顧星，姚少姿，皮佳鑫，劉博纓，韓煦，劉志東

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，現(xiàn)代中藥發(fā)現(xiàn)與制劑技術(shù)教育部工程研究中心，天津300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室－省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，天津300193）

·中藥研究·

基于Ussing Chamber技術(shù)的紅景天苷大鼠腸黏膜透過(guò)性研究*

顧星1，2，姚少姿1，2，皮佳鑫1，2，劉博纓1，2，韓煦1，2，劉志東1，2

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，現(xiàn)代中藥發(fā)現(xiàn)與制劑技術(shù)教育部工程研究中心，天津300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室－省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，天津300193）

[目的]研究紅景天苷在大鼠離體腸黏膜中的透過(guò)情況。[方法]采用Ussing Chamber技術(shù)，考察不同濃度紅景天苷于大鼠腸黏膜透過(guò)情況，并考察維拉帕米（Ver）和十二烷基硫酸鈉（SDS）對(duì)紅景天苷大鼠腸黏膜透過(guò)的影響。[結(jié)果]不同濃度紅景天苷在大鼠不同腸段的單位時(shí)間轉(zhuǎn)運(yùn)速率（Flux）隨濃度升高而增大，不同腸段表觀滲透系數(shù)（Papp）無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。Ver加入一定量的SDS后，紅景天苷在回腸和結(jié)腸的Papp顯著增加（P＜0.01或P＜0.05），當(dāng)SDS濃度為2 g/L時(shí)，回腸Papp增加為對(duì)照組的2.76倍。[結(jié)論]紅景天苷在大鼠全腸段均有吸收，且吸收具有濃度依賴性，以被動(dòng)吸收為主，Ver對(duì)紅景天苷大鼠各腸吸收無(wú)影響，SDS促進(jìn)了紅景天苷回腸和結(jié)腸吸收。

紅景天苷；Ussing Chamber技術(shù)；P－糖蛋白；緊密連接；維拉帕米；十二烷基硫酸鈉

紅景天苷（Salidroside）是景天科紅景天屬（Rhodiola rosea L.）紅景天的主要藥效成分之一，具有耐缺氧、抗衰老，治療糖尿病、冠心病、肺源心臟病及老年癡呆癥，降血脂、降血糖，增強(qiáng)免疫功能，抗肝纖維化等作用[1]。紅景天苷屬于酚類物質(zhì)，極性大，親水性強(qiáng)，油水分配系數(shù)較小[2]，胃腸道黏膜透過(guò)性差，口服生物利用度低，從而影響了紅景天苷的療效充分發(fā)揮，限制了其廣泛應(yīng)用。對(duì)于紅景天苷的口服吸收的機(jī)制還尚不明確，可能原因有腸黏膜緊密連接的阻礙[3]、主動(dòng)外排作用[4]等。Ussing Chamber技術(shù)早期用于研究上皮組織的離子轉(zhuǎn)運(yùn)，目前，其應(yīng)用主要集中在藥學(xué)領(lǐng)域，具有快捷、簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，能在離體情況下模擬胃腸道生理環(huán)境，通過(guò)監(jiān)測(cè)組織的電生理變化，比較真實(shí)地反映上皮細(xì)胞在體內(nèi)的實(shí)時(shí)狀態(tài)，常用于藥物的滲透性和轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的研究[5]。本實(shí)驗(yàn)采用Ussing Chamber技術(shù)，以紅景天苷為模型藥物，初步研究紅景天苷在大鼠腸黏膜中的透過(guò)情況，為紅景天苷的進(jìn)一步開發(fā)利用提供一定理論依據(jù)。

1　儀器與材料

1.1實(shí)驗(yàn)儀器Ussing Chamber儀器（美國(guó)生理儀器公司，信號(hào)采集系統(tǒng)為ADInstruments Pty Ltd，數(shù)據(jù)處理軟件為L(zhǎng)abChart7.2）；超高效液相－質(zhì)譜/質(zhì)譜（UPLC－MS/MS，Agilent 1690型UPLC色譜儀，Agilent 6460 Triple Quad LC/MS型三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀）；DKB－501A型水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；臺(tái)式通用冷凍離心機(jī)（美國(guó)Thermo Fisher公司）；XP205電子天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）；ALC－110.4電子天平（德國(guó)ACCULAB公司）；Milli－Q超純水系統(tǒng)（美國(guó)Millipore公司）。

1.2實(shí)驗(yàn)材料紅景天苷（Salidroside/Sal，中新藥業(yè)，批號(hào)：W16－1－3，純度≥98.0%）；維拉帕米（Verapamil/Ver，Sigma，MDL No.：MFCD00055208，純度≥99.0%）；十二烷基硫酸鈉（SDS）、二水磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）、無(wú)水氯化鈣（CaCl2）、氯化鈉（NaCl分析純）、氯化鉀（KCl）、碳酸氫鈉（NaHCO3）、六水氯化鎂（MgCl2·6H2O）和葡萄糖（D－glucose）均為分析純。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康SD大鼠，雄性，大鼠體質(zhì)量250～300 g，購(gòu)買自中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK－（軍）2014－0001。相關(guān)研究遵照動(dòng)物實(shí)驗(yàn)原則進(jìn)行。

2　方法與結(jié)果

2.1溶液配制

2.1.1Krebs－Ringe（rK－R）溶液及K－R腸液的配制

稱取CaCl2：2.78 g，KCl：3.51 g，MgCl·26H2O：2.44 g，NaH2PO4·2H2O：1.44 g置于燒杯中，加去離子水500 mL充分溶解，即得儲(chǔ)備液；稱取NaCl：6.84 g，NaHCO3：2.10 g，D-glucose：1.98 g置于1 000 mL容量瓶中，加入適量去離子水充分溶解，加入儲(chǔ)備液50 mL，以去離子水定容搖勻，再通入混合氣體（95% O2-5%CO2）15 min，待pH值變?yōu)?.2-7.4時(shí)，即得K-R溶液。截取適宜長(zhǎng)度的大鼠腸段，用冰浴過(guò)的生理鹽水沖洗干凈后，置于K-R溶液中，于37.5℃下共孵育一段時(shí)間，即得K-R腸溶液。

2.1.2對(duì)照品溶液配制取Sal對(duì)照品，精密稱量，以K-R溶液為溶劑制備成每1 mL含2.5 mg Sal的母液。

2.1.3供試品溶液配制分別精密吸取“2.1.2”項(xiàng)下的Sal對(duì)照品母液，用K-R溶液稀釋為50、100、200、400 mg/L Sal溶液。

分別精密吸取已配制的2.5 g/L Ver溶液和“2.1.2”項(xiàng)下的Sal對(duì)照品母液，用K-R溶液稀釋為100 mg/L Sal-100 mg/L Ver、100 mg/L Sal-200 mg/L Ver溶液[6]。

分別取SDS，精密稱量，加入K-R溶液溶解，再分別精密吸取“2.1.2”項(xiàng)下的Sal對(duì)照品母液，用KR溶液稀釋為100 mg/L Sal-0.5 g/L SDS、100 mg/L Sal-1g/LSDS、100mg/LSal-2g/L SDS溶液。

2.2Ussing Chamber實(shí)驗(yàn)

2.2.1系統(tǒng)裝置準(zhǔn)備Ussing Chamber系統(tǒng)主要由以下部分組成：尤斯室、電壓電流鉗、數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)與數(shù)據(jù)分析軟件，另外有配有恒溫水浴箱、混合氣體（95%O2-5%CO2）循環(huán)系統(tǒng)等。將電極頭（由瓊脂糖、3 mol/mL KCl等組成）接入裝置，尤斯室兩邊各加入5 mL K-R溶液，將系統(tǒng)電壓和電流調(diào)零，以消除溶液和系統(tǒng)電阻對(duì)腸黏膜的影響。

2.2.2大鼠腸黏膜制備將大鼠禁食16-18 h后，斷頸處死，即刻開腹取出不同腸段。選擇十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸為考察腸段，每個(gè)腸段分別截取10-15 cm，用生理鹽水沖洗干凈，置入冰浴的K-R溶液中培養(yǎng)10 min。每個(gè)腸段剪取2-3 cm，于冰浴板上小心剝離漿膜層，將分離好的腸黏膜固定于樣本夾中即可。

2.2.3接收液收集與處理將制備好的樣本固定于尤斯室中，即刻于裝置的黏膜側(cè)和漿膜側(cè)分別加入5 mL K-R溶液，并開始采集各項(xiàng)電生理指標(biāo)（鉗制電壓為5 mV，每1 min給1次電刺激，持續(xù)時(shí)間為0.2 s）。實(shí)驗(yàn)中持續(xù)通入混合氣體（95%O2-5% CO2）、并于37.5℃水浴維持腸黏膜的生物活性，平衡15-20min待大鼠腸黏膜各項(xiàng)電生理指標(biāo)穩(wěn)定后[7]，取出裝置中的K-R溶液，于黏膜側(cè)和漿膜側(cè)分別添加37.5℃水浴保溫的5 mL藥液和新鮮K-R溶液，并分別在加藥后15、30、60、90、120、150、180 min，從漿膜側(cè)取0.5 mL接收液并立即補(bǔ)加新鮮K-R溶液，將所取的接收液離心（12 000 r/min、4℃）10 min，取上清液于UPLC-MS/MS進(jìn)樣分析。

2.3分析方法建立

2.3.1液相色譜-質(zhì)譜條件液相色譜條件：色譜柱為AgilentEclipsePlusC18柱（2．1mm×50mm，1．8μm），柱溫為30℃，進(jìn)樣量3 μL，流速：0.3 mL/min。流動(dòng)相為：乙腈（A）－水（B），0-1．5 min：9%-10%A，1．5- 3 min：10%－60%A，3-4 min：60%-9%A，4-6 min：9%A。

質(zhì)譜條件為：電噴霧離子源（ESI），負(fù)離子模式，多級(jí)反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），碰撞電壓為120 V，碰撞能0 eV，霧化氣流速為13.0 L/min，霧化氣溫度為350℃，檢測(cè)離子對(duì)為299.11→299.11 m/z。

2.3.2線性關(guān)系將Sal母液以空白K-R腸溶液依次稀釋濃度梯度為23.4、45.8、93.5、187.0、374.0、748.0、1 496.0、3 740.0 μg/L，于“2.4.1”項(xiàng)下的方法進(jìn)樣分析，以濃度對(duì)峰面積做線性回歸得= 14.243X+30.318（r2＝0．999 1），表明Sal在23.4～3 740.0 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3精密度將濃度分別為46.8、187.0、1496.0μg/L的Sal溶液測(cè)定日內(nèi)精密度RSD值分別為2.86%、1.70%、0.99%，日間精密度RSD值分別為6.18%、4.74%、3.91%。表明日內(nèi)、日間精密度良好。

2.3.4穩(wěn)定性將接收液分別于0、2、4、6、8、10、12 h于“2.4.1”項(xiàng)下的方法進(jìn)樣分析。以峰面積計(jì)算RSD值為1.94%，說(shuō)明樣品在12 h之內(nèi)測(cè)定穩(wěn)定性良好。

2.4數(shù)據(jù)處理

2.4.1單位面積累積透過(guò)量（Qtn）、單位面積轉(zhuǎn)運(yùn)速率（Flux）[8]和表觀滲透系數(shù)（Papp）計(jì)算公式如下：

其中，ρtn為設(shè)計(jì)時(shí)間點(diǎn)擴(kuò)散池接收側(cè)的藥物質(zhì)量濃度；0.5和5分別表示取樣體積和加入供試液的體積（mL）；

2.4.2腸黏膜跨膜電阻統(tǒng)計(jì)從開始記錄組織電生理參數(shù)起，各通道每1 min采集得到一個(gè)電阻值，再將每一個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)與上一個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)的該段時(shí)間內(nèi)所有電阻值取平均值，作為該取樣時(shí)間點(diǎn)的電阻值（給藥前平衡時(shí)間內(nèi)平均電阻值作為取樣時(shí)間點(diǎn)零時(shí)刻的電阻值）。

2.4.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5.1大鼠腸黏膜活性研究在Ussing Chamber實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，通常以腸黏膜跨膜電阻來(lái)檢測(cè)或者評(píng)價(jià)組織完整性并反應(yīng)其活性[5]。本實(shí)驗(yàn)監(jiān)測(cè)了大鼠各離體腸段（Sal給藥濃度為100 mg/L）在180 min內(nèi)的跨膜電阻。由圖1結(jié)果可知，各腸段跨膜電阻值在一正常范圍值內(nèi)波動(dòng)；十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸的平均跨膜電阻值分別為（77.45±40.78）Ω/0.5 cm2、（82.95±48.02）Ω/0.5 cm2、（75.65±33.00）Ω/0.5 cm2、（86.67±52.26）Ω/0.5 cm2。結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)腸黏膜的生物活性較好。

圖1　十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸的電阻值（n=11）Fig.1　Resistanceofduodenum,jejunum,ileumandcolon（n=11）

2.5.2不同濃度Sal腸黏膜的透過(guò)情況本實(shí)驗(yàn)以Ussing Chamber技術(shù)，研究不同濃度的Sal溶液在大鼠腸黏膜的透過(guò)情況。Sal給藥濃度分別為50、100、200、400mg/L時(shí)，隨著濃度的增加，大鼠各個(gè)腸段（十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸）對(duì)Sal Flux顯著增加（P＜0.01）。而隨著Sal的濃度增加時(shí)，各腸段組內(nèi)的Papp差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。不同濃度下十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸總的Papp（Total）分別為（6.30±1.86）×10－6cm/s、（7.26±2.09）×10－6cm/s、（6.17±2.11）×10－6cm/s和（6.67±1.46）×10－6cm/s，組間差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。結(jié)果表明，Sal在大鼠全腸段均有吸收，無(wú)明顯的吸收窗，且Sal的腸吸收具有濃度依賴性，以被動(dòng)吸收為主。結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

表1　不同濃度Sal于大鼠各腸段的Flux（±s）Tab.1　Flux of Sal for different concentration in isolated different mesentery segments（±s）

表1　不同濃度Sal于大鼠各腸段的Flux（±s）Tab.1　Flux of Sal for different concentration in isolated different mesentery segments（±s）

注：與Sal給藥50 mg/L組比較，**P＜0.01。

Sal給藥濃度（mg/L）050 100 200 400動(dòng)物數(shù)4 4 4 4 Flux[ng/(min·cm)]十二指腸空腸回腸結(jié)腸15.88±7.8723.52±9.4218.84±6.8022.07±5.34 38.46±11.85**39.52±7.76**35.63±8.52**38.54±8.74** 78.97±19.98**74.81±15.03**70.77±21.35**81.88±22.80** 170.30±28.87**205.70±49.98**171.09±81.09**151.66±26.82**

表2　不同濃度Sal在大鼠各腸段的Papp（±s）Tab.2　Pappof Sal for different concentration in isolated different mesentery segments（±s）

表2　不同濃度Sal在大鼠各腸段的Papp（±s）Tab.2　Pappof Sal for different concentration in isolated different mesentery segments（±s）

注：不同濃度下，不同腸段之間相互比較，P＞0.05。

Sal給藥濃度（mg/L）050 100 200動(dòng)物數(shù)4 4 4 Papp（×10－6cm/s）十二指腸空腸回腸結(jié)腸5.29±2.627.80±3.126.19±2.237.37±1.78 6.27±1.936.52±1.265.58±1.196.42±1.46 6.56±1.716.21±1.235.89±1.806.57±1.77 4004 Total46.30±1.867.26±2.096.17±2.116.67±1.46 7.10±1.208.52±2.077.03±3.336.33±1.12

2.5.3Ver對(duì)Sal腸黏膜的透過(guò)影響Ver常被用作P－糖蛋白抑制劑來(lái)研究口服藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制[6，9－10]。本實(shí)驗(yàn)分別以100、200 mg/L Sal給藥50 mg/L兩個(gè)給藥濃度作為對(duì)照，考察Ver對(duì)Sal大鼠腸黏膜吸收的影響[4]。由表3結(jié)果可知，100 mg/L Ver對(duì)100、200 mg/L Sal在大鼠各腸段吸收并無(wú)顯著促進(jìn)作用（P＞0.05）。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，大鼠離體腸黏膜對(duì)Sal的吸收可能沒(méi)有P－糖蛋白的參與。

表3　Ver對(duì)Sal大鼠腸黏膜Papp的影響（±s）Tab.3　Effects of Ver on Pappof Sal in isolated different mesentery segments（±s）

表3　Ver對(duì)Sal大鼠腸黏膜Papp的影響（±s）Tab.3　Effects of Ver on Pappof Sal in isolated different mesentery segments（±s）

組別對(duì)照(100 mg/L Sal) 100 mg/L Sal－100 mg/L Ver對(duì)照(200 mg/L Sal)動(dòng)物數(shù)4 4 4 Papp（×10－6cm/s）十二指腸空腸回腸結(jié)腸6.27±1.936.52±1.265.58±1.196.42±1.46 8.08±2.195.81±0.866.78±2.397.80±3.04 6.56±1.716.21±1.235.89±1.806.57±1.77 200 mg/L Sal－100 mg/L Ver 46.96±4.154.47±1.157.73±2.518.46±1.88

2.5.4SDS對(duì)Sal腸黏膜的透過(guò)影響SDS是一種陰離子表面活性劑，屬于比較安全的口服吸收促進(jìn)劑，打開緊密連接而促進(jìn)藥物的吸收是其促滲的作用機(jī)制之一[11]。本實(shí)驗(yàn)以100 mg/L Sal作為對(duì)照，考察不同濃度的SDS（濃度分別為0.5、1、2 g/L）對(duì)Sal的大鼠腸黏膜透過(guò)性影響。在十二指腸和空腸中，加入一定濃度的SDS，其Papp無(wú)顯著增加。在回腸中，隨著加入SDS濃度的升高，Papp顯著增加，當(dāng)SDS濃度為2 g/L時(shí)，其Papp增加至15.42×10－6cm/s（P＜0.01），為對(duì)照組的2.76倍。在結(jié)腸中加入一定濃度的SDS，Papp也顯著增加（P＜0.05）。結(jié)果表明，一定濃度的SDS能夠顯著促進(jìn)Sal在回腸和結(jié)腸的吸收。見(jiàn)表4。

表4　SDS對(duì)Sal大鼠腸黏膜Papp的影響（±s）Tab.4　Effects of SDS on Pappof Sal in isolated different mesentery segments（±s）

表4　SDS對(duì)Sal大鼠腸黏膜Papp的影響（±s）Tab.4　Effects of SDS on Pappof Sal in isolated different mesentery segments（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別動(dòng)物對(duì)照(100 mg/L Sal) 100 mg/L Sal－0.5 g/L SDS 100 mg/L Sal－1 g/L SDS數(shù)4 4 4 Papp（×10－6cm/s）十二指腸空腸回腸結(jié)腸6.27±1.936.52±1.265.58±1.196.42±1.46 5.01±0.47 5.03±1.607.44±1.4110.00±0.72* 5.13±1.06 5.29±4.139.47±1.43*11.70±2.10* 100 mg/L Sal－2 g/L SDS45.10±1.02 7.95±2.71 15.42±4.82**10.00±2.27*

3　討論

3.1腸黏膜電生理及活性研究Ussing Chamber技術(shù)被國(guó)外學(xué)者譽(yù)為腸道屏障功能研究的金標(biāo)準(zhǔn)，常用于腸通透性、轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制及保護(hù)腸道屏障功能機(jī)制等方面的研究[12]，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，通過(guò)監(jiān)測(cè)腸黏膜跨膜電阻來(lái)檢測(cè)或者評(píng)價(jià)組織完整性以及反映其活性[13－14]。在Ungell等[15]利用Ussing Chamber技術(shù)的研究中，要求大鼠小腸組織的跨膜電阻不得小于70 Ω/cm2。本實(shí)驗(yàn)在180 min內(nèi)監(jiān)測(cè)到各腸段黏膜跨膜電阻始終在一定范圍內(nèi)波動(dòng)，表明腸黏膜完整且活性狀態(tài)良好[5]。而其他濃度的Sal（50、200、400 mg/L）以及加入Ver、SDS后，對(duì)腸黏膜的電阻值并無(wú)影響，各腸段的電阻值（數(shù)據(jù)未列出）均在正常范圍內(nèi)波動(dòng)。在數(shù)據(jù)處理過(guò)程中，以跨膜電阻作為參考指標(biāo)，將電阻值超出范圍的腸黏膜對(duì)應(yīng)的相關(guān)參數(shù)不納入數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為真實(shí)可靠。

3.2不同濃度Sal腸黏膜透過(guò)情況本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，各腸段對(duì)Sal均有吸收且吸收程度相當(dāng)，Sal在大鼠腸黏膜中轉(zhuǎn)運(yùn)具有濃度依賴性，主要以被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主。Watanabe等[16]以Ussing Chamber技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)Papp＞2.5×10－5cm/s時(shí)，可以認(rèn)為藥物容易被人體吸收。Sal極性較大，親水性強(qiáng)，屬于溶解性好的藥物，在本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)Sal于大鼠腸黏膜的累積百分透過(guò)率不足1%（數(shù)據(jù)未列出），按照口服藥物的生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)分類，Sal屬于高溶解性、低滲透性的Ⅲ類藥物，而按照定量生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)（QBCS）分類，由表2結(jié)果中各腸段的Papp(Total)可知，紅景天苷屬于邊界藥物（0.5＜q＜1，2×10－6＜Papp＜10－5，其中q為劑量數(shù)的倒數(shù)），對(duì)于該范圍內(nèi)的藥物，對(duì)其吸收程度與劑量數(shù)和滲透性的相關(guān)性難以作出肯定的預(yù)測(cè)[17]，仍需要廣泛而深入的研究和探討。

3.3Sal腸黏膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究口服藥物穿透小腸細(xì)胞的途徑主要是細(xì)胞內(nèi)途徑和細(xì)胞間途徑，藥物經(jīng)細(xì)胞內(nèi)途徑轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制包括被動(dòng)擴(kuò)散、外排泵參與的被動(dòng)擴(kuò)散和載體參與的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)3種；大多數(shù)難以通過(guò)細(xì)胞間途徑穿過(guò)生物膜的藥物主要通過(guò)細(xì)胞間途徑（與緊密連接相關(guān)）并以被動(dòng)擴(kuò)散的方式透過(guò)細(xì)胞膜，膜滲透性差的親水性或水溶性藥物的吸收及促進(jìn)主要與細(xì)胞間的緊密連接相關(guān)[17]。Ver是經(jīng)典的P－糖蛋白抑制劑，而本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)100 mg/L Ver對(duì)100、200 mg/L Sal在大鼠各腸段吸收并無(wú)促進(jìn)作用，表明Sal的大鼠腸吸收并沒(méi)有P－糖蛋的參與，這與李科宇[4]以Caco－2模型研究Sal透過(guò)機(jī)制的結(jié)果并不一致，這可能與選擇不同的評(píng)價(jià)模型有關(guān)，相關(guān)問(wèn)題還需深入研究。

SDS作為一種較安全的口服吸收促進(jìn)劑，有學(xué)者以Caco－2模型證明了SDS可以打開緊密連接[11]從而促進(jìn)藥物的吸收。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在十二指腸和空腸中，0.5、1、2 g/L SDS對(duì)Sal的吸收并無(wú)促進(jìn)作用；而0.5、1、2 g/L SDS能夠顯著增加大鼠回腸和結(jié)腸對(duì)Sal的吸收，這可能與SDS打開了回腸和結(jié)腸上皮細(xì)胞間的緊密連接有關(guān)。當(dāng)然，對(duì)于口服藥物在胃腸道中的轉(zhuǎn)運(yùn)是一個(gè)相當(dāng)復(fù)雜的過(guò)程，并不僅僅受單方面因素的影響，而是多方因素共同作用的結(jié)果。

總的來(lái)說(shuō)，以Ussing Chamber技術(shù)在口服藥物腸通透性和轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究中，應(yīng)用于難溶解性、低滲透性模型藥物較多[15－16，18]，并且適用性較強(qiáng)，但是對(duì)于易溶解性、低滲透性模型藥物的研究、尤其是對(duì)于轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制方面研究相對(duì)較少，其適用性還需深入研究。

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（本文編輯：高杉，滕曉東）

Study on permeabilities of Salidroside via rat mesentery mucosa by using Ussing Chamber

GU Xing1,2,YAO Shao-zi1,2,PI Jia-xin1,2,LIU Bo-ying1,2,HAN Xu1,2,LIU Zhi-dong1,2
（1.Engineering Research Center of Modern Chinese Medicine Discovery and Preparation Technique,Ministry of Education,Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China;2.Tianjin State Key Laboratory of Modern Chinese Medicine-Province and Ministry Co-established State Key Laboratory Cultivation Base,Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China）

[Objective]To investigate the permeability of salidroside in mesentery mucosa of rat ex vivo.[Methods]The Ussing Chamber was employed to investigate the ex vivo permeability in rat mesentery mucosa of salidroside with different concentrations or with the addition of verapamil and SDS.[Results]It was found that the Flux of salidroside was increased with the increasing concentration,and there was no difference(P＜0.05)in the apparent permeability coefficient(Papp)in different mesentery segments of rat.The Pappof salidroside got significantly increased in ileum and colon(P＜0.01 or P＜0.05),and reached to 2.76-fold compared with the control in ileum,when a certain amount of SDS was added in the donator side.[Conclusion]Salidroside could be slightly absorbed in all mesentery segments of rat with a passive concentration-dependent transportation.There were no effects of verapamil on permeation of salidroside,and SDS could significantly increase salidroside permeation in ileum and colon of rat.

salidroside;Ussing Chamber;P-gp;tight junction;verapamil;SDS

R285.5

A

1672-1519（2016）11－0689－05

新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃（NCET－12－1068）。

顧星（1988－），男，碩士研究生，主要從事中藥制劑研究。

劉志東，E－mail:lonerliuzd@163.com。

（2016-04-25）

10.11656/j.issn.1672-1519.2016.11.15