龐 嵐，鄭彥強(qiáng)，時(shí)志民，孫秀敏，劉石萍，楊俊英，張 婕

(1.河北省邯鄲市婦幼保健院，河北 邯鄲 056000；2.河北工程大學(xué)，河北 邯鄲 056000；3.河北省邯鄲市中心醫(yī)院，河北 邯鄲 056001；4.五礦邯邢礦業(yè)有限公司職工總醫(yī)院，河北 邯鄲 056000；5.河北省成安縣人民醫(yī)院，河北 成安 056000)

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UPA和MMP-9在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況及臨床意義

龐 嵐1，鄭彥強(qiáng)1，時(shí)志民2，孫秀敏1，劉石萍3，楊俊英4，張 婕5

(1.河北省邯鄲市婦幼保健院，河北 邯鄲 056000；2.河北工程大學(xué)，河北 邯鄲 056000；3.河北省邯鄲市中心醫(yī)院，河北 邯鄲 056001；4.五礦邯邢礦業(yè)有限公司職工總醫(yī)院，河北 邯鄲 056000；5.河北省成安縣人民醫(yī)院，河北 成安 056000)

目的 觀察子宮內(nèi)膜癌組織中尿激酶型纖溶酶原激活劑(UPA)和金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達(dá)情況及與病理學(xué)指標(biāo)的關(guān)系，探討UPA和MMP-9表達(dá)水平的相關(guān)性。方法 收集子宮內(nèi)膜癌組織68例和正常子宮內(nèi)膜組織32例，采用微波EliVisionTM免疫組織化學(xué)方法觀察UPA和MMP-9在子宮內(nèi)膜癌組織和正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)水平，Spearman相關(guān)分析法分析二者有無(wú)相關(guān)性，分析二者表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系。結(jié)果 子宮內(nèi)膜癌中UPA和MMP-9表達(dá)定位于細(xì)胞漿；UPA和MMP-9在子宮內(nèi)膜癌組織的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織(P<0.05)。Spearman相關(guān)分析檢測(cè)UPA和MMP-9表達(dá)水平存在正相關(guān)性(r=0.261,P=0.000)；UPA和MMP-9高表達(dá)均與組織學(xué)分級(jí)、cTNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。結(jié)論 UPA和MMP-9的表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，提示臨床檢測(cè)二者有可能為評(píng)估子宮內(nèi)膜癌病變程度提供參考。

子宮內(nèi)膜癌組織；UPA蛋白；MMP-9蛋白；EliVisionTM免疫組化

女性生殖系統(tǒng)的惡性腫瘤包括宮頸癌、卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌，其中子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率占到女性惡性腫瘤的第二位，且發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)[1]。子宮內(nèi)膜癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是其預(yù)后較差的主要原因，在腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程中有多種因子共同參與，尿激酶型纖溶酶原激活劑(UPA)和金屬蛋白酶-9(MMP-9)通過(guò)降解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)和促進(jìn)血管生成等作用，在腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。本研究采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)了子宮內(nèi)膜癌組織中UPA和MMP-9的表達(dá)情況，探討二者在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展的作用，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2011年1月—2014年12月邯鄲市婦幼保健院和邯鄲市中心醫(yī)院收集的68例子宮內(nèi)膜鱗癌組織蠟塊為實(shí)驗(yàn)組，年齡56～71歲，中位年齡62.9歲；絕經(jīng)年齡47～62歲，中位年齡55歲。根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO，2000)病理分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期22例，Ⅱ期17例，Ⅲ期20例，Ⅳ期9例；組織學(xué)分級(jí)：高分化(G1)38例，中分化(G2)22例，低分化(G3)8例；病理類型：子宮內(nèi)膜樣腺癌52例，腺鱗癌2例，透明細(xì)胞癌7例，漿液性乳頭狀腺癌7例；肌層浸潤(rùn)深度：肌層浸潤(rùn)深度≥1/2 28例，1/2 以內(nèi)及無(wú)肌層浸潤(rùn)40例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：術(shù)后證實(shí)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例。另選癌旁正常子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本32例作為對(duì)照組。

1.2 試劑與方法 S-P試劑盒、DAB顯色液及兔抗人UPA單克隆抗體、兔抗人MMP-9多克隆抗體。采用微波EliVisionTM免疫組織化學(xué)方法,先行抗原修復(fù)，抗體為兔抗人UPA、兔抗人MMP-9(1∶100)，取已知切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，鏡下觀察UPA和MMP-9在子宮內(nèi)膜癌組織和正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)水平。Spearman相關(guān)分析法分析UPA和MMP-9有無(wú)相關(guān)性，并分析二者表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 以在陽(yáng)性細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性,UPA陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞漿，MMP-9陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿。每張切片均隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野(×400)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為(-)，5%～25%為(+)，26%～50%為()，>50%為()。+～為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn),相關(guān)性分析用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 UPA和MMP-9在正常子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá) UPA蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織中表達(dá)率為15.63%(5/32)，在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)率為70.59%(48/68)，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；MMP-9蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織中表達(dá)率為25.00%(8/32)，在子宮內(nèi)膜癌癌中的表達(dá)率為80.88%(55/68)，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 UPA和MMP-9在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 UPA和MMP-9陽(yáng)性表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、cTNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 UPA和MMP-9在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 例

2.3 UPA和MMP-9二者表達(dá)的相關(guān)性分析 UPA和MMP-9在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)呈明顯正相關(guān)(r=0.261，P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 UPA和MMP-9在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析 例

3 討 論

UPA是一種絲氨酸蛋白水解酶，具有激活纖溶酶原(PLG)作用，在組織改建、細(xì)胞遷移、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移及腫瘤血管形成等病理、生理過(guò)程中發(fā)揮重要作用[2]。腫瘤發(fā)生侵襲性成長(zhǎng)基本需要幾步來(lái)完成，首先要對(duì)ECM進(jìn)行黏附，接著對(duì)ECM進(jìn)行降解，最后腫瘤細(xì)胞通過(guò)ECM后遷徙到新的部位[3]。其中降解ECM是關(guān)鍵，多種蛋白酶能降解ECM，UPA是重要的ECM降解蛋白酶，除了可以直接降解ECM外，作為激活物還可以通過(guò)激活纖溶酶原轉(zhuǎn)化成纖溶酶；還可以激活金屬蛋白酶，刺激血管生成。UPA具有的生物學(xué)作用最終目的是降解ECM成分。研究也證實(shí)，在乳腺癌、胃癌、大腸癌、非小細(xì)胞肺癌等惡性腫瘤組織中UPA呈現(xiàn)高表達(dá)，UPA參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展的同時(shí)也參與了這些腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移[4-7]。本研究也證實(shí)，UPA在子宮內(nèi)膜癌組織中呈高表達(dá)，提示其在子宮內(nèi)膜癌組織中有促癌作用；且UPA在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與cTNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，在分化程度較差、cTNM分期晚、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中UPA呈明顯高表達(dá)，其水平高低預(yù)示著子宮內(nèi)膜癌的惡性程度，原因?yàn)閁PA與其生物學(xué)功能密切相關(guān)，通過(guò)降解腫瘤組織的ECM和促進(jìn)血管生成等作用實(shí)現(xiàn)其促癌功能。故檢測(cè)UPA在子宮內(nèi)膜癌組織中的水平，可以正確認(rèn)識(shí)和判斷子宮內(nèi)膜癌的進(jìn)展情況，對(duì)臨床工作具有一定實(shí)用價(jià)值。

金屬蛋白酶家族(MMPs)包括26個(gè)成員，金屬蛋白酶在破壞腫瘤細(xì)胞侵襲的組織學(xué)屏障中扮演主要角色，其中MMP-9是MMPs家族中最重要的一員，由巨噬細(xì)胞、纖維母細(xì)胞、內(nèi)皮上皮細(xì)胞分泌產(chǎn)生，其作用為通過(guò)降解、破壞ECM中Ⅳ、Ⅴ、Ⅸ、Ⅺ型膠原，破壞ECM和基底膜的結(jié)構(gòu)，使腫瘤細(xì)胞可以沿著受損的基底膜向周圍組織浸潤(rùn)[8-10]；還可以降低腫瘤細(xì)胞之間的黏附性，使腫瘤細(xì)胞容易脫離原發(fā)灶，提高腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和游走能力，最終達(dá)到惡性腫瘤浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移的目的[11-12]。同時(shí)MMP-9在降解ECM過(guò)程中釋放促血管生成因子，提高血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)水平，促進(jìn)血管生成，血管生成是腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的基本條件，在為其提供途徑同時(shí)也為腫瘤提供養(yǎng)分等新陳代謝。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)其表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生關(guān)系密切，且與cTNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示MMP-9在子宮內(nèi)膜癌的淋巴轉(zhuǎn)移途徑中產(chǎn)生了重要作用，其高表達(dá)直接證明預(yù)后差，值得臨床醫(yī)生關(guān)注。

相關(guān)研究顯示，在某些腫瘤組織中UPA和MMP-9相互作用，共同降解腫瘤組織的ECM，UPA激活纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶，MMP-9重要的功能是被激活后形成膠原酶，二者在腫瘤組織中相互配合，這種配合稱為基因協(xié)同作用假說(shuō)[13-15]。基因協(xié)同作用假說(shuō)認(rèn)為在腫瘤形成、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中至少存在2個(gè)基因的異常激活。本研究結(jié)果顯示，在子宮內(nèi)膜癌組織中UPA和MMP-9呈顯著正相關(guān)，說(shuō)明在子宮內(nèi)膜癌中MMP-9與UPA呈現(xiàn)高度的一致性，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到協(xié)同作用，共同參與降解ECM。對(duì)兩者的檢測(cè)有助于不良預(yù)后(侵襲和轉(zhuǎn)移)的早發(fā)現(xiàn)。

綜上所述，UPA和MMP-9的表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，提示臨床檢測(cè)二者有可能為評(píng)估子宮內(nèi)膜癌病變程度提供參考，為今后對(duì)抗子宮內(nèi)膜癌治療及預(yù)防轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)提供了一個(gè)新思路。

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時(shí)志民，E-mail：shizhimin1980@163.com

河北省邯鄲市科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(1523108076-18)

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.32.014

R737.33

B

1008-8849(2016)32-3577-03

2016-05-10