李文華，何國平，李勇

Rho激酶對急性冠脈綜合征患者左心功能的影響

李文華，何國平，李勇

（常州市武進人民醫(yī)院心內(nèi)科，江蘇 常州 213000）

目的探討Rho激酶活性對急性冠脈綜合征（ACS）患者左心功能的影響。方法入選2013年3月至2014年12月間我科收治的ACS患者180例，根據(jù)Rho激酶活性的高低分為高活性組和低活性組，隨訪12個月，對比觀察2組入院時、治療結(jié)束出院后3和12個月Rho激酶活性、氨基末端腦鈉肽前體（NT?proBNP）水平和左心功能指標的差異，評價Rho激酶對ACS患者左心功能的影響以及對治療結(jié)束后12個月ACS患者左心功能的預(yù)測價值。結(jié)果隨訪12個月時，高活性組Rho激酶和NT?proBNP水平明顯高于低活性組（P＜0.05）。高活性組左房內(nèi)徑、左室舒張末期內(nèi)徑值明顯高于低活性組（P＜0.05），左室射血分數(shù)和心臟指數(shù)明顯低于低活性組（P＜0.05）。相關(guān)性分析顯示，Rho激酶與NT?proBNP呈正相關(guān)（r=0.685，P＜0.01）。logistic回歸分析顯示，Rho激酶活性是影響ACS患者治療結(jié)束后12個月左心功能的獨立預(yù)測因子（P＜0.05）。結(jié)論Rho激酶與NT?proBNP呈正相關(guān)，可作為評價ACS患者左心功能的一項可靠指標。Rho激酶是ACS患者治療結(jié)束后12個月左心功能的獨立預(yù)測因子。

Rho激酶；急性冠脈綜合征；氨基末端腦鈉肽前體；心臟指數(shù)

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急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）包括不穩(wěn)定型心絞痛、ST段抬高型心肌梗死和非ST段抬高型心肌梗死，斑塊破裂和血栓形成是其主要病理生理基礎(chǔ)［1］。ACS患者中有相當(dāng)一部分出現(xiàn)心臟進行性擴大，最終演變成心力衰竭，研究發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激損傷、炎性反應(yīng)在這個過程中可能起著非常重要的作用［2］。最近研究［3］發(fā)現(xiàn)，Rho激酶活性在ACS患者中明顯升高，是一個與ACS相關(guān)的炎性因子，可作為ACS患者預(yù)后的獨立預(yù)測因子。另有研究［4］顯示慢性心力衰竭患者中Rho激酶活性亦明顯升高，提示Rho激酶可能在心衰的病理生理進程中起了一定的作用，日后可能成為心功能不全的新的治療靶點［5］。本研究通過觀察Rho激酶對ACS患者左心功能的影響，探討Rho激酶在心衰發(fā)生發(fā)展中的作用機制。

1　材料與方法

1.1研究對象及分組

入選我科2013年3月至2014年12月間收治的ACS患者180例，其中男117例，女63例，年齡35～82歲，平均年齡（60.83±9.18）歲；包括不穩(wěn)定型心絞痛58例，急性ST段抬高型心肌梗死69例，非ST段抬高型心肌梗死53例，均符合2013年美國心臟病學(xué)會和美國心臟協(xié)會制定的ACS診斷標準［6］。所有入選的患者根據(jù)Rho激酶的活性高低，以中位數(shù)2.65為界，分為高活性組（≥2.65，n=98）和低活性組（＜2.65，n=82）。排除標準：心臟瓣膜病、先天性心臟病、病毒性心肌炎、心肌病、慢性肝腎功能不全、顱腦外傷以及腫瘤患者。本研究征得患者本人同意，并簽訂知情同意書。

1.2研究方法

入選患者均于入院后當(dāng)天或次日取清晨空腹外周靜脈血行肝腎功能、血脂、血常規(guī)等指標檢測。

1.2.1Rho激酶活性測定：用磷酸化MYPT1蛋白表達來表示Rho激酶活性。取外周空腹靜脈血10 mL，使用RosettSep T細胞提取試劑盒（美國Stem Cell Technologies）分離T細胞。用RPMI 1640培養(yǎng)液和10 μmol/L Rho激酶抑制劑Y27632處理分離的T細胞（美國Chemicon）。應(yīng)用細胞蛋白提取試劑盒（上海愛博生物）提取細胞蛋白后，進行凝膠電泳，再將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至醋酸纖維膜上，將膜在4℃下與不同濃度Ⅰ抗和β?actin孵育過夜，與Ⅱ抗孵育2 h（室溫下），采用TBST洗膜后顯影，進行圖像分析，計算出吸光度值。采用免疫印跡法檢測磷酸化MYPT1蛋白表達，以磷酸化MYPT1 A/β?actin之比表示Rho激酶活性。

1.2.2血漿氨基末端腦鈉肽前體（N?terminal pro?brain natriuretic peptide，NT?proBNP）水平的測定：血漿NT?proBNP采用ELISA方法進行測定，試劑盒購自杭州普望生物技術(shù)有限公司。

1.2.3臨床治療措施：所有入選的ACS患者均予以冠心病二級預(yù)防，包括拜阿司匹林、氯吡格雷、瑞舒伐他汀，若無禁忌加用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、β受體阻滯劑，若患者血壓低于90/60 mmHg或存在明顯左心功能不全（NYHA心功能分級在Ⅲ～Ⅳ級以上），在血壓穩(wěn)定且心功能改善后加用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑及β受體阻滯劑。所有患者均經(jīng)冠脈造影證實冠脈存在單支以上嚴重病變，需行血運重建，并按病變特點植入藥物洗脫支架。

1.2.4臨床隨訪：分別于入院時、治療結(jié)束出院后3和12個月行心臟超聲檢查，分別記錄左房內(nèi)徑（left atrial diameter，LAD）、左室舒張末期內(nèi)徑（left ven?tricular end diastolic diameter，LVEDD）、左室射血分數(shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）、心臟指數(shù)（cardiac index，CI）等指標。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件包，計量資料用x±s表示，采用t檢驗進行比較；組間比較采用獨立樣本t檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。影響左心功能的相關(guān)危險因素分析采用logistic回歸分析。均采用雙側(cè)檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.12組一般臨床資料比較

2組患者的年齡、性別比、危險因素（糖尿病、高血壓病、高脂血癥、吸煙、肥胖）、術(shù)前肝腎功能、血脂、血紅蛋白等指標無統(tǒng)計學(xué)差異，具有可比性（P＞0.05）。高活性組和低活性組在治療結(jié)束出院后3個月的隨訪率分別為97.96%（96/98）和98.78%（81/ 82），治療結(jié)束出院后12個月的隨訪率分別為95.92%（94/98）和92.68%（76/82），2組的隨訪率無統(tǒng)計學(xué)差異。失訪的原因為心臟原因以外的死亡（腫瘤2例、車禍2例）以及患者不配合隨訪（6例）。

2.22組Rho激酶活性和NT?proBNP水平比較

入院時、治療結(jié)束出院后3和12個月低活性組Rho激酶和NT?proBNP水平明顯低于高活性組（P＜0.05），見表1。

2.32組心臟超聲相關(guān)指標比較

2組入院時心臟超聲所示LAD、LVEDD、LVEF、CI等指標無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。治療結(jié)束出院后3和12個月時，高活性組LAD、LVEDD值明顯高于低活性組（P＜0.05），LVEF和CI值明顯低于低活性組（P＜0.05）。見表2。

2.4Rho激酶活性與NT?proBNP水平的相關(guān)性分析

對2組入院時、治療結(jié)束出院后3和12個月的Rho激酶活性與NT?proBNP水平進行Pearson相關(guān)分析：控制時間變量后，Rho激酶活性與NT?proBNP呈正相關(guān)（r=0.685，P＜0.01）。

2.5影響左心功能危險因素的logistic回歸分析

將年齡、性別、吸煙史、高血壓病史、糖尿病病史、肥胖、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、Rho激酶活性、血紅蛋白、肌酐作為影響ACS患者左心功能的危險因素行l(wèi)ogistic回歸，結(jié)果顯示Rho激酶活性是影響ACS患者治療結(jié)束后12個月左心功能的獨立預(yù)測因子（P=0.038）。

表1　2組不同時間Rho激酶活性和NT?proBNP水平的比較Tab.1　Comparison of Rho?kinase activity and NT?proBNP between the two groups

表2　2組不同時間左心功能的比較Tab.2　Comparison of the left ventricular function related indexes between the two groups

3　討論

Rho激酶是一個絲氨酸/蘇氨酸激酶，是Rho蛋白家族中重要成員之一，有證據(jù)顯示Rho相關(guān)的卷曲蛋白激酶在心血管疾病的病理生理中起關(guān)鍵作用，如高血壓、心肌肥厚、腦缺血、新生內(nèi)膜形成和動脈粥樣硬化。心肌肥厚是心肌對壓力或容量負荷過重的生理性代償反應(yīng)。然而，隨著時間的推移，原先的生理性代償轉(zhuǎn)變成失代償狀態(tài)，最終導(dǎo)致心力衰竭。動物實驗顯示，在成年鼠的心肌中壓力負荷過重可誘導(dǎo)Rho激酶的活化，表明Rho激酶在心肌受到機械壓力刺激后的適應(yīng)性反應(yīng)中起了關(guān)鍵性作用［7］。在快速起搏刺激誘導(dǎo)的心衰模型中，周圍血管對去甲腎上腺素等血管收縮劑反應(yīng)增強。Rho激酶抑制劑可以減輕血管收縮反應(yīng)，而這時平滑肌細胞內(nèi)Ca2+無變化，提示不通過Ca2+/鈣調(diào)蛋白起作用，Rho/Rho激酶途徑可以增加心衰患者血管收縮的反應(yīng)［8］。臨床研究發(fā)現(xiàn)慢性心力衰竭患者Rho激酶活性明顯升高，表明Rho激酶與病理性心室重構(gòu)和收縮功能障礙相關(guān)［9］。在人類心衰患者的動脈內(nèi)注入Rho激酶抑制劑（法舒地爾）可以增加前臂血流，提示心力衰竭周圍血管阻力的增加也有Rho/Rho激酶途徑的參與［10］。

ACS中，冠脈閉塞缺血以及隨后的再灌注可導(dǎo)致心肌損害，可上調(diào)缺血心肌RhoA的表達，Rho激酶活性增強。心肌梗死后左心功能的下降與Rho激酶的活化有關(guān)，可能的機制是Rho激酶活化后出現(xiàn)Rho相關(guān)的卷曲蛋白激酶靶蛋白的磷酸化，再通過多種途徑促進了心室的重構(gòu)［11］。應(yīng)用Rho激酶抑制劑可顯著抑制Rho激酶活性，減少心肌梗死面積，增強缺血后的心肌收縮功能，減少因缺血再灌注損傷導(dǎo)致的炎性因子激活釋放和心肌細胞凋亡，減輕了心肌的重構(gòu)［12］。以上信息提示Rho激酶的活性增強可對缺血心肌產(chǎn)生一系列不利影響，如抑制缺血心肌的收縮力，促進缺血心肌細胞的凋亡和心肌重構(gòu)等。

本研究發(fā)現(xiàn)，入院時2組ACS患者的LAD、LVEDD、LVEF、CI等指標無統(tǒng)計學(xué)差異，但在隨訪3個月和12個月時，與Rho激酶低活性組相比，高活性組患者的LAD、LVEDD值明顯增加，LVEF、CI值明顯下降，提示高活性組ACS患者左室出現(xiàn)顯著擴大，同時左心功能也出現(xiàn)了顯著下降。提示Rho激酶活性越高，對ACS患者的左心功能影響就越大?？紤]可能與Rho激酶通過Rho/Rho激酶途徑加劇了心肌的缺血再灌注損傷，擴大了心肌梗死的范圍，抑制了缺血心肌的功能，促進了細胞凋亡等因素有關(guān)。另外，Rho激酶活化、缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的各種炎性因子均對缺血心肌產(chǎn)生明顯影響，導(dǎo)致心肌重構(gòu)，最終出現(xiàn)心臟擴大和心力衰竭。

大量研究顯示，心室功能不全患者的NT?proB?NP含量升高，其含量與心衰的嚴重程度直接相關(guān)。心肌缺血也是NT?proBNP釋放的重要刺激因素，ACS患者血清NT?proBNP水平升高，且與冠狀動脈病變程度及心肌壞死面積相關(guān)，NT?proBNP水平能反映缺血損傷的范圍和嚴重程度［13］。有研究［4］發(fā)現(xiàn)聯(lián)合分析NT?proBNP和Rho激酶活性，可以提高對慢性心衰患者遠期死亡率的預(yù)測價值。本研究發(fā)現(xiàn)Rho激酶高活性組NT?proBNP水平明顯高于低活性組，有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），相關(guān)性分析顯示Rho激酶活性與NT?proBNP水平呈明顯正相關(guān)，我們認為Rho激酶也可作為評價ACS患者左心功能不全嚴重程度的一項可靠指標。

隨訪12個月時，Rho激酶高活性組ACS患者左心功能明顯低于低活性組，提示Rho激酶活性的高低與ACS患者治療結(jié)束后12個月的左心功能相關(guān)。將年齡、性別、吸煙史、高血壓病史、糖尿病病史、肥胖、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、Rho激酶活性、血紅蛋白、肌酐作為影響ACS患者左心功能的危險因素行l(wèi)ogistic回歸，結(jié)果顯示Rho激酶活性是影響ACS患者12個月左心功能的獨立預(yù)測因子（P＜0.05），即Rho激酶活性對ACS患者治療結(jié)束后12個月的左心功能具有重要的預(yù)測價值。分析原因可能為Rho激酶活性越高，對缺血心肌的抑制作用和促凋亡作用就越強，增加外周血管收縮反應(yīng)和外周血管阻力，心肌負荷過重，以及缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的各種炎性因子激活等綜合作用，導(dǎo)致了ACS患者左室重構(gòu)和左心功能惡化。

本研究入選的病例數(shù)仍較少，且局限于ACS患者，有部分失訪，可能對統(tǒng)計結(jié)果有一定的影響。另外，本研究為單中心研究，病例均來自常武地區(qū)的漢族人群，不能排除有區(qū)域和種族差異。擴大研究范圍、增加病例數(shù)和延長隨訪時間將使研究結(jié)果更有說服力，期望有更大規(guī)模的、多中心、隨機對照研究來驗證本研究的結(jié)論。

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（編輯陳姜）

Influence of Rho?kinase on Left Heart Function in Patients with Acute Coronary Syndrome

LI Wenhua，HE Guoping，LI Yong
（Department of Cardiology，Changzhou Wujin People′s Hospital，Changzhou 213000，China）

ObjectiveTo explore the influence of Rho?kinase activity on left heart function in patients with acute coronary syndrome（ACS）. MethodsA total of 180 patients with ACS，according to the level of Rho?kinase activity，were enrolled for the study and divided into highly reac?tive group and lowly reactive group.The changes of Rho?kinase activity，N?terminal pro?B?type natriuretic peptide（NT?proBNP）and left heart functionweredetectedineachgroup.TheinfluenceofRho?kinaseactivityonleftheartfunctionwithin 12monthswasanalyzed.ResultsTheRho?kinase activity and NT?proBNP were significantly higher in highly reactive group compared with lowly reactive group（P＜0.05）.At 12?month fol?low?up，the measurements of left ventricular end diastolic diameter and left atrial diameter in highly activity group were significantly larger than those in lowly activity group（P＜0.05）.The left ventricular ejection fraction and cardiac index were significantly smaller than those in lowly activi?ty group（P＜0.05）.There was positive correlation between Rho?kinase activity and NT?proBNP.The logistic regression analysis displayed that Rho?kinase activity is an independent risk factor which may predict the left heart function of ACS patients within 12 months after admission.Con?clusionRho?kinase could be a reliable parameter for evaluating the severity of left heart function in ACS patients，which is also an independent predictive biomarker of left heart function in ACS patients within 12 months after admission.

Rho?kinase；acute coronary syndrome；N?terminal pro?B?type natriuretic peptide；cardiac index

R541.4

A

0258-4646（2016）09-0809-04

10.12007/j.issn.0258?4646.2016.09.010

常州市武進發(fā)展科技基金（WS201320）

李文華（1979-），男，副主任醫(yī)師，碩士. E-mail：64641233@qq.com

2016-02-23

網(wǎng)絡(luò)出版時間：