黎波，劉凱，何虹材，謝若琳，孫宏*

(1.江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，江西 南昌 330006;2.黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001;3.江西中醫(yī)藥大學，江西 南昌 330004)

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實 驗 研 究

右歸飲對去卵巢血管鈣化大鼠谷氨酸NMDA受體mRNA表達的影響

黎波1，劉凱2，何虹材3，謝若琳3，孫宏2*

(1.江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，江西 南昌 330006;2.黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001;3.江西中醫(yī)藥大學，江西 南昌 330004)

目的:觀察右歸飲對去卵巢血管鈣化谷氨酸NMDA受體mRNA表達的影響。方法：40只SD雌性大鼠隨機分為假手術組，模型組，低劑量組，高劑量組以及辛伐他汀組，采用華法令加注射維生素D3制備血管鈣化模型，并于造模后中藥低劑量組、高劑量組分別給予右歸飲濃縮液5.35 g/(kg·d)、16.05 g/(kg·d)灌胃，辛伐他汀組給予辛伐他汀混懸水溶液5.25 mg/(kg·d)灌胃。假手術組和模型組給予等量生理鹽水，共12周。于實驗結束時采集血漿標本測定雌二醇和血脂的情況并應用FQ-PCR法檢測谷氨酸離子受體mRNA表達。結果：模型組大鼠雌二醇、甘油三酯含量及NR1、NR2a、NR2b mRNA相對表達量明顯降低，低密度脂蛋白含量明顯升高，與假手術組比較，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；中藥高劑量組和低劑量組可提高雌二醇、甘油三酯以及NR1、NR2a、NR2b mRNA的表達，與模型組比較，有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，低劑量組、高劑量組和辛伐他汀組的LDL含量下降，與模型組比較，有顯著性差異(P<0.05)。結論：右歸飲可抑制去卵巢血管鈣化的形成，可能與提高雌二醇水平以及上調NR1以及NR2a、NR2b mRNA表達有關。

右歸飲;血管鈣化;去卵巢;谷氨酸離子受體

研究發(fā)現(xiàn)在血管鈣化中存在與骨形成相關蛋白，如堿性磷酸酶、骨鈣素、骨橋蛋白、Runx2和基質囊泡，羥基磷灰石礦物晶體，其鈣化機理涉及鈣/磷失衡、基質降解或修飾、細胞凋亡、抑制鈣化失衡、促軟骨形成、成骨樣細胞的分化等方面；血管鈣化作為一個類似于骨形成的主動、可逆轉而且可被調節(jié)的生物學過程逐漸被學者認同[1-3]。證據(jù)表明,神經遞質興奮性氨基酸谷氨酸信號通路在骨重塑中發(fā)揮重要作用，N-甲基-D-天冬氨酸功能型谷氨酸受體(N-methyl-D-aspartate Receptor, NMDAR)存在于破骨細胞、成骨細胞、骨細胞和骨髓單核細胞中，抑制NMDAR(NR)將阻止成骨細胞、破骨細胞的早期分化，成骨細胞NR的封閉或敲除將影響骨的發(fā)育和形成，并主導骨形成的長時程增強或抑制作用[4-5]。因此，為了觀察血管鈣化過程中NR mRNA的變化以及右歸飲對其的影響，本研究建立去卵巢腎虛血管鈣化模型，觀察右歸飲對血管鈣化過程中雌激素、血脂成分以及NR1、NR2a、NR2b相關基因表達的影響，明確其風險因素的地位，以探討其保護血管的可能機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康SPF級 SD雌性大鼠40只，體質量(225±25)g，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，實驗動物許可證號SCXK(湘)2011-0003。

1.2 試驗藥物及制備

右歸飲：熟地黃9 g，炒山藥6 g，山茱萸3 g，枸杞6 g，炙甘草6 g，杜仲6 g，肉桂6 g，制附子9 g，取25劑的量，水煎，頭煎加10倍水，煎煮2 h，過濾，濾渣加8倍水，煎煮1 h，過濾，濾渣加6倍水，煎煮1 h。合并濾液，減壓(65℃)濃縮至800 ml，生藥濃度為1.594 g/ml，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

30%的華法令注射液：華法令(sigma，BJ121010351A，CAS號129-06-6)，稱取6 g華法令，加生理鹽水200 ml，混勻至清澈透明，密閉4℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

2%戊巴比妥鈉的制備：精確稱取2 g戊巴比妥鈉加蒸餾水100 ml溶解即可，臨用前制備。默克集團(Merck)國內分裝。

維生素K1注射液(天津藥業(yè)集團新鄭股份有限公司，批號1301082)；維生素D3注射液(上海通用藥業(yè)股份有限公司，批號121029)；辛伐他汀片(山東魯抗醫(yī)藥集團賽特有限責任公司，批號121010)。

辛伐他汀水溶液混懸劑的制備(濃度0.8 mg/ml)：稱取羧甲基纖維素鈉2.5 g，另取注射用水250 ml置于500 ml燒杯中，逐漸加入羧甲基纖維素鈉粉劑，放入磁力攪拌器攪拌90 min，液體中少許絮狀物，置入超聲清洗器中打散10 min，成透明溶液；另外將辛伐他汀片20片研成粉，加入小燒杯中，加入注射用水20 ml，將此倒入羧甲基纖維素鈉溶液中，置入超聲清洗器中打散約10 min即成白色均勻的混懸液，補足注射用水至500 ml，密閉4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試劑與儀器

實時熒光定量PCR儀(BIO-RAD)、分光光度計(Thermo)；TriPure Isolation Reagent(羅氏公司，Cat.No.11667165001)； cDNA 合成試劑盒(Cat.No.AOPR-0200)以及熒光定量試劑盒(Cat.No.AORT-0050)(廣州復能基因有限公司)。

1.4 模型制備

去卵巢血管鈣化模型：SD雌性大鼠雙側去卵巢后飼養(yǎng)1周后參考文獻[6]制作血管鈣化模型，兩組均給予維生素K115 mg/(kg·d)，皮下注射，持續(xù)至第6天；第3天開始，血管鈣化模型組另給予皮下注射維生素D330×105U /(kg·d)持續(xù)至試驗第5天和華法令注射液150 mg/kg，每12 h序1次，背部皮下注射華法令，持續(xù)至第6天，試驗第7天造模完成。

1.5 動物分組及處理

40只大鼠隨機分為5組：假手術組，模型組，中藥低劑量組、高劑量組以及辛伐他汀組,每組8只。給藥劑量參照文獻[7]于造模結束后給予藥物干預，共12周。其中假手術組，模型組給予相同體積生理鹽水灌胃，每天1次；低劑量組、高劑量組給予右歸飲蒸餾水提取物，按低劑量給予5.35 g/(kg·d),高劑量組16.05 g/(kg·d)灌胃;辛伐他汀組給予辛伐他汀水溶液混懸劑按照5.25 mg/(kg·d)灌胃[8]。于相關藥物干預第12周后，給予2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉(40 mg/kg)后開胸心臟采血并獲取主動脈到髂動脈組織。

1.6 觀察指標及方法

1.6.1 血清和血漿標本的采集

雌二醇(E2)以及總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)的檢測：采用非抗凝管獲得5 ml后，由我院檢測中心采用全自動生化儀檢測。室溫下靜置，待有血清析出時移至離心機中以3000 r/min離心10 min，分離出血清。按照相關試劑盒要求，采用酶標儀檢測血清中的TC、TG、LDL、HDL 濃度。

1.6.2 FQ-PCR檢測

NR2a、NR2b、NR1 mRNA的表達：嚴格按試劑盒說明操作。內參基因GAPDH的引物序列 GAPDH F:CACGGCAAATTCAACGGCACAGT, R:TGGGGGCATCGGCAGAAGG; NR1 的引物序F:TGTGCGGGACAACAAGCTCCA, R:ATGCCGATGCCAAAGCCGGA；NR2a 的引物序列F: GCTACGGGCAGACAGAGAAG R:GTGGTTGTCATCTGGCTCAC；NR2b引物序列F: GCTACAACACCCACGAGAAGAG R: GAGAGGGTCCACGCTTTCC。

1.7 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 各組大鼠血清血脂含量比較

結果：模型組TG下降明顯，LDL升高，與假手術組比較，有顯著性差異(P<0.05)，高劑量組能提高TG，與模型組比較，有顯著性差異(P<0.05)；低劑量組、高劑量組和辛伐他汀組LDL含量下降，與模型組比較，有顯著性差異(P<0.05)；辛伐他汀組LDL含量下降，與假手術組比較，有顯著性差異(P<0.05),結果見表1。

2.2 各組大鼠E2含量及NR mRNA表達的比較

結果：模型組E2含量下降明顯，與假手術組比較,差異明顯(P<0.05)，低劑量組、高劑量組可提高E2的含量，與模型組比較，有顯著性差異(P<0.05)；辛伐他汀組并未提高E2含量，與模型組比較，無明顯差異，結果見表2。

模型組NR2a、 NR2b 以及NR1 mRNA的表達下降明顯，與假手術組比較，有顯著性差異(P<0.01)，低劑量組、高劑量組可顯著提高NR mRNA的表達，與模型組比較，有顯著性差異(P<0.05)，與假手術組，有顯著性差異(P<0.05)；一方面說明模型大鼠NR2a、NR2b 以及NR1 mRNA表達量下降，而右歸飲中藥具有顯著上調NR2a、NR2b 以及NR1 的基因表達量并表達超過了正常水平。辛伐他汀組亦可提高模型組NR2a、NR2b以及NR1 mRNA的表達，有顯著性差異(P<0.05)，結果見表2。

表1 各組大鼠血清血脂含量比較

注：與假手術組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05。

表2 各組大鼠雌激素及NR mRNA表達的比較±s)

注：與假手術組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05。

3 討論

血管鈣化的調節(jié)因素涉及基質囊泡鈣鹽晶體成核或生長、細胞死亡(凋亡)或成骨樣細胞激活、分化(血管平滑肌細胞表型轉化)以及來自骨髓破骨細胞的激活，炎癥反應、雌激素缺乏以及血脂代謝異常等均影響其進程。正常血管表達有鈣化抑制相關物質，任何能夠觸發(fā)血管鈣化抑制劑表達不足的因素均可觸發(fā)和促進血管鈣化進程[9-10]，動脈鈣化中氧化脂質促進血管細胞向成骨細胞分化和骨礦化[11]；雌激素缺乏同時，機體產生較大的適應性變化，甲狀旁腺素、維生素-D、降鈣素等激素的分泌主要對骨組織的鈣磷代謝產生較大影響，并且觸發(fā)血管鈣化的多個啟動因子，如去卵巢大鼠雌激素缺乏低鈣攝入導致骨質疏松和動脈中層鈣化并影響骨堿性磷酸酶的活性，而高鈣攝入不影響骨堿性磷酸酶活性[12]。OPG/RANKL/RANK系統(tǒng)是成骨細胞和破骨細胞之間相互作用的信號通道，在雌激素缺乏血管鈣化中，RANKL通過調節(jié)骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2和鈣化抑制因子matrix Gla protein(MGP)表達，以及骨橋蛋白(osteopontin,OPN)促進血管鈣化的形成，并通過在受體依賴性雌激素抵消[13]?？梢姶萍に貙ρ茆}化具有重要的作用。本研究觀察到去卵巢血管鈣化模型大鼠雌激素含量明顯下降，并伴有血清甘油三酯下降。與假手術組比較P<0.05，差異明顯，而膽固醇和低密度脂蛋白變化無差異。說明血脂成分在此鈣化模型中影響不大，而雌激素的下降可能充當一定的角色。

谷氨酸信號通路中，成骨細胞代謝性受體(Metabotropic Glutamate Receptor ,mGluR)與相關磷酸酯酶C信號(PLC信號級聯(lián))[磷酸酯酶C(PLC)-胞漿鈣離子-蛋白激酶C(PKC)級聯(lián)信號]對成骨細胞生成以及成骨前體細胞分化有關[14]，mGluRs與NRs間的對話與骨組織選擇性表達NR2亞型有關，谷氨酸通過NR參與了局部骨吸收的調節(jié)[15-17]，并且通過mGluRs受體進行反饋調節(jié)[18]，另外NR活化后鈣內流激活nNOS 信號系統(tǒng)(neural nitric oxide synthase，nNOS)，并影響破骨細胞存活及破骨細胞吸收功能。NR的功能主要是由NRl和NR2亞基構成的四聚體結構有關，NRl是NR的基本亞基，是實現(xiàn)通道的功能所必須的，NR2起輔助NR形成多元化結構的作用；另外NR1、NR2a和NR2b可以組成同源二聚體，并存在于雜合NR中，在谷氨酸信號通路中，NR的激活可以上調成骨祖細胞Runx-2的表達并促使其增殖和向成骨細胞分化。對于血管中谷氨酸信號的作用研究不多，證據(jù)表明大腦血管內皮細胞中mGluR發(fā)揮作用。最初的工作只是表明腦血管內皮細胞和心肌細胞表達有mGluR的表達[19- 20]，進一步研究不但證明腦血管內皮細胞表達有I型mGluR而且具有抑制損傷引起的凋亡，通過mGluR維持膜不對稱性抑制微血栓的形成[21-23]；另外，在腦膜微血管中存在mGluR1、 mGluR2/3、 mGluR4a、mGluR5和mGluR7[24]；在小鼠原發(fā)性腦血管內皮細胞中發(fā)現(xiàn)有NR1的表達并通過原位雜交技術發(fā)現(xiàn)大腦皮質動脈有NR2C，并調節(jié)血管的舒張功能[25]；在臨床研究中，72 h內監(jiān)控血液中 NR2a/2b抗體能夠早期鑒別缺血性腦卒中(以及TIA發(fā)作)和腦出血[26]；而且血清中NR2a抗體水平與多個卒中危險因素相關并可作為腦卒中的一個預測因子[27]，mGluR5是β-catenin核錨定和調節(jié)同型半胱氨酸導致的血管內皮細胞功能障礙的主要開關[28]。本研究發(fā)現(xiàn)大鼠血管組織存在NR1、NR2a、NR2b的基因表達，在血管鈣化組織中其含量明顯降低，補腎中藥右歸飲可以提高血管鈣化模型大鼠NR1、NR2a、NR2b的基因表達水平并同時提高血清雌二醇含量(與模型組比較差異明顯，P<0.05)，而且提高甘油三酯接近正常(與模型組比較差異明顯)，而辛伐他汀組可以提高NR1、NR2a、NR2b的基因表達水平，但其不能升高血清雌二醇，進一步降低LDL的含量，與假手術組比較差異明顯(P<0.05)，這可能與右歸飲多重調節(jié)功能有關，而辛伐他汀只能單一降低血脂組份。

中醫(yī)學理論認為“天癸”漸絕標志著腎虛證形成，而腎陽虛證涉及神經—內分泌—免疫以及神經—內分泌—骨代謝兩大基因調控路線的紊亂[29]。女性原發(fā)性骨質疏松患者雌激素依據(jù)腎氣虛證、腎陰虛證、腎陽虛證逐漸降低[30]，男性冠心病腎陽虛證雌二醇明顯降低[31]，表明雌激素缺乏后所表現(xiàn)的骨質疏松和冠心病等臨床證候與中醫(yī)的腎虛證密切相關。而雌激素缺乏可引起骨重建的偶聯(lián)失衡影響鈣化進程，去卵巢大鼠可以在一定程度模擬雌激素缺乏的腎陽虛證，文獻報道[29]補腎中藥可提高雌激素等性激素水平以及性腺雌激素受體含量[32-33]。本次實驗發(fā)現(xiàn)，去卵巢血管鈣化大鼠，雌激素不但下降明顯，而且補腎中藥右歸飲可以提高雌二醇并提高NR1、NR2a、NR2b的基因表達，提示右歸飲對于腎虛血管鈣化病變具有一定的作用，在一定程度上驗證了腎主骨生髓的理論，與文獻報道類似。眾所周知，雌激素缺乏會導致高代謝骨量丟失從而誘發(fā)骨質疏松，同時也發(fā)現(xiàn)雌激素缺乏大量并存血管鈣化的現(xiàn)象，并與冠心病相關[34]，這種現(xiàn)象尚不能用用“骨生長漂移學說”合理解釋。因此，本實驗推測，作為異位組織骨形成再現(xiàn)的血管鈣化，應該存在一個更加精細的鈣沉積平衡紊亂的適應性調節(jié)，這也許跟有谷氨酸信號通路中NR1與NR2a/NR2b形成相關聚合體的改變有關，這有待于進一步的原位雜交定位實驗來驗證。

[1] Demer LL, Tintut Y. The leading edge of vascular calcification[J].Trends Cardiovasc Med，2015，25(4):275-277.

[2] Abedin M, Tintut Y, Demer LL.Vascular calcification: mechanisms and clinical ramifications[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol，2004，24(7):1161-1170.

[3] Hjortnaes J, Butcher J, Figueiredo JL,et al. Arterial and aortic valve calcification inversely correlates with osteoporotic bone remodelling: a role for inflammation[J].Eur Heart J,2010,31(16):1975-1984.

[4] Spencer GJ, McGrath CJ, Genever PG. Current perspectives on NMDA-type glutamate signalling in bone[J].Int J Biochem Cell Biol, 2007,39(6):1089-1104.

[5] Robert W. Cowan, Eric P. Seidlitz, Gurmit Singh. Glutamate Signaling in Healthy and Diseased Bone[J].Front Endocrinol (Lausanne),2012,3:89.

[6] 李寰，武勝昔，賈國良，等.維生素D3和華法令誘導的大鼠動脈鈣化模型特點[J].中國臨床康復，2005，9(11)：120-122.

[7] 徐叔云.藥理實驗方法[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2002:203-204.

[8] 盧維晟，王一塵，方根強，等.高鈣攝入和辛伐他汀對大鼠主動脈和骨組織脂、鈣代謝的影響[J].心臟雜志，2006，18(1)：43-47.

[9] Weissen-Plenz G,Nitschke Y,Rutsch F.Mechanisms of arterial calcification: spotlight on the inhibitors[J]. Advances in Clinical Chemistry,2008(46):263-293.

[10] Rutsch F,Terkeltaub R.Deficiencies of physiologic calcification inhibitors and low-grade inflammation in arterial calcification: lessons for cartilage calcification[J].Joint Bone Spine,2005, 72(2):110-118.

[11] Demer LL, Tintut Y, Parhami F.Novel mechanisms in accelerated vascular calcification in renal disease patients[J].Curr Opin Nephrol Hypertens,2002,11(4):437-443.

[12] Agata U, Park JH, Hattori S, et al.The effect of different amounts of calcium intake on bone metabolism and arterial calcification in ovariectomized rats[J].J Nutr Sci Vitaminol (Tokyo),2013,59(1):29-36.

[13] Osako MK, Nakagami H, Koibuchi N, et al.Estrogen inhibits vascular calcification via vascular RANKL system: common mechanism of osteoporosis and vascular calcification[J]. Circ Res,2010,107(4):466-475.

[14] Jilka RL.Molecular and cellular mechanisms of the anabolic effect of intermittent PTH[J].Bone,2007,40(6):1434-1446.

[15] Chenu C, Serre CM, Raynal C, et al.Glutamate receptors are expressed by bone cells and are involved in bone resorption[J].Bone,1998,22(4):295-299.

[16] Espinosa L, Itzstein C, Cheynel H, et al.Active NMDA glutamate receptors are expressed by mammalian osteoclasts[J]. J Physiol,1999,518(Pt1):47-53.

[17] Itzstein C, Espinosa L, Delmas PD, et al.Specific antagonists of NMDA receptors prevent osteoclast sealing zone formation required for bone resorption[J]. Biochem Biophys Res Commun,2000,268(1):201-209.

[18] Gu Y, Publicover SJ. Expression of functional metabotropic glutamate receptors in primary cultured rat osteoblasts. Cross-talk with N-methyl-D-aspartate receptors[J]. J Biol Chem,2000,275(44):34252-34259.

[19] Krizbai IA, Deli MA, Pestenacz A, et al.Expression of glutamate receptors on cultured cerebral endothelial cells[J]. J Neurosci Res,1998,54(6):814-819.

[20] Gill SS, Pulido OM, Mueller RW, et al. Immunochemical localization of the metabotropic glutamate receptors in the rat heart[J]. Brain Res Bull,1999,48(2):143-146.

[21] Chong ZZ, Kang JQ, Maiese K. Apaf-1, Bcl-xL, Cytochrome c, and Caspase-9 Form the Critical Elements for Cerebral Vascular Protection by Erythropoietin[J]. J Cereb Blood Flow Metab,2003,23(3):320-330.

[22] Lin SH, Maiese K. Group I metabotropic glutamate receptors prevent endothelial programmed cell death independent from MAP kinase p38 activation in rat[J]. Neurosci Lett,2001,298(3):207-211.

[23] Lin SH, Maiese K. The metabotropic glutamate receptor system protects against ischemic free radical programmed cell death in rat brain endothelial cells[J]. J Cereb Blood Flow Metab,2001,21(3):262-275.

[24] Gillard SE, Tzaferis J, Tsui HC, et al.Expression of metabotropic glutamate receptors in rat meningeal and brain microvasculature and choroid plexus[J].J Comp Neurol, 2003，461(3):317-332.

[25] LeMaistre JL, Sanders SA, Stobart MJ,et al.Coactivation of NMDA receptors by glutamate and D-serine induces dilation of isolated middle cerebral arteries[J].J Cereb Blood Flow Metab,2012,32(3):537-547.

[26] Dambinova SA, Khounteev GA, Izykenova GA,et al.Blood test detecting autoantibodies to N-methyl-D-aspartate neuroreceptors for evaluation of patients with transient ischemic attack and stroke[J].Clin Chem,2003,49(10):1752-1762.

[27] Weissman JD, Khunteev GA, Heath R, et al. NR2 antibodies: risk assessment of transient ischemic attack (TIA)/stroke in patients with history of isolated and multiple cerebrovascular events[J].J Neurol Sci,2011,300(1-2):97-102.

[28] Beard RS Jr,Reynolds JJ,Bearden SE.Metabotropic glutamate receptor 5 mediates phosphorylation of vascular endothelial cadherin and nuclear localization of β-catenin in response to homocysteine[J].Vascul Pharmacol,2012,56(3-4):159-167.

[29] 沈自尹,黃建華,陳偉華.以藥測證對腎虛和腎陽虛大鼠基因表達譜的比較研究[J].中國中西醫(yī)結合雜志,2007,27(2):135-137.

[30] 何成奇,謝薇,熊素芳，等.女性原發(fā)性骨質疏松腎虛三證與性激素變化關系的臨床研究[J].華西醫(yī)學,2003,18(1):14-15.

[31] 丘瑞香,吳國珍,金明華.性激素對腎虛患者陰陽平衡的調節(jié)作用[J].中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志,1999,5(3):46.

[32] 張新民,沈自尹,王文健,等.補益中藥對老齡雄性大鼠下丘腦神經遞質—性腺軸機能作用的研究[J].復旦學報(醫(yī)學版),1991,18(5):5-15.

[33] 邵敏,劉慶思,莊洪,等.補腎中藥對骨質疏松大鼠性激素影響的實驗研究[J].中國骨質疏松雜志,1999,5(4):23.

[34] Chen SJ, Lin CS, Lin CL, et al.Osteoporosis Is Associated With High Risk for Coronary Heart Disease: A Population-Based Cohort Study[J].Medicine (Baltimore)，2015，94(27)：e1146.

Effect of Youguiyin on NMDA Receptors Expression of Vascular Calcification in Rats with Ovaries

LI Bo1,LIU Kai2，HE Hong-cai3,XIE Ruo-lin3,SUN Hong2*

(1.TheAffiliatedHospitalofJiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330006,China; 2.TheSecondAffiliatedHospitalofHeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150001,China; 3.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330004,China)

Objective:To study the possible mechanism of Youguiyin on regulating the expression of glutamate NMDA receptors mRNA in vascular calcification in ovariectomized rats. Methods:Totally forty SD rats were randomized into a sham group,a model group,a low-dose group, a high-dose group and a simvastatin group, with 8 in each group. The artery calcification models were established by subcutaneously injecting warfarin and vitamin D3for one week; the low-dose and high-dose groups were gavaged with 5.35 g/(kg·d),16.05 g/(kg·d)concentrated solution of Youguiyin,and the simvastatin group received 5.25 mg/(kg·d)suspensions of simvastatin.The sham group and model group were given equal amount of physiological saline with totally 12 weeks.The contents of serum estradiol and lipid(including TC,TG,LDL and HDL) were detected in all groups,with the expression of glutamate NMDA receptors mRNA by FQ-PCR.Results:Compared with the sham group, the contents of estradiol and triglycerides and the expressions of NR1, NR2a,NR2b mRNA were significantly up-regulated in the model group(P<0.05),and the content of low density lipoprotein was significantly increased (P<0.05);compared with the model group, the contents of estradiol，triglyceride levels were significantly increased and the expressions of NR1, NR2a,NR2b mRNA were significantly up-regulated in the high dose group and low dose group(P<0.01).The content of LDL was significantly decreased in the high dose group and low dose group and simvastatin group.Conclusion:Youguiyin may protect the arteries by inhibiting the formation of artery calcification.Its mechanism may be relevant to enhancing estrogen levels and up-regulating the expressions of NR1,NR2a,NR2b mRNA in vascular calcification in ovariectomized rats.

Youguiyin;Vascular calcification;Ovariectomy;Ionotropic glutamate receptor

江西省自然科學基金項目(No.20114BAB205082)

黎波(1972-),男,副教授,副主任中醫(yī)師,博士,主要從事中醫(yī)藥防治動脈硬化研究工作。

孫宏*(1982-),女, 主要從事中西醫(yī)結合防治心腦血管疾病研究工作。

2015-12-11

R285.5

A

1002-2406(2016)05-0034-05

修回日期：2015-12-30