譚啟東，魏邦香，陳 兵，張曉軒，楊言川，秦思源，朱興全，徐前明，周東輝

（1. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所 家畜疫病病原生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730046；2. 北京出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)物隔離場(chǎng)，北京 101312；3. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，合肥230036；4.榆中縣動(dòng)物疾病預(yù)防與控制中心，榆中730000）

·研究論文·

甘肅、寧夏奶牛新孢子蟲(chóng)血清流行病學(xué)調(diào)查及風(fēng)險(xiǎn)因素分析

譚啟東1,2,3，魏邦香4，陳 兵4，張曉軒1，楊言川1，秦思源1，朱興全1，徐前明3，周東輝1

（1. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所 家畜疫病病原生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730046；2. 北京出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)物隔離場(chǎng)，北京 101312；3. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，合肥230036；4.榆中縣動(dòng)物疾病預(yù)防與控制中心，榆中730000）

本研究旨在查明甘肅省與寧夏回族自治區(qū)奶牛新孢子蟲(chóng)的感染情況并分析影響其感染的風(fēng)險(xiǎn)因素。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）方法檢測(cè)了甘肅省榆中縣、寧夏青銅峽市和寧夏吳忠市3個(gè)地方總計(jì)1657份奶牛血清樣品，并應(yīng)用流行病學(xué)調(diào)查及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)影響奶牛新孢子蟲(chóng)感染的因素進(jìn)行了分析。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，奶牛新孢子蟲(chóng)抗體總陽(yáng)性率為8.93%；應(yīng)用Logistic回歸分析評(píng)估奶牛新孢子蟲(chóng)感染的風(fēng)險(xiǎn)因素，結(jié)果顯示奶牛所處地區(qū)是影響新孢子蟲(chóng)感染的風(fēng)險(xiǎn)因素（P＜0.05）。調(diào)查分析表明，甘肅和寧夏地區(qū)奶牛新孢子蟲(chóng)普遍流行。應(yīng)當(dāng)提高對(duì)調(diào)查地區(qū)奶牛新孢子蟲(chóng)感染的重視，采取適當(dāng)?shù)木C合控制方法和有效的管理措施以防控奶牛新孢子蟲(chóng)病，以保證奶牛養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。

新孢子蟲(chóng)；ELISA；流行病學(xué)；奶牛；甘肅；寧夏

新孢子蟲(chóng)是一種細(xì)胞內(nèi)寄生的原生病原體，在全世界范圍內(nèi)流行，主要引起奶牛流產(chǎn)、死胎以及犬科動(dòng)物的致命神經(jīng)系統(tǒng)疾病[1-3]。感染新孢子蟲(chóng)會(huì)導(dǎo)致奶牛體重和產(chǎn)奶量下降，從而過(guò)早被淘汰，造成重大的經(jīng)濟(jì)損失[4-6]。1984年在挪威報(bào)道了第1例因狗感染新孢子蟲(chóng)引起神經(jīng)肌肉病變，從而導(dǎo)致后肢癱瘓的病例[7]，隨后確定犬科動(dòng)物是新孢子蟲(chóng)的終末宿主[8,9]。該病原體的傳播途徑分為垂直傳播和水平傳播，而經(jīng)胎盤(pán)的垂直傳播是奶牛新孢子蟲(chóng)主要傳播途徑[2]。

許多國(guó)家都已經(jīng)報(bào)道了關(guān)于奶牛和肉牛新孢子蟲(chóng)病的血清學(xué)調(diào)查結(jié)果[10-16]，中國(guó)部分地區(qū)也進(jìn)行了新孢子蟲(chóng)感染的相關(guān)調(diào)查研究[17-21]，但是在西北地區(qū)甘肅省和寧夏回族自治區(qū)，新孢子蟲(chóng)感染情況的調(diào)查尚未有報(bào)道。本研究的目的是調(diào)查甘肅和寧夏地區(qū)奶牛新孢子蟲(chóng)感染情況并分析影響其感染的風(fēng)險(xiǎn)因素，以期能為防控奶牛新孢子蟲(chóng)的感染提供依據(jù)，從而降低該疾病對(duì)畜牧業(yè)的危害。

1　材料與方法

1.1 調(diào)查區(qū)域 選取寧夏回族自治區(qū)吳忠市和青銅峽市以及甘肅省榆中縣作為奶牛新孢子蟲(chóng)感染情況的調(diào)查區(qū)域。吳忠市坐落于寧夏的中部地區(qū)（35°14′～39°23′N(xiāo)，104°17′～107°39′E），溫帶大陸性半干旱季風(fēng)氣候，年平均氣溫為9．4°C。青銅峽市（37°36′～38°15′N(xiāo)，105°21′～106°21′E）為縣級(jí)市，盛行氣候與吳忠市相仿，年平均氣溫為9．2°C。榆中縣位于甘肅省的中部（35°34′～36°26′N(xiāo)，103°49′～104°34′E），大陸性氣候顯著，年平均氣溫為6．7°C。奶牛養(yǎng)殖業(yè)在這些區(qū)域的畜牧業(yè)中占有重要地位。

1.2 血清樣品 2013年在選取的調(diào)查區(qū)域共采集1657份奶牛血清樣品，其中甘肅省榆中縣751份，寧夏回族自治區(qū)吳中市456份，青銅峽市450份。血清樣品經(jīng)500×g離心10 min后轉(zhuǎn)移到新的離心管中，-20℃保存待用。記錄奶牛的年齡、胎次等重要基本信息。

1.3 血清學(xué)檢查 血清樣品采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)新孢子蟲(chóng)抗體，按照美國(guó)IDEXX新孢子蟲(chóng)抗體檢測(cè)ELISA試劑盒（批號(hào)：99-09566）說(shuō)明書(shū)操作。每板設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照，若有可疑孔則進(jìn)行復(fù)檢。

1.4 數(shù)據(jù)分析 采用二元logistic回歸分析方法研究采樣地區(qū)、年齡和胎次3個(gè)與新孢子蟲(chóng)感染有關(guān)的潛在的風(fēng)險(xiǎn)因素，以P＜0．05為具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的判斷標(biāo)準(zhǔn)。所有的數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)軟件PASW Statistics 18．0（SPSS Inc．, IBM Corporation, Somers, NY）進(jìn)行分析，并提供結(jié)果的優(yōu)勢(shì)比（odds ratio，OR）和95%的置信區(qū)間（95% confidence interval，95% CI）。當(dāng)OR值等于1，表示該因素對(duì)疾病的發(fā)生不起作用；OR值大于1，表示該因素是一個(gè)危險(xiǎn)因素；OR值小于1，表示該因素是一個(gè)保護(hù)因素。

2　結(jié)果

2.1 不同地區(qū)奶牛新孢子蟲(chóng)感染結(jié)果 檢測(cè)的1657份奶牛血清樣品中，共有148份新孢子蟲(chóng)抗體呈陽(yáng)性，陽(yáng)性率為8．93%。甘肅省榆中縣、寧夏回族自治區(qū)青銅峽市和吳忠市奶牛衣原體陽(yáng)性率分別為13．05%、4．44%和6．58%（表1）。

2.2 不同年齡奶牛新孢子蟲(chóng)感染結(jié)果 4組年齡段奶牛中均發(fā)現(xiàn)有陽(yáng)性樣品，陽(yáng)性率從5．80%到13．33%不等，其中3～5歲的奶牛新孢子蟲(chóng)陽(yáng)性率最高，其次是大于5歲的年齡段的奶牛，感染率為12．43%，小于1歲的犢牛感染率最低，為5．80%（表1）。

2.3 不同胎次奶牛新孢子蟲(chóng)感染結(jié)果 在不同的胎次分組中，產(chǎn)胎多于等于3胎次的的奶牛感染新孢子蟲(chóng)的陽(yáng)性率最高為13．20%，其次是產(chǎn)胎2次的奶牛，陽(yáng)性率為8．23%，產(chǎn)胎0次的奶牛感染新孢子蟲(chóng)的陽(yáng)性率最低，為7．21%（表1）。

表1　甘肅省和寧夏回族自治區(qū)奶牛新孢子蟲(chóng)感染陽(yáng)性率及風(fēng)險(xiǎn)因素的優(yōu)勢(shì)比Table 1 Seroprevalence of Neospora caninum infection and odds ratios of risk factors in dairy cattle in Gansu and NXHAR

2.4 影響奶牛新孢子蟲(chóng)的風(fēng)險(xiǎn)因素 運(yùn)用Logistic回歸分析評(píng)估影響奶牛新孢子蟲(chóng)感染的風(fēng)險(xiǎn)因素，結(jié)果顯示奶牛所處的地區(qū)是影響新孢子蟲(chóng)感染的一個(gè)重要的風(fēng)險(xiǎn)因素，而年齡和胎次不是顯著風(fēng)險(xiǎn)因素。榆中市的奶牛感染新孢子蟲(chóng)的風(fēng)險(xiǎn)大約是青銅峽市的3．2倍（OR = 3．23，95% CI = 1．97～5．30, P ＜0．01），然而吳忠市和青銅峽市之間不存在顯著的地區(qū)差異（表1）。

3　討論

犬科動(dòng)物作為新孢子蟲(chóng)的終末宿主，一經(jīng)感染，便可持續(xù)不斷的向外界環(huán)境排放卵囊[22]。其他哺乳類(lèi)動(dòng)物經(jīng)攝入被卵囊污染的水或食物從而被感染[5]。奶牛一旦感染新孢子蟲(chóng)，可以通過(guò)胎盤(pán)傳播給后代，不僅給畜牧養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)重大的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)還可間接威脅到當(dāng)?shù)鼐用竦纳眢w健康。

本次調(diào)查顯示奶牛新孢子蟲(chóng)總體感染率為8．93%，相較于已報(bào)道的西班牙（24．1%）[23]、羅馬尼亞（27．7%）[13]、巴西（21．6%）[16]等國(guó)及我國(guó)廣東（18．9%）[20]、廣西壯族自治區(qū)（15．07%）[21]等地區(qū)的感染率低，但和伊朗（10．5%）[7]的感染率較為接近。不同地區(qū)之間的飼養(yǎng)條件、動(dòng)物福利和接觸污染源的機(jī)會(huì)等都存在差異，并且各個(gè)奶牛場(chǎng)的環(huán)境衛(wèi)生狀況、管理模式、防疫情況以及研究所采用的檢測(cè)方法的敏感性等情況的差別都會(huì)影響奶牛新孢子蟲(chóng)的感染狀況[1]。

本研究顯示榆中縣奶牛新孢子蟲(chóng)感染率顯著高于青銅峽市和吳忠市，揭示了地區(qū)因素是奶牛新孢子蟲(chóng)感染的主要風(fēng)險(xiǎn)因素。由于本次調(diào)查的區(qū)域氣候較為接近，均無(wú)相關(guān)的免疫措施[24]，同時(shí)奶牛場(chǎng)內(nèi)及周邊未發(fā)現(xiàn)有飼養(yǎng)狗和流浪狗，所以推測(cè)調(diào)查農(nóng)場(chǎng)的衛(wèi)生條件是造成感染率存在差異的主要原因。奶?？赏ㄟ^(guò)攝入被感染犬類(lèi)排出的卵囊污染的食物或水而感染，同樣，犬可通過(guò)吞食奶牛的死胎、胎膜等而感染[1]，這樣就形成了一個(gè)惡性循環(huán)。消除環(huán)境中的流浪狗，定期打掃牛舍并進(jìn)行徹底消毒可有效降低新孢子蟲(chóng)感染的風(fēng)險(xiǎn)。采樣時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)榆中縣農(nóng)場(chǎng)的衛(wèi)生條件明顯較差，奶牛新孢子蟲(chóng)的感染率顯著高于青銅峽市和吳忠市。

本研究顯示奶牛在3～5歲這個(gè)年齡段的新孢子蟲(chóng)感染率最高，為13．33%；其次是大于5歲的年齡段的奶牛，其感染率為12．43%；小于1歲的犢牛感染率最低，為5．80%。但Logistic回歸分析顯示年齡因素與新孢子蟲(chóng)陽(yáng)性率之間沒(méi)有必然聯(lián)系，年齡因素不是新孢子蟲(chóng)感染的顯著風(fēng)險(xiǎn)因素，這與之前Xia等[20]和Wouda等[25]的報(bào)道相一致。

本研究同樣分析了新孢子蟲(chóng)感染率與胎次間的關(guān)系，結(jié)果顯示，隨著生育次數(shù)的增加，新孢子蟲(chóng)的陽(yáng)性率也在逐步增加，但感染率與胎次之間沒(méi)有顯著聯(lián)系。

綜上所述，甘肅省和寧夏回族自治區(qū)受調(diào)查地區(qū)奶牛新孢子蟲(chóng)感染普遍存在，總的陽(yáng)性率為8．93%。因此，應(yīng)當(dāng)提高對(duì)調(diào)查地區(qū)奶牛新孢子蟲(chóng)病的重視，采取適當(dāng)?shù)木C合控制方法和有效的管理措施以防控奶牛新孢子蟲(chóng)病，以保證奶牛養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。

[1] Dubey J P． Review of Neospora caninum and neosporosis in animals[J]． Korean J Parasitol, 2003, 41(1): 1-16．

[2] Dubey J P, Schares G, Ortega-Mora L M． Epidemiology and control of neosporosis and Neospora caninum[J]． Clin Microbiol Rev, 2007, 20(2): 323-367．

[3] Yildiz K, Kul O, Babur C, et al． Seroprevalence of Neospora caninum in dairy cattle ranches with high abortion rate: special emphasis to serologic co-existence with Toxoplasma gondii, Brucella abortus and Listeria monocytogenes[J]． Vet Parasitol, 2009, 164(2-4): 306-310．

[4] Sedlák K, Bártová E． Seroprevalences of antibodies to Neospora caninum and Toxoplasma gondii in zoo animals[J]． Vet Parasitol, 2006, 136(3-4): 223-231．

[5] Dubey J P, Schares G． Neosporosis in animals--the last five years[J]． Vet Parasitol, 2011, 180(1-2): 90-108．

[6] Woodbine K A, Medley G F, Moore S J, et al． A four year longitudinal sero-epidemiology study of Neospora caninum in adult cattle from 114 cattle herds in south west England: associations with age, herd and dam-offspring pairs[J]． BMC Vet Res, 2008, 4: 35．

[7] Nematollahi A, Jaafari R, Moghaddam G． Seroprevalence of Neospora caninum infection in dairy cattle in Tabriz, northwest Iran[J]． Iran J Parasitol, 2011, 6(4): 95-98．

[8] McAllister M M, Dubey J P, Lindsay D S, et al． Dogs are definitive hosts of Neospora caninum[J]． Int J Parasitol, 1998, 28(9): 1473-1478．

[9] Gondim L F, McAllister M M, Pitt W C, et al． Coyotes (Canis latrans) are definitive hosts of Neospora caninum[J]． Int J Parasitol, 2004, 34(2): 159-161．

[10] Eiras C, Arnaiz I, Alvarez-García G, et al． Neospora caninum seroprevalence in dairy and beef cattle from the northwest region of Spain, Galicia[J]． Prev Vet Med, 2011, 98(2-3): 128-132．

[11] Gavrea R R, Iovu A, Losson B, et al． Seroprevalence of Neospora caninum in dairy cattle from north-west and centre of Romania[J]． Parasite, 2011, 18(4): 349-351．

[12] Cardoso J M, Amaku M, Araújo A J, et al． A longitudinal study of Neospora caninum infection on three dairy farms in Brazil[J]． Vet Parasitol, 2012, 187(3-4): 553-557．

[13] Imre K, Morariu S, Ilie M S, et al． Serological survey of Neospora caninum infection in cattle herds from Western Romania[J]． J Parasitol, 2012, 98(3): 683-685．

[14] Nasir A, Lanyon S R, Schares G, et al． Sero-prevalence of Neospora caninum and Besnoitia besnoiti in South Australian beef and dairy cattle[J]． Vet Parasitol, 2012, 186(3-4): 480-485．

[15] Asmare K, Regassa F, Robertson L J, et al． Seroprevalence of Neospora caninum and associated risk factors in intensive or semi-intensively managed dairy and breeding cattle of Ethiopia[J]． Vet Parasitol, 2013, 193(1-3): 85-94．

[16] Bruhn F R, Daher D O, Lopes E, et al． Factors associated with seroprevalence of Neospora caninum in dairy cattle in southeastern Brazil[J]． Trop Anim Health Prod, 2013, 45(5): 1093-1098．

[17] Yu J, Xia Z, Liu Q, et al． Seroepidemiology of Neospora caninum and Toxoplasma gondii in cattle and water buffaloes (Bubalus bubalis) in the People’s Republic of China[J]． Vet Parasitol, 2007, 143(1): 79-85．

[18] Liu J, Cai J Z, Zhang W, et al． Seroepidemiology of Neospora caninum and Toxoplasma gondii infection in yaks (Bos grunniens) in Qinghai, China[J]． Vet Parasitol, 2008, 152(3-4): 330-332．

[19] Wang C, Wang Y, Zou X, et al． Seroprevalence of Neospora caninum infection in dairy cattle in northeastern China[J]． J Parasitol, 2010, 96(2): 451-452．

[20] Xia H Y, Zhou D H, Jia K, et al． Seroprevalence ofNeospora caninum infection in dairy cattle of Southern China[J]． J Parasitol, 2011, 97(1): 172-173．

[21] Xu M J, Liu Q Y, Fu J H, et al． Seroprevalence of Toxoplasma gondii and Neospora caninum infection in dairy cows in subtropical southern China[J]． Parasitology, 2012, 139(11): 1425-1428．

[22] Corbellini L G, Smith D R, Pescador C A, et al． Herdlevel risk factors for Neospora caninum seroprevalence in dairy farms in southern Brazil[J]． Prev Vet Med, 2006, 74(2-3): 130-141．

[23] Panadero R, Painceira A, López C, et al． Seroprevalence of Toxoplasma gondii and Neospora caninum in wild and domestic ruminants sharing pastures in Galicia (Northwest Spain)[J]． Res Vet Sci, 2010, 88(1): 111-115．

[24] Innes E A, Andrianarivo A G, Bj-rkman C, et al． Immune responses to Neospora caninum and prospects for vaccination[J]． Trends Parasitol, 2002, 18(11): 497-504．

[25] Wouda W, Bartels C J, Moen A R． Characteristics of Neospora caninum-associated abortion storms in diary herds in the Netherlands (1995 to 1997)[J]．Theriogenology, 1999, 52(2): 233-245．

SEROPREVALENCE AND RISK FACTORS OF NEOSPORA CANINUM INFECTION IN DAIRY CATTLE IN GANSU AND NINGXIA AREAS

TAN Qi-dong1,2,3, WEI Bang-xiang4, CHEN Bing4, ZHANG Xiao-xuan1,5, YANG Yan-chuan1, QIN Si-yuan1,ZHU Xing-quan1, XU Qian-ming3, ZHOU Dong-hui1
(1. State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Lanzhou Veterinary Research Institute, CAAS, Lanzhou 730046, China; 2. Animal Quarantine Station of Beijing Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Beijing 101312, China; 3. College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China; 4. Yuzhong Animal Disease Prevention and Control Center, Yuzhong 730000, China)

The objective of the present investigation was to examine seroprevalence of N. caninum in dairy cattle in Gansu province and Ningxia Hui Autonomous Region (NXHAR), Northwest China for assessment of the associated risk factors. In this study, a total of 1657 serum samples were collected and tested for the antibodies of N. caninum using a commercially available ELISA kit. The seropositive percentage was 8.93% (148/1657). Then, multiple logistic regression was used to analyze the risk factors associated with seroprevalence.The results of the present survey indicated the widespread of N. caninum infection in Gansu and NXHAR. Thus, comprehensive control strategies and efficient management measures for N. caninum infection should be implemented to increase profit of the dairy cattle industry.

Neospora caninum; ELISA; seroprevalence; dairy cattle; Gansu; Ningxia

S852.723

A

1674-6422（2016）05-0046-05

2016-02-19

國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2012BAD12B07)；甘肅省創(chuàng)新研究群體計(jì)劃項(xiàng)目（1210RJIA006）

譚啟東，男，碩士，主要從事獸醫(yī)寄生蟲(chóng)病學(xué)及分子生物學(xué)方面研究

周東輝，E-mail：zhoudonghui@caas．cn