張燏琦，李永吉,郭玉巖，王銳

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

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青藤外敷貼制備及質(zhì)量標準研究

張燏琦，李永吉*,郭玉巖，王銳

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

目的：優(yōu)選青藤外敷貼的最佳制備工藝，建立嚴謹?shù)馁|(zhì)量控制方法。方法：采用聚丙烯酸鈉、聚丙烯吡咯烷酮等新型高分子材料制備成親水凝膠骨架貼，以正交試驗法考察貼片制備工藝，采用UPLC法測定青藤堿含量。結(jié)果：制備出的凝膠骨架型外敷貼具備粘性強、剝離性好、可反復(fù)揭貼的特點。結(jié)論：該制備工藝具有科學(xué)性、合理性，質(zhì)量標準具有可靠性，質(zhì)量控制方便可行，具有非常好的開發(fā)價值和應(yīng)用前景。

青藤外敷貼；質(zhì)量標準；制備工藝

防己科植物青藤[Sinomeniumacutum(Thunb)Rehd1et Wils]及毛青藤[Sinomeniumacutum(Thunb)Rehd1et Wils1Var Cinerrum Rehd1et Wils]的干燥藤莖稱為青風(fēng)藤,1000多年以前就已用于風(fēng)濕性疾病的治療[1]。青藤堿(sinomenine，SN)是中藥青風(fēng)藤(Sinomenii Caulis)中的重要生物活性成分。具很強的抗炎、免疫抑制、鎮(zhèn)痛、降血壓、抗心律失常等多種藥理作用[2]。臨床上主要用于治療風(fēng)濕性、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨性關(guān)節(jié)炎，甚至骨癌等疾病[1]。將青藤堿制成外敷貼可克服目前臨床上現(xiàn)有的口服片劑生物利用度低、不良反應(yīng)較多以及注射劑半衰期短、需頻繁給藥等諸多缺點。青藤外敷貼以青藤堿為主藥，以聚丙烯酸鈉、聚丙烯吡咯烷酮等新型高分子材料制備成親水凝膠骨架貼，可用于具有中醫(yī)學(xué)特色的穴位給藥途徑釋放給藥。

1 材料和儀器

1.1 材料

青藤堿(藥用，廣州白云山制藥廠)；青藤堿對照品(中國衛(wèi)生部生物制品藥品檢定所)；甲醇(色譜純,山東禹王實業(yè)有限公司)；聚丙烯酸鈉(PANA，廣州市化學(xué)工業(yè)研究所)；PVP -K30(聚乙烯吡咯烷酮,廣東南方化玻公司)；Carbomer -940(廣州博峰化工科技有限公司 )；PEG-400、丙二醇、甘油等均購自天津科密歐化學(xué)試劑公司。

1.2 儀器

真空干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；高效液相色譜儀(美國Waters公司)；分析電子天平(上海市百典儀器廠)；超聲振蕩儀(深圳市科工達超聲設(shè)備有限公司)；多功能磁力攪拌器(安徽省天長恒運電器廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 粘性分析方法的建立

方法參見參考文獻[3]。

2.2 空白基質(zhì)的處方[4]

空白基質(zhì)處方組成為PVP:Carbomer:PANA:甘油:PEG-400:丙二醇=8:1:1:0.5:0.5:4。配方中甘油作用為保濕和防腐，丙二醇作用為保濕，PEG-400作為增塑劑。經(jīng)三批產(chǎn)品驗證得此基質(zhì)性能良好。

2.3 外敷貼的成型工藝

采用L9(34)正交試驗設(shè)計，對制備時間、溫度和各組分加入順序這三項因素進行考察，看其對載藥外敷貼質(zhì)量的影響，優(yōu)選出最佳制備工藝，表1中因素C為三組分加入的順序，三組分為：青藤堿(青藤堿用藥用粉碎機粉碎，過100目篩)，軟化劑(適量橄欖油)和空白基質(zhì)。按L9(34)安排9次實驗。以貼劑的粘性強度優(yōu)良與否為考察指標，對測定的“初粘力”“持粘力”“剝離強度”這3個客觀指標，按好差程度進行評分，最差者為1分，最高者分9分；將三項指標所得分數(shù)相加，總分即是該次實驗的綜合評分。結(jié)果見表2、表3。

表1 因素水平表

表2 L9(34)正交試驗設(shè)計及結(jié)果

表3 方差分析

方差分析結(jié)果顯示，C因素對結(jié)果的影響較明顯，為主要影響因素。而A、B兩因素可根據(jù)實際情況進行選擇。因此, 最佳工藝為A1B3C3。即藥物加入順序為空白基質(zhì)先和青藤堿混合，然后再加入軟化劑，工藝參數(shù)為80℃加熱1 h并緩慢攪拌。將得到的膠漿用澆鑄法趁熱在模具上鋪展成膜厚不超過1.5 mm的凝膠貼。室溫晾干過夜后，置于真空干燥箱中50℃真空干燥0.5 h，達到表面固化而有彈性，室溫條件下放置，脫模。用醫(yī)用透明膠覆蓋表層，用PVC膜覆蓋下層，中間為貼劑；所得的青藤堿外敷貼表面呈凹凸不平狀。

2.4 驗證試驗

按上述的最佳制備工藝，重復(fù)制備三批樣品，粘性、剝離性、殘留性的指標均良好。表明該工藝可行。

3 質(zhì)量標準的研究

3.1 UPLC法測定青藤堿含量的方法與結(jié)果

3.1.1 色譜條件的確定

色譜柱為Hypersil GOLD C18柱(150 mm×2.1 mm，3 μm)；流動相為水-乙腈-乙二胺(70∶30∶0.25);流速為0.3 ml/min；進樣體積為2 μL；檢測波長為262 nm。

3.1.2 對照品溶液的制備

精密稱取減壓干燥至恒重的青藤堿對照品，用甲醇配置成每1 ml中約含0.42 mg的溶液10 ml,搖勻，即得對照品溶液。

3.1.3 供試品溶液的制備

取供試品貼片2.5 g，置于超聲振蕩儀上作用30 min，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，濾液置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶液定容，即得到了供試品溶液。

3.1.4 標準曲線的制備

取青藤堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成含青藤堿0.446 mg/mL的對照品貯備液，精密吸取1 ml、2 ml、7 ml、8 ml置10 ml量瓶中，甲醇溶稀釋定容，得到濃度為0.0446、0.0892、0.3122、0.3568 mg/ml的對照品溶液及濃度為0.446 mg/ml的儲備液，分別進樣10 μl，以對照品濃度(C)對峰面積(A)進行線性回歸。Y=9E+06x+102803 (R=0.9999)線性范圍為0.0446～0.446 mg/ml，線性關(guān)系良好。

3.1.5 空白試驗

取未加青藤堿的樣品，依照上述方法制成溶液，置于10 ml容量瓶中，精密吸取2.0 μL注入氣相色譜儀中，經(jīng)氣相色譜方法分析繪制色譜圖，結(jié)果顯示，未有相應(yīng)的干擾峰出現(xiàn)，說明除青藤堿外的其他基質(zhì)對青藤堿含量測定無干擾。

3.1.6 精密度實驗

分別精密稱取5個樣品適量(約60 mg)，置25 ml量瓶中，甲醇溶解定容,濾過，在選定色譜條件下連續(xù)重復(fù)進樣5次，以峰面積比值計算青藤堿含量，RSD分別為1.34%，結(jié)果表明本方法精密度良好。

3.1.7 重復(fù)性試驗

精密吸取5份供試液，各進樣5 μL測定青藤堿含量，RSD分別為1.04%，結(jié)果顯示本方法重復(fù)性良好。

3.1.8 穩(wěn)定性試驗

精密吸取濃度為0.42 mg/mL的青藤堿對照品2 μL，分別在0，2，4，6，8 h五個時間點測定一次，以峰面積比值計算青藤堿含量，RSD為1.17%，結(jié)果表明樣品溶液放置8 h以內(nèi)穩(wěn)定。

3.1.9 加樣回收率試驗

取已知含量為6.23 mg/g的樣品2.5 g，取青藤堿對照品適量，精密稱定，加入樣品中，超聲不少于30 min，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，棄雜質(zhì)，得供試品溶液。測青藤堿含量，計算得回收率為100.25%，RSD為1.09%。

3.1.10 樣品含量測定

取3批成品，分別測定其中青藤堿含量并計算，得青藤堿含量在6.20～6.28 mg/g，平均為6.24 mg/g,確定貼中青藤堿含量為不得低于6.0 mg/g。

3.2 粘性標準的制定

按粘性評定標準對所制得的三批樣品進行檢測，初粘力在10.0～10.5 cm之間，平均值為10.31 cm；持粘力在3.0～3.4 min之間，平均值為3.19 min；剝離強度在16.3～16.9 s之間，平均值為16.67 s，確定指標為：“初粘力”距離<15 cm；“持粘力”>3 min；“剝離強度”>16 s。

4 討論

本文通過正交實驗優(yōu)選出了青藤堿外敷貼的最佳制備工藝，制備出一種粘性特質(zhì)優(yōu)良、剝離性良好、可反復(fù)揭貼的凝膠骨架控釋穴位貼。且該制備工藝具有可靠性、可行性、科學(xué)性及合理性，所建立的質(zhì)量標準可用于質(zhì)量控制。但在制備過程中，也存在一些問題，包括對藥物青藤堿的溶解后制備出的外敷貼表面不平整，會出現(xiàn)表面凹凸不平狀等一些細小問題，是本課題需要進一步優(yōu)化的一部分。

將青藤堿制成骨架型貼劑可有效的避免上述臨床上遇到的問題，且將青藤堿外敷貼用于關(guān)節(jié)給藥,可更直接、更有效、更方便的治療各類關(guān)節(jié)炎,也為以后用青藤堿醫(yī)治各類關(guān)節(jié)炎的研究奠定了堅實的基礎(chǔ)。將凝膠骨架型貼片用于中藥關(guān)節(jié)穴位給藥，對中藥靶向給藥、經(jīng)皮給藥研究來說，也是很好的探索，具有深遠的實踐意義,為以后中藥穴位給藥奠定了基礎(chǔ),開辟了新天地,具有較好的開發(fā)價值和應(yīng)用前景。

[1] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(上冊)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1982:12341.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2005.

[3] 王銳,呂邵娃,王艷宏,等.清腦醒神貼制備及質(zhì)量標準的研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2011,22(3):651-653.

[4] 王銳,呂邵娃,李永吉,等.清腦醒神貼基質(zhì)的研究[J].黑龍江醫(yī)藥,2009,22(2):139．

國家自然科學(xué)基金項目(No.81473359)

張燏琦(1989-)，女,黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)2012級藥劑學(xué)專業(yè)碩士研究生。

李永吉*(1957-)，男，博士，教授，博士研究生導(dǎo)師,主要研究方向:經(jīng)皮給藥、中藥注射劑及新藥開發(fā)。

2015-08-26

R28

A

1002-2406(2016)05-0055-03

修回日期：2015-09-20