何俊丹

（鄭州市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 鄭州 450002）

郟縣紅牛同期發(fā)情與超數(shù)排卵研究

何俊丹

（鄭州市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 鄭州 450002）

為探索有效、穩(wěn)定的郟縣紅牛同期發(fā)情和超數(shù)排卵程序，分別采用肌肉注射PG法、CIDR+ PG法對(duì)郟縣紅牛進(jìn)行同期發(fā)情處理，應(yīng)用FSH連續(xù)4d遞減法肌肉注射對(duì)郟縣紅牛進(jìn)行超數(shù)排卵處理。PG法和CIDR+PG法分別處理供體牛10頭次，同期發(fā)情率分別為40%和100%，差異顯著（P＜0.05）；FSH法共有效超排供體牛10頭次，頭均黃體總數(shù)（7.90±4.72）個(gè)，頭均獲胚數(shù)（2.80±2.44）枚，其中3頭次采用加拿大進(jìn)口FSH，7頭次采用國(guó)產(chǎn)FSH,頭均黃體總數(shù)分別為（14.00±1.00）個(gè)、（5.29±2.56）個(gè)，差異顯著（P＜0.05），頭均獲胚數(shù)分別為（2.33±2.08）枚、（3.00±2.71）枚，差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果：PG法處理郟縣紅牛供體牛的同情發(fā)情效果不如CIDR+PG法效果明顯；對(duì)郟縣紅牛進(jìn)行超排處理中，使用進(jìn)口FSH所得黃體總數(shù)明顯多于國(guó)產(chǎn)FSH，但二者的頭均獲胚數(shù)并沒(méi)有顯著差異。以上結(jié)果表明，CIDR+PG法處理比PG法處理郟縣紅牛供體牛的同期發(fā)情效果顯著；對(duì)郟縣紅牛應(yīng)用FSH連續(xù)4d遞減法肌肉注射進(jìn)行超排是可行的。

同期發(fā)情；超數(shù)排卵；黃體；胚胎；郟縣紅牛

郟縣紅牛是中國(guó)八大地方優(yōu)良黃牛品種之一，隨著國(guó)外專門化的奶牛、肉牛品種的引進(jìn)以及農(nóng)業(yè)機(jī)械化程度的不斷提高，郟縣紅牛的數(shù)量逐年減少。因?yàn)猷P縣紅牛生長(zhǎng)速度緩慢，后軀發(fā)育不完善，屠宰率相對(duì)較低，乳用和肉用價(jià)值無(wú)法與引進(jìn)的國(guó)外專門化的品種相抗衡，然而它耐粗飼，抗病性、適應(yīng)性強(qiáng)，繁殖率高，以及郟縣紅牛肉質(zhì)細(xì)嫩、香味濃郁更是國(guó)外肉牛品種所不能比擬的。郟縣紅牛倍受國(guó)內(nèi)外稱贊的肉質(zhì)逐漸被重視，同時(shí)也是我國(guó)培育肉牛新品種的核心地方品種。

建立牛胚胎基因庫(kù)是目前牛保種最經(jīng)濟(jì)、最有效的方法之一。同期發(fā)情、超數(shù)排卵技術(shù)是建立胚胎基因庫(kù)的關(guān)鍵技術(shù)，該技術(shù)已經(jīng)在奶牛、水牛上得以廣泛的應(yīng)用與推廣，應(yīng)用于肉牛的報(bào)道也屢見(jiàn)不鮮，不少地方品種如南陽(yáng)牛、秦川牛、晉南牛的同期發(fā)情與超數(shù)排卵也有報(bào)道。該研究擬探索有效、穩(wěn)定的郟縣紅牛同期發(fā)情與超排程序，以利于郟縣紅牛胚胎基因庫(kù)的建設(shè)，同時(shí)也為其他地方品種黃牛的同期發(fā)情與超數(shù)排卵工作提供借鑒和依據(jù)［1-2］。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物

純種郟縣紅牛供體母牛10頭，均為19～27月齡青年牛，健康，性周期正常，無(wú)生殖器官疾病。試驗(yàn)期間，所有參試牛均舍飼，以青粗飼料配合精料飼喂，膘情適中。

郟縣紅牛特級(jí)公牛細(xì)管凍精（7頭），采自平頂山市郟縣紅牛繁育中心。

1.1.2主要儀器、設(shè)備

牛非手術(shù)采胚器械、胚胎冷凍儀、實(shí)體顯微鏡。

1.1.3主要試劑、藥品

氯前列烯醇（PG）0.2mg/支，垂體促卵泡素（FSH）400mg/支，垂體促卵泡素（FSH）10mg/支，促排3號(hào)20μg/支，孕激素陰道栓（CIDR），牛血清白蛋白（BSA），胎牛血清（FCS），沖胚液（含1%胎牛血清FCS的PBS液，國(guó)產(chǎn)藥品自配配方見(jiàn)表1），撿胚液（含10%胎牛血清FCS的PBS液）。

表1　PBS（磷酸鹽緩沖溶液）成分表［3］

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1試驗(yàn)牛同期發(fā)情處理

1.2.1.1肌肉注射PG法在發(fā)情周期的任一天肌注PG 0.4mg/頭，記為1d，之后觀察發(fā)情，準(zhǔn)確記錄發(fā)情時(shí)間并統(tǒng)計(jì)發(fā)情率。

1.2.1.2CIDR+PG法在發(fā)情周期的任一天放置CIDR栓，記為第1天，第12天下午撤栓，撤栓的同時(shí)肌肉注射PG0.4mg/頭，之后觀察發(fā)情，準(zhǔn)確記錄發(fā)情時(shí)間并統(tǒng)計(jì)發(fā)情率。

1.2.2試驗(yàn)牛的超排處理

1.2.2.1在發(fā)情周期的任一天放置CIDR栓，記為第1天，第10天開(kāi)始遞減劑量肌注FSH，每日2次，間隔時(shí)間12h，連續(xù)4d。第5次注射FSH的同時(shí)，再肌注氯前列烯醇（PG）0.4mg/頭（見(jiàn)表2），第12天下午撤栓。發(fā)情后輸精3次，第1次與第2次之間間隔8h，第2次與第3次之間間隔16h，每次輸2支細(xì)管凍精［4］。

表2　超排處理程序

1.2.2.2對(duì)郟縣紅牛10頭供體母牛中的7頭從第10天開(kāi)始連續(xù)4d遞減劑量肌肉注射國(guó)產(chǎn)FSH（中科院動(dòng)物所產(chǎn)，規(guī)格10mg/支），其余3頭郟縣紅牛供體母牛則注射進(jìn)口FSH（加拿大產(chǎn)，規(guī)格400mg/支）。

1.2.3沖胚及撿胚

輸精后6～7d進(jìn)行沖胚。沖胚前直腸檢查供體牛的超排反應(yīng)情況，同時(shí)記錄左、右側(cè)黃體數(shù)和黃體總數(shù)。使用三通式采胚管進(jìn)行非手術(shù)法沖卵，每側(cè)子宮角各用500ml沖卵液沖洗7～8次，子宮回流液靜置后實(shí)體顯微鏡下?lián)炻?。統(tǒng)計(jì)左右側(cè)黃體數(shù)、黃體總數(shù)和獲胚數(shù)，應(yīng)用SAS8.0軟件分析處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2　結(jié)果

2.1同期發(fā)情處理方法對(duì)同期發(fā)情效果的影響（表3）

表3　不同同期發(fā)情處理方法對(duì)郟縣紅牛同期發(fā)情效果的影響

2.2郟縣紅?？傮w超排效果比較（表4）

表4　郟縣紅?？傮w超排效果比較

2.3國(guó)產(chǎn)（中科院動(dòng)物所）與進(jìn)口（加拿大）FSH對(duì)超排效果的影響（表5）

表5　國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口FSH對(duì)供體超排效果的比較

3　討論與結(jié)論

3.1不同同期發(fā)情處理方法對(duì)郟縣紅牛供體母牛同期發(fā)情效果的影響

氯前列烯醇是前列腺素（PG）類似物的一種，具有溶解黃體的作用，但它只對(duì)母牛發(fā)情周期5～18d的黃體有溶解作用，而對(duì)發(fā)情前后3～5d則無(wú)溶解功能。因此，PG法處理后總有部分母牛無(wú)反應(yīng)。何光中等［5］以關(guān)嶺黃牛為研究對(duì)象采用PG法處理同期發(fā)情率為60.0%。趙維［6］等用PG誘導(dǎo)紅安格斯肉牛的同情發(fā)情試驗(yàn)中，同期發(fā)情率為75.0%。和占星［7］等在對(duì)水牛同期發(fā)情的研究中PG法處理供體牛的同期發(fā)情率為43.33%。有關(guān)專家等對(duì)青海大通牦牛同期發(fā)情應(yīng)用PG法處理的發(fā)情率為41.2%。該研究結(jié)果顯示，PG法處理郟縣紅牛同期發(fā)情率為40.0%，這與所選牛群的狀態(tài)及牛群規(guī)模有一定的關(guān)系。

孕酮陰道栓（CIDR）在體內(nèi)持續(xù)分泌孕酮，維持血液中孕酮的高水平，抑制卵泡的生長(zhǎng)。當(dāng)同時(shí)撤栓后，卵泡生長(zhǎng)的抑制因素被解除，為卵泡的生長(zhǎng)提供了一個(gè)共同的起點(diǎn)，從而達(dá)到同期發(fā)情的目的，但是，有些個(gè)體在撤栓時(shí)黃體還未退化，這樣在撤栓后黃體繼續(xù)分泌孕酮，達(dá)不到發(fā)情同期化的效果。針對(duì)這種情況，在撤栓后肌注PG，從而達(dá)到溶解黃體的目的，在一定程度上提高了同期發(fā)情的效果。據(jù)趙永聚［8］等在山羊上做的同期發(fā)情試驗(yàn)結(jié)果顯示，用CIDR法處理，撤栓后直接觀察發(fā)情，同期發(fā)情率為37.5%，而CIDR撤栓后再肌注PG，同期發(fā)情率為93.75%，顯著高于第一種方法。很多試驗(yàn)證明，CIDR結(jié)合PG，可獲得理想的同期發(fā)情效果。有關(guān)專家用CIDR+PG法處理荷斯坦牛，撤栓后同期發(fā)情率達(dá)95%以上。韋英明［9］等用該方法處理水牛也獲得了相似的結(jié)果。該研究撤栓后再肌注PG，同期發(fā)情率為100%。

應(yīng)用PG法和CIDR+PG法對(duì)郟縣紅牛進(jìn)行同期發(fā)情處理，同期發(fā)情率分別為40%和100%，兩者差異顯著（P＜0.05）。該研究CIDR+PG處理法的同期發(fā)情率顯著高于PG法，同期發(fā)情效果明顯且理想。

3.2郟縣紅牛超數(shù)排卵研究

該研究共有效超排郟縣紅牛供體牛10頭次，獲得頭均黃體總數(shù)7.90個(gè)，頭均獲胚數(shù)2.80枚。說(shuō)明該研究所采用的超排方法處理郟縣紅牛是可行的。前人研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，晉南牛頭均可用胚數(shù)3.94枚［10-11］、溫嶺高峰黃牛3.04枚、青海黃牛4.00枚、秦川牛4.20枚［12］、南陽(yáng)牛4.28枚［13］。該研究2.80枚的頭均獲胚數(shù)與研究結(jié)果相比有一定的差距，原因可能是多方面的。其一，可能與該研究所用牛的地方品種有關(guān)，郟縣紅牛的超排效果可能不如奶牛、水牛及其他地方黃牛品種；其二，該次超排的供體牛全部為青年牛，個(gè)體較小，沖卵困難，有部分供體操作受阻或回收液無(wú)法撿胚，這些情況可能直接影響沖卵效果，因此筆者質(zhì)疑郟縣紅牛是繼續(xù)像其他地方品種黃牛那樣選用青年牛進(jìn)行超排，還是選用體格相對(duì)較大的經(jīng)產(chǎn)郟縣紅牛進(jìn)行超排；其三，該研究在平頂山市郟縣紅牛繁育中心進(jìn)行，該中心成立于2007年，由于建成時(shí)間短，供體牛多是從散養(yǎng)戶購(gòu)進(jìn)，背景復(fù)雜，而且繁育中心的飼養(yǎng)管理制度尚未規(guī)范化，導(dǎo)致供體牛的營(yíng)養(yǎng)狀況不好，可能直接影響超排效果；最后，郟縣紅牛的超數(shù)排卵在此之前無(wú)人做過(guò)，該研究沒(méi)有現(xiàn)成的方案可供參考，所有程序都是在參考奶牛、水牛及其他地方品種黃牛超排程序的基礎(chǔ)上所做的探索性試驗(yàn)研究，因此，很多地方都有待商榷和進(jìn)一步提高。另外，操作人員對(duì)沖卵技術(shù)的熟練程度也直接影響超排結(jié)果。

3.3國(guó)產(chǎn)（中科院動(dòng)物所）與進(jìn)口（加拿大）FSH對(duì)超排效果的影響

現(xiàn)階段國(guó)內(nèi)牛超排常用的FSH有進(jìn)口和國(guó)產(chǎn)兩大類。進(jìn)口FSH價(jià)格高，但效果和穩(wěn)定性高于國(guó)產(chǎn)產(chǎn)品。國(guó)產(chǎn)FSH價(jià)格低，從成本方面考慮有一定的優(yōu)勢(shì)。本試驗(yàn)研究同時(shí)選用加拿大進(jìn)口和國(guó)內(nèi)中科院動(dòng)物所生產(chǎn)的FSH進(jìn)行超排，結(jié)果表明在對(duì)郟縣紅牛超排處理后，進(jìn)口FSH獲得的頭均黃體總數(shù)14.00個(gè)與國(guó)產(chǎn)FSH5.29個(gè)差異顯著（P＜0.05），而進(jìn)口FSH的頭均獲胚總數(shù)2.33枚與國(guó)產(chǎn)FSH的3.00枚差異不顯著（P＞0.05）。提示進(jìn)口FSH的超排效果明顯高于國(guó)產(chǎn)，但在供體牛狀態(tài)不理想，沖卵技術(shù)不熟練等條件下，考慮到成本因素，可以選用國(guó)產(chǎn)藥進(jìn)行超數(shù)排卵。

3.4結(jié)論

該研究以郟縣紅牛為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行同期發(fā)情和超數(shù)排卵研究，所得同期發(fā)情率為70%；超數(shù)排卵頭均黃體數(shù)（7.90±4.72）個(gè)，頭均獲胚數(shù)（2.80±2.44）枚。本研究試圖應(yīng)用同期發(fā)情和超數(shù)排卵技術(shù)建立胚胎基因庫(kù)保存郟縣紅牛優(yōu)秀遺傳基因，研究發(fā)現(xiàn)，CIDR+PG法處理比PG法處理供體牛的同期發(fā)情效果顯著；對(duì)郟縣紅牛應(yīng)用FSH連續(xù)4d遞減法肌肉注射進(jìn)行超排是可行的。同時(shí)，地方品種的同期發(fā)情與超數(shù)排卵技術(shù)是一項(xiàng)復(fù)雜的工作，其有效、穩(wěn)定的同期發(fā)情與超數(shù)排卵的方法和程序還有待于進(jìn)一步探索。

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