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        郟縣紅牛同期發(fā)情與超數(shù)排卵研究

        2016-12-02 01:21:46何俊丹
        河南畜牧獸醫(yī) 2016年19期
        關鍵詞:郟縣紅牛供體

        何俊丹

        (鄭州市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南 鄭州 450002)

        郟縣紅牛同期發(fā)情與超數(shù)排卵研究

        何俊丹

        (鄭州市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南 鄭州 450002)

        為探索有效、穩(wěn)定的郟縣紅牛同期發(fā)情和超數(shù)排卵程序,分別采用肌肉注射PG法、CIDR+ PG法對郟縣紅牛進行同期發(fā)情處理,應用FSH連續(xù)4d遞減法肌肉注射對郟縣紅牛進行超數(shù)排卵處理。PG法和CIDR+PG法分別處理供體牛10頭次,同期發(fā)情率分別為40%和100%,差異顯著(P<0.05);FSH法共有效超排供體牛10頭次,頭均黃體總數(shù)(7.90±4.72)個,頭均獲胚數(shù)(2.80±2.44)枚,其中3頭次采用加拿大進口FSH,7頭次采用國產FSH,頭均黃體總數(shù)分別為(14.00±1.00)個、(5.29±2.56)個,差異顯著(P<0.05),頭均獲胚數(shù)分別為(2.33±2.08)枚、(3.00±2.71)枚,差異不顯著(P>0.05)。結果:PG法處理郟縣紅牛供體牛的同情發(fā)情效果不如CIDR+PG法效果明顯;對郟縣紅牛進行超排處理中,使用進口FSH所得黃體總數(shù)明顯多于國產FSH,但二者的頭均獲胚數(shù)并沒有顯著差異。以上結果表明,CIDR+PG法處理比PG法處理郟縣紅牛供體牛的同期發(fā)情效果顯著;對郟縣紅牛應用FSH連續(xù)4d遞減法肌肉注射進行超排是可行的。

        同期發(fā)情;超數(shù)排卵;黃體;胚胎;郟縣紅牛

        郟縣紅牛是中國八大地方優(yōu)良黃牛品種之一,隨著國外專門化的奶牛、肉牛品種的引進以及農業(yè)機械化程度的不斷提高,郟縣紅牛的數(shù)量逐年減少。因為郟縣紅牛生長速度緩慢,后軀發(fā)育不完善,屠宰率相對較低,乳用和肉用價值無法與引進的國外專門化的品種相抗衡,然而它耐粗飼,抗病性、適應性強,繁殖率高,以及郟縣紅牛肉質細嫩、香味濃郁更是國外肉牛品種所不能比擬的。郟縣紅牛倍受國內外稱贊的肉質逐漸被重視,同時也是我國培育肉牛新品種的核心地方品種。

        建立牛胚胎基因庫是目前牛保種最經濟、最有效的方法之一。同期發(fā)情、超數(shù)排卵技術是建立胚胎基因庫的關鍵技術,該技術已經在奶牛、水牛上得以廣泛的應用與推廣,應用于肉牛的報道也屢見不鮮,不少地方品種如南陽牛、秦川牛、晉南牛的同期發(fā)情與超數(shù)排卵也有報道。該研究擬探索有效、穩(wěn)定的郟縣紅牛同期發(fā)情與超排程序,以利于郟縣紅牛胚胎基因庫的建設,同時也為其他地方品種黃牛的同期發(fā)情與超數(shù)排卵工作提供借鑒和依據[1-2]。

        1 材料與方法

        1.1試驗材料

        1.1.1試驗動物

        純種郟縣紅牛供體母牛10頭,均為19~27月齡青年牛,健康,性周期正常,無生殖器官疾病。試驗期間,所有參試牛均舍飼,以青粗飼料配合精料飼喂,膘情適中。

        郟縣紅牛特級公牛細管凍精(7頭),采自平頂山市郟縣紅牛繁育中心。

        1.1.2主要儀器、設備

        牛非手術采胚器械、胚胎冷凍儀、實體顯微鏡。

        1.1.3主要試劑、藥品

        氯前列烯醇(PG)0.2mg/支,垂體促卵泡素(FSH)400mg/支,垂體促卵泡素(FSH)10mg/支,促排3號20μg/支,孕激素陰道栓(CIDR),牛血清白蛋白(BSA),胎牛血清(FCS),沖胚液(含1%胎牛血清FCS的PBS液,國產藥品自配配方見表1),撿胚液(含10%胎牛血清FCS的PBS液)。

        表1 PBS(磷酸鹽緩沖溶液)成分表[3]

        1.2試驗方法

        1.2.1試驗牛同期發(fā)情處理

        1.2.1.1肌肉注射PG法在發(fā)情周期的任一天肌注PG 0.4mg/頭,記為1d,之后觀察發(fā)情,準確記錄發(fā)情時間并統(tǒng)計發(fā)情率。

        1.2.1.2CIDR+PG法在發(fā)情周期的任一天放置CIDR栓,記為第1天,第12天下午撤栓,撤栓的同時肌肉注射PG0.4mg/頭,之后觀察發(fā)情,準確記錄發(fā)情時間并統(tǒng)計發(fā)情率。

        1.2.2試驗牛的超排處理

        1.2.2.1在發(fā)情周期的任一天放置CIDR栓,記為第1天,第10天開始遞減劑量肌注FSH,每日2次,間隔時間12h,連續(xù)4d。第5次注射FSH的同時,再肌注氯前列烯醇(PG)0.4mg/頭(見表2),第12天下午撤栓。發(fā)情后輸精3次,第1次與第2次之間間隔8h,第2次與第3次之間間隔16h,每次輸2支細管凍精[4]。

        表2 超排處理程序

        1.2.2.2對郟縣紅牛10頭供體母牛中的7頭從第10天開始連續(xù)4d遞減劑量肌肉注射國產FSH(中科院動物所產,規(guī)格10mg/支),其余3頭郟縣紅牛供體母牛則注射進口FSH(加拿大產,規(guī)格400mg/支)。

        1.2.3沖胚及撿胚

        輸精后6~7d進行沖胚。沖胚前直腸檢查供體牛的超排反應情況,同時記錄左、右側黃體數(shù)和黃體總數(shù)。使用三通式采胚管進行非手術法沖卵,每側子宮角各用500ml沖卵液沖洗7~8次,子宮回流液靜置后實體顯微鏡下?lián)炻选=y(tǒng)計左右側黃體數(shù)、黃體總數(shù)和獲胚數(shù),應用SAS8.0軟件分析處理試驗數(shù)據。

        2 結果

        2.1同期發(fā)情處理方法對同期發(fā)情效果的影響(表3)

        表3 不同同期發(fā)情處理方法對郟縣紅牛同期發(fā)情效果的影響

        2.2郟縣紅??傮w超排效果比較(表4)

        表4 郟縣紅牛總體超排效果比較

        2.3國產(中科院動物所)與進口(加拿大)FSH對超排效果的影響(表5)

        表5 國產與進口FSH對供體超排效果的比較

        3 討論與結論

        3.1不同同期發(fā)情處理方法對郟縣紅牛供體母牛同期發(fā)情效果的影響

        氯前列烯醇是前列腺素(PG)類似物的一種,具有溶解黃體的作用,但它只對母牛發(fā)情周期5~18d的黃體有溶解作用,而對發(fā)情前后3~5d則無溶解功能。因此,PG法處理后總有部分母牛無反應。何光中等[5]以關嶺黃牛為研究對象采用PG法處理同期發(fā)情率為60.0%。趙維[6]等用PG誘導紅安格斯肉牛的同情發(fā)情試驗中,同期發(fā)情率為75.0%。和占星[7]等在對水牛同期發(fā)情的研究中PG法處理供體牛的同期發(fā)情率為43.33%。有關專家等對青海大通牦牛同期發(fā)情應用PG法處理的發(fā)情率為41.2%。該研究結果顯示,PG法處理郟縣紅牛同期發(fā)情率為40.0%,這與所選牛群的狀態(tài)及牛群規(guī)模有一定的關系。

        孕酮陰道栓(CIDR)在體內持續(xù)分泌孕酮,維持血液中孕酮的高水平,抑制卵泡的生長。當同時撤栓后,卵泡生長的抑制因素被解除,為卵泡的生長提供了一個共同的起點,從而達到同期發(fā)情的目的,但是,有些個體在撤栓時黃體還未退化,這樣在撤栓后黃體繼續(xù)分泌孕酮,達不到發(fā)情同期化的效果。針對這種情況,在撤栓后肌注PG,從而達到溶解黃體的目的,在一定程度上提高了同期發(fā)情的效果。據趙永聚[8]等在山羊上做的同期發(fā)情試驗結果顯示,用CIDR法處理,撤栓后直接觀察發(fā)情,同期發(fā)情率為37.5%,而CIDR撤栓后再肌注PG,同期發(fā)情率為93.75%,顯著高于第一種方法。很多試驗證明,CIDR結合PG,可獲得理想的同期發(fā)情效果。有關專家用CIDR+PG法處理荷斯坦牛,撤栓后同期發(fā)情率達95%以上。韋英明[9]等用該方法處理水牛也獲得了相似的結果。該研究撤栓后再肌注PG,同期發(fā)情率為100%。

        應用PG法和CIDR+PG法對郟縣紅牛進行同期發(fā)情處理,同期發(fā)情率分別為40%和100%,兩者差異顯著(P<0.05)。該研究CIDR+PG處理法的同期發(fā)情率顯著高于PG法,同期發(fā)情效果明顯且理想。

        3.2郟縣紅牛超數(shù)排卵研究

        該研究共有效超排郟縣紅牛供體牛10頭次,獲得頭均黃體總數(shù)7.90個,頭均獲胚數(shù)2.80枚。說明該研究所采用的超排方法處理郟縣紅牛是可行的。前人研究結果發(fā)現(xiàn),晉南牛頭均可用胚數(shù)3.94枚[10-11]、溫嶺高峰黃牛3.04枚、青海黃牛4.00枚、秦川牛4.20枚[12]、南陽牛4.28枚[13]。該研究2.80枚的頭均獲胚數(shù)與研究結果相比有一定的差距,原因可能是多方面的。其一,可能與該研究所用牛的地方品種有關,郟縣紅牛的超排效果可能不如奶牛、水牛及其他地方黃牛品種;其二,該次超排的供體牛全部為青年牛,個體較小,沖卵困難,有部分供體操作受阻或回收液無法撿胚,這些情況可能直接影響沖卵效果,因此筆者質疑郟縣紅牛是繼續(xù)像其他地方品種黃牛那樣選用青年牛進行超排,還是選用體格相對較大的經產郟縣紅牛進行超排;其三,該研究在平頂山市郟縣紅牛繁育中心進行,該中心成立于2007年,由于建成時間短,供體牛多是從散養(yǎng)戶購進,背景復雜,而且繁育中心的飼養(yǎng)管理制度尚未規(guī)范化,導致供體牛的營養(yǎng)狀況不好,可能直接影響超排效果;最后,郟縣紅牛的超數(shù)排卵在此之前無人做過,該研究沒有現(xiàn)成的方案可供參考,所有程序都是在參考奶牛、水牛及其他地方品種黃牛超排程序的基礎上所做的探索性試驗研究,因此,很多地方都有待商榷和進一步提高。另外,操作人員對沖卵技術的熟練程度也直接影響超排結果。

        3.3國產(中科院動物所)與進口(加拿大)FSH對超排效果的影響

        現(xiàn)階段國內牛超排常用的FSH有進口和國產兩大類。進口FSH價格高,但效果和穩(wěn)定性高于國產產品。國產FSH價格低,從成本方面考慮有一定的優(yōu)勢。本試驗研究同時選用加拿大進口和國內中科院動物所生產的FSH進行超排,結果表明在對郟縣紅牛超排處理后,進口FSH獲得的頭均黃體總數(shù)14.00個與國產FSH5.29個差異顯著(P<0.05),而進口FSH的頭均獲胚總數(shù)2.33枚與國產FSH的3.00枚差異不顯著(P>0.05)。提示進口FSH的超排效果明顯高于國產,但在供體牛狀態(tài)不理想,沖卵技術不熟練等條件下,考慮到成本因素,可以選用國產藥進行超數(shù)排卵。

        3.4結論

        該研究以郟縣紅牛為研究對象,對其進行同期發(fā)情和超數(shù)排卵研究,所得同期發(fā)情率為70%;超數(shù)排卵頭均黃體數(shù)(7.90±4.72)個,頭均獲胚數(shù)(2.80±2.44)枚。本研究試圖應用同期發(fā)情和超數(shù)排卵技術建立胚胎基因庫保存郟縣紅牛優(yōu)秀遺傳基因,研究發(fā)現(xiàn),CIDR+PG法處理比PG法處理供體牛的同期發(fā)情效果顯著;對郟縣紅牛應用FSH連續(xù)4d遞減法肌肉注射進行超排是可行的。同時,地方品種的同期發(fā)情與超數(shù)排卵技術是一項復雜的工作,其有效、穩(wěn)定的同期發(fā)情與超數(shù)排卵的方法和程序還有待于進一步探索。

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        S823

        B

        1004-5090(2016)10-0005-03

        (2016-09-16)

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