梁文衛(wèi)，關(guān) 瑩，周 雙，王明潔，杜漢軍

(黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院漿果研究所，黑龍江綏棱 152204)

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東北扁核木組培快繁研究

梁文衛(wèi)，關(guān) 瑩，周 雙，王明潔，杜漢軍

(黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院漿果研究所，黑龍江綏棱 152204)

[目的]篩選東北扁核木組織培養(yǎng)最適宜的初代、繼代和生根培養(yǎng)基。[方法]以東北扁核木的單芽莖段為外植體，采用MS或1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA、IBA 、NAA和GA3，探討不同培養(yǎng)基對(duì)東北扁核木芽誘導(dǎo)、增殖和生根效果的影響。[結(jié)果]IBA濃度對(duì)東北扁核木初代培養(yǎng)的啟動(dòng)率影響顯著，6-BA濃度和GA3濃度的影響不顯著，因素主次順序依次為IBA濃度、GA3濃度、6-BA濃度；6-BA濃度對(duì)其繼代培養(yǎng)的增殖系數(shù)影響顯著，IBA濃度和NAA濃度的影響不顯著，因素主次順序依次為6-BA濃度、IBA濃度、NAA濃度；IBA濃度對(duì)其生根培養(yǎng)的生根指數(shù)影響顯著，NAA濃度的影響不顯著，因素主次順序依次為IBA濃度、NAA濃度。[結(jié)論]東北扁核木組織培養(yǎng)最適宜的初代、繼代和生根培養(yǎng)基分別為MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA、MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA和1/2 MS+2.0 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA。

東北扁核木；組織培養(yǎng)；快速繁育技術(shù)

東北扁核木[Prinsepiasineneie(Oliv.)Kom.]學(xué)名金剛木，又名扁擔(dān)胡子、扁棗胡子、扁胡子、東北蕤核，為薔薇科(Rosaceae)扁核木屬(Prinsepia)多年生落葉灌木[1-2]，主產(chǎn)于黑龍江、吉林和遼寧省，生長于雜木林中或陰山坡的林間，或山坡開闊處以及河岸旁。

東北扁核木枝繁葉茂，是觀形、觀花、觀果佳品[2-3]；木質(zhì)堅(jiān)硬細(xì)膩，比重大于1.0[1]，是雕刻、研磨等工藝的理想用材；果味酸甜多汁，具有微香，含有多種氨基酸、維生素、微量元素和糖類，可生食或加工成果脯、果茶、果醬等天然綠色食品，亦可釀酒，其口感甘醇爽口，色味俱佳[1]；種仁可入藥，有清肝明目功效，常用于治療結(jié)膜炎、角膜云翳等眼病[4]。是一種具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值和廣闊開發(fā)前景的經(jīng)濟(jì)作物。目前東北扁核木育苗技術(shù)主要采用播種和扦插[5-7]，而有關(guān)其組培快繁育苗技術(shù)方面的研究鮮見報(bào)道。筆者采用MS或1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA、IBA、NAA和GA3，探討不同培養(yǎng)基對(duì)東北扁核木芽誘導(dǎo)、增殖和生根效果的影響，以期篩選出東北扁核木組織培養(yǎng)最適宜的初代、繼代和生根培養(yǎng)基，為東北扁核木的組培快繁育苗技術(shù)奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 供試材料采自黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院漿果研究所果樹資源圃(127°5′52″ E，47°14′6″ N)。試驗(yàn)于2014年5月至2015年11月在黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院漿果研究所綜合實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體選擇與處理。在生長季節(jié)晴天上午采集當(dāng)年生健壯枝條，去除葉片和葉柄，剪成約1 cm帶單芽的莖段。用飽和洗衣粉水漂洗10 min，流水沖洗2 h后置超凈工作臺(tái)上用75%乙醇消毒30 s，無菌水蕩洗3次，每次3 min；再用0.1% HgCl2消毒10 min，無菌水蕩洗5次，每次3 min；最后用無菌濾紙吸干植物材料表面的水分接種于初代培養(yǎng)基中。

1.2.2 初代培養(yǎng)。以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，采用L9(34)正交試驗(yàn)(表1)，并添加30 g/L蔗糖和10 g/L瓊脂，調(diào)pH 5.8為初代培養(yǎng)基，將預(yù)處理好的東北扁核木單芽莖段分別接種于上述初代培養(yǎng)基中，每處理接種10瓶，每瓶接種外植體3個(gè)，置于溫度25 ℃、光照強(qiáng)度3 000 lx，光照周期16 h/d條件下進(jìn)行初代培養(yǎng)，10 d后統(tǒng)計(jì)啟動(dòng)率。3次重復(fù)。

啟動(dòng)率=(啟動(dòng)數(shù)/未污染外植體總數(shù))×100%

1.2.3 繼代培養(yǎng)。以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，采用L9(34)正交試驗(yàn)(表2)，并添加30 g/L蔗糖和10 g/L瓊脂，調(diào)pH 5.8為繼代培養(yǎng)基。將初代培養(yǎng)30 d生長健壯的小苗剪成約1 cm帶單芽的莖段，分別接種于上述繼代培養(yǎng)基中，每處理接種10 瓶，每瓶接種外植體 3個(gè)，培養(yǎng)條件同初代培養(yǎng)，30 d后統(tǒng)計(jì)增殖系數(shù)。3 次重復(fù)。

增殖系數(shù)=繼代培養(yǎng)后產(chǎn)生的莖芽總數(shù)/繼代接種時(shí)的外植體個(gè)數(shù)

1.2.4 生根培養(yǎng)。以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，采用2因素3水平完全隨機(jī)試驗(yàn)(表3)，添加不同濃度的IBA(1.0、2.0、3.0 mg/L)和NAA(0.1、0.2、0.3 mg/L)，并添加20 g/L蔗糖和10 g/L瓊脂，調(diào)pH 5.8為生根培養(yǎng)基。待繼代培養(yǎng)小苗長至3 cm左右時(shí)，在基部單株切下分別接種于上述生根培養(yǎng)基中，每處理接種10瓶，每瓶接種外植體3個(gè)，培養(yǎng)條件同初代培養(yǎng)，30 d后統(tǒng)計(jì)平均根長、平均根數(shù)和生根率，計(jì)算生根指數(shù)。3次重復(fù)。

平均根長=生根苗根長之和/接種數(shù)

平均根數(shù)=生根苗根數(shù)之和/接種數(shù)

生根率=生根苗總數(shù)/接種數(shù)×100%

生根指數(shù)=平均根長×平均根數(shù)×生根率×100

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 采用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行方差分析，并采用Duncan檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較，顯著水平為P=0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 初代培養(yǎng) 方差分析結(jié)果表明，IBA濃度對(duì)啟動(dòng)率影響顯著，6-BA濃度和GA3濃度對(duì)啟動(dòng)率的影響不顯著，因素主次順序依次為IBA濃度、GA3濃度、6-BA濃度。對(duì)IBA濃度進(jìn)行Duncan檢驗(yàn)分析，確定最優(yōu)水平為0.2 mg/L，其啟動(dòng)率最高達(dá)90.7%，6-BA濃度和GA3濃度對(duì)啟動(dòng)率的影響較小，從節(jié)約成本考慮，分別選擇0.5和0 mg/L。因此，東北扁核木最適宜的繼代培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA(表1)。

表1 初代培養(yǎng)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

2.2 繼代培養(yǎng) 方差分析結(jié)果表明，6-BA濃度對(duì)增殖系數(shù)影響顯著，IBA濃度和NAA濃度對(duì)增殖系數(shù)影響不顯著，因素主次順序依次為6-BA濃度、IBA濃度、NAA濃度。對(duì)6-BA濃度進(jìn)行Duncan檢驗(yàn)分析，確定最優(yōu)水平為1.0 mg/L，其增殖系數(shù)最高達(dá)8.80，IBA濃度和NAA濃度對(duì)增殖系數(shù)的影響較小，從節(jié)約成本考慮，分別選擇0.1和0 mg/L。因此，東北扁核木最適宜的繼代培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA(表2)。

表2 繼代培養(yǎng)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

2.3 生根培養(yǎng) 方差分析結(jié)果表明，IBA濃度對(duì)生根指數(shù)影響顯著，NAA濃度對(duì)生根指數(shù)影響不顯著，因素主次順序依次為IBA濃度、NAA濃度。對(duì)IBA濃度進(jìn)行Duncan檢驗(yàn)分析，確定最優(yōu)水平為2.0 mg/L，其生根指數(shù)最高達(dá)702.77，NAA濃度對(duì)生根指數(shù)的影響較小，從節(jié)約成本考慮，可選擇0.1 mg/L。因此，東北扁核木最適宜的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+ 2.0 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA(表3)。

表3 生根培養(yǎng)完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

3 結(jié)論

該研究采用MS或1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA、IBA、NAA和GA3，探討不同培養(yǎng)基對(duì)東北扁核木芽誘導(dǎo)、增殖和生根的影響。結(jié)果表明，東北扁核木最適宜的初代、繼代和生根培養(yǎng)基分別為MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA、MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA和1/2 MS+2.0 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA。

[1] 黃祥童.東北扁核木[J].特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物，1998，1(1)：47.

[2] 代玉紅，崔凱峰，趙瑩，等.有待開發(fā)的長白山野生觀賞植物：東北扁核木[J].中國花卉盆景，2008(8)：20-21.

[3] 崔凱峰，梁永君，于長寶，等.東北扁核木的開發(fā)利用與栽培技術(shù)[J].中國野生植物資源，2004，23(6)：63-65.

[4] 嚴(yán)仲鎧，李萬林.中國長白山藥用植物彩色圖志[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：227.

[5] 付強(qiáng)，孫曉梅，李雪飛.東北扁核木育苗方法[J].遼寧林業(yè)科技，2001(6)：35.

[6] 敬艷紅.東北扁核木育苗技術(shù)[J].農(nóng)業(yè)科技通訊，2010(7)：247-248.

[7] 沈健，趙志鵬，趙辛.東北扁核木苗木繁殖技術(shù)[J].中國林副特產(chǎn)，2016(2)：65-66.

Study on Rapid Propagation ofPrinsepiasinensisTissue Culture

LIANG Wen-wei, GUAN Ying, ZHOU Shuang et al

(Berries Institute, Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences, Suiling, Heilongjiang 152204)

[Objective] The aim was to screen out the optimal primary culture, subculture and rooting culture medium forPrinsepiasinensistissue culture. [Method] With single bud stem segment ofPrinsepiasinensisas explant, using MS or 1/2 MS as the basic culture medium, supplemented with different concentrations of 6-BA, IBA, NAA and GA3, effects of different culture mediums on bud induction, proliferation and rooting were discussed. [Result] IBA concentration influenced significantly on starting rate of primary culture ofPrinsepiasinensis, the order of influence degree was IBA concentration>GA3concentration>6-BA concentration; 6-BA concentration had obvious influence on proliferation coefficient of subculture medium, the order of influence degree was 6-BA concentration>IBA concentration>NAA concentration; IBA concentration had a significant effect on rooting index, while NAA concentration had no significant effect. [Conclusion] The optimal primary culture, subculture and rooting culture mediums forPrinsepiasinensistissue culture were: MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA; MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA; 1/2 MS+2.0 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA.

Prinsepiasinensis; Tissue culture; Rapid propagation technology

梁文衛(wèi)(1984- )，男，山西運(yùn)城人，研究實(shí)習(xí)員，碩士，從事植物生物技術(shù)方面的研究。

2016-08-19

S 723

A

0517-6611(2016)29-0154-02