.射干速生高效栽培技術(shù)[J].中草藥,2001,32(8):749-751.

[3]高山林.藥用植物遺傳育種的現(xiàn)狀與展望[J].世界科學(xué)技術(shù)——中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2001,3(6):58-62.

[4]張慧英,薛延軍,張耀華,等.射干葉片愈傷組織誘導(dǎo)及植株再生研究[J].中藥材,2010,33(2):176-178.

[5]張耀華,張慧英,薛艷霞.射干試管根莖誘導(dǎo)的研究[J].中草藥,2008,39(6):910-913.

[6]王曉煒,宋波,姜云清,等.射干幼莖愈傷組織及試管苗培養(yǎng)的研究[J].山東科學(xué),2014,27(4):33-37.

(本欄目責(zé)任編輯：周忠燕)

The Establishment Rapid Propagation System of Genuine Medicinal MaterialsBelamcandachinensis(L.) DC.

XUEYanxia1,2,ZHANGHuiying1,GUOHui3,HONGDengwei1,2，LIUFang1,2

2016-04-28

廣西科技開發(fā)項(xiàng)目(編號：桂科重135501-5-12)。

薛艷霞(1982—)，女，山西人；在讀博士研究生，研究方向：生物技術(shù)育種；E-mail:59859511@qq.com。

劉 芳(1975—)，女，廣西人；副教授，博士；E-mail:liufang1975@163.com。

10.16590/j.cnki.1001-4705.2016.09.131

S 567

A

1001-4705(2016)09-0131-03