王 冰，王希明

（1.甘肅省張掖市公安局，甘肅 張掖 734000；2.甘肅省張掖市疾病預(yù)防控制中心，甘肅 張掖 734000）

蒸餾—?dú)庀嗌V法測(cè)定血液中乙醇含量方法的研究

王 冰1，王希明2

（1.甘肅省張掖市公安局，甘肅 張掖 734000；2.甘肅省張掖市疾病預(yù)防控制中心，甘肅 張掖 734000）

采用蒸餾法處理樣品，氣相色譜檢測(cè)血液中乙醇含量，無(wú)需頂空等特殊設(shè)備。在 0～160mg/100mL,濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，嚴(yán)格控制蒸餾速度，平均回收率97%，RSD：5.0%～10.6%，平均7.6%，特異性高，方法快速、簡(jiǎn)易可靠，具有良好的通用性。

血液蒸餾；氣相色譜；乙醇檢測(cè)

開(kāi)展生物材料中酒精含量的測(cè)定，為公安執(zhí)法有著重要的作用。血液中乙醇含量檢測(cè)，采用自動(dòng)頂空進(jìn)樣氣相色譜法最佳[1]，但需要專門(mén)儀器，自動(dòng)頂空進(jìn)樣裝置，成本高實(shí)用性有限，手動(dòng)頂空進(jìn)樣體積大[2]，操作難度大，精密度差，色譜耗材大，應(yīng)用受限。我們根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際條件，采用直接蒸餾法處理樣品氣相色譜法檢測(cè)，開(kāi)展血液乙醇含量測(cè)定方法的研究，實(shí)驗(yàn)研究完善了檢測(cè)方法。檢出限、精密度和準(zhǔn)確度完全符合檢驗(yàn)的要求。

1 原理

乙醇具有揮發(fā)性。血液中的乙醇通過(guò)加熱蒸餾，從試樣中蒸發(fā)出來(lái)，再通過(guò)冷卻收集蒸餾液，用帶有氫火焰檢測(cè)器的氣相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，乙醇的響應(yīng)值（峰面積）與蒸餾液中乙醇的濃度呈正比例關(guān)系，應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)系列，以試樣的峰面積與標(biāo)準(zhǔn)系列比較，計(jì)算出血液中乙醇含量。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

氣相色譜儀：東西電子GC4011A，氫火焰離子化檢測(cè)器；色譜柱：不銹鋼柱,長(zhǎng)2m，內(nèi)徑2mm，內(nèi)裝GDX-102，80～100目；全玻璃磨口蒸餾器500mL；10mL刻度離心管，微量注射器。乙醇；色譜純；乙醇標(biāo)準(zhǔn)液（1mL=50mg）：稱取乙醇2.5000g，于50mL溶量瓶，用純水稀釋至刻度。

2.2 色譜條件

柱溫150℃，汽化室170℃，檢測(cè)器190℃?？諝猓?.2Pa，氫氣0.08Pa，氮?dú)?.21Pa。

2.3 檢測(cè)步驟

樣品處理，取血樣2～5mL，加入蒸餾瓶中，加水50mL，置電熱板上，連接好冷凝管和冷凝水，中溫加熱蒸餾，小心控制加熱溫度防溢出。準(zhǔn)確收集餾液10mL，餾液待測(cè)定用。另取25mL溶量瓶6個(gè)，分別加入乙醇標(biāo)準(zhǔn)液 （1mL=50mg）0.0，0.10，0.20，0.40，0.50，0.80mL，用純水稀釋至刻度。乙醇濃度分別為0.0，20，40，80，100，160mg/100mL。儀器預(yù)熱各項(xiàng)條件穩(wěn)定后，分別吸取標(biāo)準(zhǔn)系列和樣品蒸餾液進(jìn)樣，進(jìn)樣量1ul。用標(biāo)準(zhǔn)系列濃度和相應(yīng)的峰面積制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出回歸方程。以樣品保留時(shí)間定性，用峰面積代入回歸方程計(jì)算出血液中乙醇含量。

2.4 計(jì)算

式中：X——樣品乙醇濃度mg/100mL；

C——樣品蒸餾液乙醇濃度mg/100mL；

V——血液取樣量mL。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜條件的選擇

用正交設(shè)計(jì)方法選擇柱溫、汽化室溫度和載氣流量的最佳條件，以柱溫150℃，汽化室170℃，檢測(cè)器190℃，氮?dú)?.21Pa靈敏度最高。

3.2 樣品蒸餾時(shí)間的確定

樣品加熱蒸餾時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量氣泡，很容易溢出，所以要嚴(yán)格控制好溫度，主要依所用電熱器及工作經(jīng)驗(yàn)加以控制，以不溢出為準(zhǔn)。經(jīng)蒸餾收集餾出液10mL后，再繼續(xù)收集餾出液1mL左右于另一容器中，首先用0.1%重鉻酸鉀檢驗(yàn)，不能使其退色，再與

樣品相同條件下進(jìn)樣1ul，在已知保留時(shí)間內(nèi)沒(méi)有峰出現(xiàn)。同樣在不同時(shí)間中測(cè)定10個(gè)樣品，均沒(méi)有色譜峰出現(xiàn)，說(shuō)明取樣品2～5mL，蒸餾收集餾出液10mL，樣品血液中的乙醇完全被蒸出。

3.3 方法特異性

收集10份前兩天確認(rèn)沒(méi)有喝酒人的血液，取2～5mL蒸餾，收集蒸餾液10mL，在上述條件下分別進(jìn)樣1ul，5min內(nèi)無(wú)峰出現(xiàn)。說(shuō)明采用血液直接蒸餾方法具有很高的特異性，在本方法條件下，血液經(jīng)蒸餾沒(méi)有其他干擾物質(zhì)。采用蒸餾法分離樣品是傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，所用儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，實(shí)用。

3.4 方法線性試驗(yàn)

對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列連續(xù)測(cè)定3次，每天1次，結(jié)果見(jiàn)表1，相關(guān)系數(shù)r＞0.9991。

表1 線性試驗(yàn)結(jié)果

3.5 回收率試驗(yàn)

取血液樣品6份，分別取2—5mL加入蒸餾瓶中，分別加入乙醇標(biāo)準(zhǔn)液(1mL=50mg)蒸餾，收集蒸餾液10mL，取1ul進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表 2，回收率在86%～106%之間，平均回收率為97%。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.6 精密度試驗(yàn)

取3份血液樣品，取2～5ml雙份蒸餾，收集蒸餾液10mL,分別進(jìn)樣3次，結(jié)果見(jiàn)表3。精密度(RSD)為5.0%～10.6%，平均值為7.6%，符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果

人體血液中乙醇是由于喝酒直接吸收入血產(chǎn)生的，大量的乙醇主要作用是起一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制劑的作用[3]，血液中乙醇濃度很低（10mg/ 100mL）時(shí)察覺(jué)不出什么影響，直到血液中乙醇濃度很高（500mg/100mL）時(shí)，最終嚴(yán)重地抑制呼吸，并引起死亡。人體對(duì)乙醇的耐受性具有較大的個(gè)體差異。研究報(bào)導(dǎo)，血液中乙醇濃度10～50mg/ 100mL時(shí)，人的精神愉悅，抑制作用減弱，注意力和判斷力降低；血液中乙醇濃度50～100mg/100mL時(shí)，表現(xiàn)為興奮，鎮(zhèn)靜、肌肉協(xié)調(diào)能力減弱，敏感反應(yīng)能力降低；血液中乙醇濃度 150～300mg/ 100mL時(shí)，人的精神錯(cuò)亂，定向力消失，感覺(jué)障礙，失去平衡能力，語(yǔ)言含糊；血液中乙醇濃度250～400mg/100mL時(shí)，表現(xiàn)為木僵，對(duì)外界刺激的反應(yīng)能力顯著降低，肌肉共濟(jì)失調(diào)明顯，大小便失禁，昏睡；血液中乙醇濃度10～50mg/100mL時(shí)，人昏迷，完全失去知覺(jué)，抑郁反射，低常體溫，呼吸性和循環(huán)性虛脫，死亡。

3.7 樣品檢驗(yàn)

從2004年開(kāi)始，檢測(cè)交警送的當(dāng)事人血液中乙醇含量836份，乙醇含量在0～450mg/100mL，沒(méi)有出現(xiàn)當(dāng)事人不服的情況。參照美國(guó)國(guó)家乙醇和藥物安全委員會(huì)和美國(guó)醫(yī)學(xué)會(huì)代表機(jī)構(gòu)規(guī)定，從交通事故中責(zé)任分析研究，暫定血液乙醇濃度＜20mg/ 100mL未喝酒，血液乙醇濃度＞20mg/100mL已喝酒，血液乙醇濃度＞100mg/100mL，已喝醉。

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