孫　巍

（多多藥業(yè)有限公司，黑龍江佳木斯154007）

HPLC法測(cè)定石杉?jí)A甲分散片的含量

孫巍

（多多藥業(yè)有限公司，黑龍江佳木斯154007）

通過對(duì)石杉?jí)A甲分散片的含量方法學(xué)研究，建立石杉?jí)A甲新劑型分散片含量的HPLC測(cè)定方法。

HPLC；石杉?jí)A甲；分散片；含量測(cè)定

石杉?jí)A甲[（-）-Huperzine，HupA]是我國(guó)科學(xué)家劉嘉森于1986年從草藥千層塔（蛇足石杉）中分離得到的一種新型石松類生物堿有效單體，因其具有強(qiáng)效、高選擇性的抗乙酞膽堿醋酶活性，已引起世界各國(guó)科學(xué)家的廣泛關(guān)注，成為藥學(xué)界受人矚目的研究熱點(diǎn)之一[1]。國(guó)內(nèi)HupA片劑“哈伯因”于1994年上市，首先用于治療阿爾茨海默病。與FDA批準(zhǔn)的同類藥物相比，HupA的化學(xué)結(jié)構(gòu)獨(dú)特，極高地選擇性抑制腦內(nèi)乙酰膽堿脂酶，可增強(qiáng)腦內(nèi)膽堿神經(jīng)元的功能。此外，該藥還具有作用時(shí)間長(zhǎng)、易透過血腦屏障、口服生物利用度高以及不良反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)，優(yōu)于加蘭他敏、多奈哌齊和他克林等[1-2]。本文簡(jiǎn)要敘述了石杉?jí)A甲的新劑型分散片中HPLC法測(cè)定含量的研究。

1　儀器與試劑

高效液相色譜儀（Agilent 1100系列）；分析天平（Sartorius BP211D）；超聲波儀（天津恒奧HS3120）；色譜柱（Agilent ZORBAX SB-C18 5μm 4.6*150mm）。甲醇（德國(guó)MERCK公司HPLC級(jí)）；三乙醇胺（常熟市第二化工廠，AR）；石杉?jí)A甲對(duì)照品（中檢院，批號(hào)100243-201202）；超純水（Milli-Q）。

2　色譜條件

參考石杉?jí)A甲的化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，采用甲醇∶水∶三乙醇胺=45∶55∶0.02體系作為流動(dòng)相，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以水為溶劑，檢測(cè)波長(zhǎng)為310nm，溫度為室溫，能夠?qū)悠泛芎玫姆蛛x分析。

3　測(cè)定方法

取本品的細(xì)粉適量（約相當(dāng)于石杉?jí)A甲0.05mg），置于10mL容量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲使石杉?jí)A甲溶解，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按照上述色譜條件，精密量取50μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取石杉?jí)A甲對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋成每1mL約含5μg的溶液，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中的C15H18N2O含量[3]。

4　色譜系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

按照上述色譜條件，取供試品溶液50μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，理論塔板數(shù)按石杉?jí)A甲峰計(jì)算不低于2000，與其它雜質(zhì)分離度不低于2.0，見表1。

表1　色譜系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

試驗(yàn)表明，色譜系統(tǒng)適應(yīng)性良好。

5　含量測(cè)定方法驗(yàn)證

5.1專屬性試驗(yàn)

按中國(guó)藥典（三、專屬性要求）[4]，分別進(jìn)行輔料的干擾試驗(yàn)。樣品和輔料通過氧化、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、加熱、光照等破壞試驗(yàn)產(chǎn)生降解產(chǎn)物后進(jìn)行干擾試驗(yàn)，按含量測(cè)定方法檢測(cè)主成分，結(jié)果表明，理論塔板數(shù)按石杉?jí)A甲峰計(jì)算均不低于1500，石杉?jí)A甲峰與其它經(jīng)破壞產(chǎn)生的降解產(chǎn)物色譜峰分離度均大于1.5，表明在本色譜系統(tǒng)條件下，降解產(chǎn)物對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，專屬性較好。

5.2溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取測(cè)定法項(xiàng)下配制的對(duì)照品溶液及供試品溶液，室溫下放置0、2、4、6、8、10、12h，分別取50μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)量石杉?jí)A甲峰面積，計(jì)算RSD，結(jié)果見表2。

表2　溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

試驗(yàn)結(jié)果表明，在12h內(nèi)，本品對(duì)照品溶液及供試品溶液均能保持穩(wěn)定。

5.3線性試驗(yàn)

精密稱取石杉?jí)A甲對(duì)照品適量，按中國(guó)藥典（六、線性）所述要求[4]，測(cè)量石杉?jí)A甲的峰面積A，以濃度C對(duì)峰面積A進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表3，回歸曲線見圖1。

表3　石杉?jí)A甲線性試驗(yàn)

圖1　含量測(cè)定回歸曲線

結(jié)果表明，石杉?jí)A甲在2.352～9.152μg/mL，范圍內(nèi)呈良好線性。

5.4靈敏度試驗(yàn)

精密稱取石杉?jí)A甲適量，加流動(dòng)相配制成每1mL含石杉?jí)A甲5.237μg的溶液，將該溶液加流動(dòng)相逐步稀釋配制系列溶液，分別取50μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，信噪比為2∶1時(shí)，測(cè)得石杉?jí)A甲最低檢測(cè)限濃度為0.02272μg/mL，最低檢出量為1.136ng，信噪比為10∶1時(shí)，石杉?jí)A甲最低定量濃度為0.1021μg/mL，最低定量限為5.105ng。

5.5回收率試驗(yàn)

精密稱取對(duì)照品加入按處方配比的輔料制成每1mL中含石杉?jí)A甲4μg、5μg、6μg溶液各10mL，取續(xù)濾液為供試品溶液，按照含量測(cè)定項(xiàng)下方法檢測(cè)，結(jié)果見表4。

表4　石杉?jí)A甲回收率測(cè)定

試驗(yàn)測(cè)得平均回收率為100.84%，RSD為0.74%，表明回收率良好。

5.6精密度試驗(yàn)

按含量測(cè)定方法及中國(guó)藥典（二、精密度）要求[4]，分別進(jìn)行連續(xù)進(jìn)樣精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、中間精密度試驗(yàn)，結(jié)果見表5、表6、表7。

表5　連續(xù)進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

表6　含量測(cè)定重復(fù)性試驗(yàn)

表7　含量測(cè)定中間精密度試驗(yàn)

結(jié)果表明，本法的儀器精密度、重復(fù)性及中間精密度均良好。

6　結(jié)論

通過以上含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)，證明本研究的HPLC的色譜條件和檢測(cè)方法可以用于石杉?jí)A甲分散片的含量測(cè)定。

[1]譚昌恒，朱大元.石松生物堿研究進(jìn)展[J].中國(guó)天然藥物，2003，1（10）：1-7.

[2]王洪新，王鍵.石杉?jí)A甲的研究進(jìn)展[J].中國(guó)野生植物資源，2001，20（6）:4-10.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典四部0512高效液相色譜法[S].

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典四部9101藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則[S].

Determination of Dispersible Tablets of Huperzine-A by HPLC

SUN Wei
（DuoduoPharmaceutical Co.，Ltd.，Jiamusi 154007，China）

The aim of this study is to research on the content through the method of dispersible tablets of Huperzine-A，establishingmethod ofHuperzine-AHPLCmethod for the determination ofcontent.

HPLC；Huperzine-A；dispersible tablets；content determination

10.3969/j.issn.1008-553X.2016.04.044

TQ460.7+2；R917

A

1008-553X（2016）04-0119-03

2016-03-22

孫?。?981-），女，畢業(yè)于齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院，工程師，從事藥品質(zhì)量管控工作，0454-8358917，18845452468，hljddyy@163.com。