孫淑銀 王穎翠

(即墨市人民醫(yī)院風濕免疫科，山東 即墨 266200)

?

血清白細胞介素-37水平與類風濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病及病情進展的相關(guān)性

孫淑銀 王穎翠1

(即墨市人民醫(yī)院風濕免疫科，山東 即墨 266200)

目的 探討血清白細胞介素(IL)-37水平與類風濕關(guān)節(jié)炎(RA)發(fā)病及病情進展的相關(guān)性。方法 選擇50例RA患者(觀察組)和30例健康者(對照組)，觀察或檢測治療前后關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、關(guān)節(jié)炎活動度評分(DAS28)及血清C反應蛋白(CRP)、紅細胞沉降率(ESR)、類風濕因子(RF)和IL-37水平及IL-37 mRNA表達，并與對照組進行分析，分析血清IL-37水平與以上各指標的相關(guān)性。結(jié)果 觀察組治療前的關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)和DAS28評分均高于對照組(P<0.05)，治療后以上臨床指標均顯著改善(P<0.05)；觀察組治療前血清中CRP、ESR、RF水平均高于對照組(P<0.05)，治療后這3項實驗室指標明顯降低(P<0.05)；觀察組治療前血清IL-37水平、IL-37 mRNA表達明顯高于對照組(P<0.05)，治療后明顯較治療前降低(P<0.05)，且血清IL-37水平與以上臨床指標和實驗室指標呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 血清中IL-37與RA的發(fā)病及病情進展密切相關(guān)，其在RA病程進展過程中具有抑制炎癥的作用。

白細胞介素-37；類風濕關(guān)節(jié)炎

類風濕關(guān)節(jié)炎(RA)是以對稱性多關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的全身性自身免疫性疾病，主要累及周圍關(guān)節(jié)，可伴有關(guān)節(jié)外系統(tǒng)性損害，多數(shù)患者在發(fā)病2年內(nèi)出現(xiàn)不可逆性骨關(guān)節(jié)破壞，導致殘疾，在一定程度上影響患者的生存和生活質(zhì)量。RA的發(fā)病機制至今仍未完全明確，可能與各亞型的CD4+T細胞及其分泌細胞因子紊亂有關(guān)〔2〕。研究發(fā)現(xiàn)，關(guān)節(jié)滑膜細胞增生及炎癥細胞浸潤是該病的主要病理變化，滑膜內(nèi)異常增生的關(guān)節(jié)滑膜成纖維樣細胞(FLS)可分泌破壞軟骨和骨的白細胞介素(IL)-1、腫瘤壞死因子(TNF)-α、IL-6等多種炎性因子；又因關(guān)節(jié)內(nèi)滑膜生成侵襲性血管翳，使滑膜增厚、滲出增加，分泌多種細胞因子，進而破壞軟骨、骨和周圍組織〔3〕。大量研究表明，IL-37在RA患者滑膜襯內(nèi)層細胞高表達，具有抑制促炎癥因子、減輕炎癥反應的功能〔4，5〕。本實驗初步探討IL-37在RA患者中的表達情況及其與病情進展的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取2013年10月至2014年5月我院收治的50例RA患者為觀察組。納入標準：所有患者均滿足2010年美國風濕病學會(ACR)/歐洲抗風濕病聯(lián)盟(EULAR)RA評分標準〔6〕，排除肝腎疾病、嚴重心腦血管疾病、敗血癥、嚴重感染、惡性腫瘤、活動性結(jié)核病或結(jié)核菌素試驗陽性。男42例，女8例，年齡48～86歲，平均(56.25±11.72)歲，病程2～316個月，平均(54.85±61.12)個月。選取同期來我院健康體檢的30例健康者為對照組，男24例，女6例，年齡21～58歲，平均(45.73±11.38)歲，經(jīng)檢查無急、慢性病史、無遺傳家庭史、無腫瘤、無自身免疫性疾病。兩組在性別及年齡比較均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，具有可比性。實驗征得本院倫理委員會批準且研究對象全部簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 臨床指標和實驗室指標觀察 患者均給予對癥治療，于治療前、后檢查并記錄關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)，計算關(guān)節(jié)炎活動度評分(DAS28)，計算方法〔7〕：DAS28=0.56×關(guān)節(jié)壓痛數(shù)+0.28×關(guān)節(jié)腫脹數(shù)+0.7ln〔紅細胞沉降率(ESR)〕×1.08+0.16；用C反應蛋白(CRP)檢測試劑盒經(jīng)FIA8000免疫定量分析儀(南京普朗醫(yī)療設(shè)備有限公司提供)單向免疫擴散法檢測CRP；用自動生化分析儀(日本OLYMPUS AU5400)按乳膠凝集試劑盒(上海捷門生物技術(shù)合作公司)說明書檢測RF；用配套枸櫞酸抗凝管收集全血經(jīng)ESR-30全自動血沉儀(均由上海迅達醫(yī)療食品有限公司提供)檢測ESR。對照組按相同方法記錄或檢測以上指標。

1.2.2 血清IL-37水平的檢測 分別于治療前、治療后空腹12 h后采集外周靜脈血2 ml，注入預先加了血清分離膠的無菌促凝試管，室溫靜置2 h后3 000 r/min離心20 min，取血清待測。具體操作嚴格按照人血清IL-37 ELISA分析試劑盒(美國R&D公司)說明書進行。同時檢測對照組血清IL37水平，方法同觀察組。

1.2.3 實時定量PCR檢測IL-37 mRNA表達 分別于治療前、后空腹12 h后采集外周靜脈血2 ml，注入含EDTA的抗凝管中混勻，-80℃保存待測。RT-PCR檢測操作按說明書進行：①提取細胞：取上述外周血樣本，按試劑盒說明書提取全血中單核細胞；②提取總RNA：采用Trizol試劑盒提取總RNA，經(jīng)紫外分光光度計檢測RNA純度及濃度，以A260/A280值1.8～2.0為宜；③逆轉(zhuǎn)錄：按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作合成cDNA：RT10×Buffer 2 μl+dNTP 2 μl+MgCl24 μl+引物1 μl+逆轉(zhuǎn)錄酶0.5 μl，補充RNase Free dH2O至體積20 μl，IL-37引物由Primer Premier5.0設(shè)計軟件設(shè)計而成，上游引物：5′-CGGGATCCATGGTTCACACAAGTCCA-3′，下游引物：5′-CCCAAGCTTCTAATCGCTGACCTCACT-3′，196 bp；內(nèi)參甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)依文獻設(shè)計而得〔8〕，上游引物：5′-TGACGTGGACATCCGCAAAC-3′，下游引物：5′-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3′，204 bp；④PCR擴增：設(shè)置PCR循環(huán)條件：95℃變性10 min、95℃退火15 s、60℃延伸1 min，循環(huán)40個，共重復3次；⑤取10 μl上述PCR產(chǎn)物于2.0%瓊脂糖凝膠進行電泳50 min，用凝膠成像系統(tǒng)SC805拍照條帶的光密度，以GAPDH光密度值作為參考定量標準，以IL-37/GAPDH的比值作為IL-37 mRNA的相對表達量，取平均數(shù)進行統(tǒng)計學處理。

1.3 統(tǒng)計方法 使用SPSS17.0軟件，計量資料采用t檢驗，相關(guān)性分析用Pearson直線相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 兩組臨床指標和實驗室指標比較 治療前患者的關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、DAS28評分均高于對照組(P<0.05)，治療后患者以上指標較治療前明顯下降(P<0.05)，觀察組治療前血清CRP、ESR、RF明顯高于對照組(P<0.05)，治療后以上指標均明顯降低(P<0.05)，見表1。

表1 兩組臨床指標和實驗室指標比較±s)

與對照組比較：1)P<0.05；與治療前比較：2)P<0.05；下表同

2.2 血清IL-37水平及IL-37 mRNA表達 觀察組治療前血清中的IL-37水平及IL-37 mRNA表達顯著高于對照組(P<0.05)，治療后明顯下降(P<0.05)，見表2。

2.3 血清IL-37水平與類RA發(fā)病及病情進展的相關(guān)性 見表3。觀察組血清IL-37水平與關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、DAS28評分及CRP、ESR、RF呈正相關(guān)(P<0.05)。

表2 兩組IL-37水平及IL-37mRNA表達比較

表3 觀察組血清中IL-37水平與其他指標的相關(guān)性

3 討 論

RA是因炎癥導致肉芽組織與纖維組織增生，多數(shù)為緩慢起病，也可在短時間內(nèi)發(fā)生關(guān)節(jié)腫痛等臨床表現(xiàn)；該病主要侵犯手、腕、肩、膝等周圍關(guān)節(jié)，引起關(guān)節(jié)腫脹、疼痛，導致患者失去勞動能力甚至殘疾，也可能損害心臟、腎臟、肺臟及血液系統(tǒng)而縮短患者生存時間〔9〕。臨床上RA治療手段包括物理治療、休息、手術(shù)及藥物治療，藥物治療有糖皮質(zhì)激素、非甾體類抗炎藥(NSAIDs)、生物制劑、慢作用抗風濕藥(SAARDs)及中藥等〔10〕。因為RA發(fā)病機制復雜、病程反復、對機體危害大，故在治療上仍然缺乏有效的根治方案〔11〕。越來越多的研究者認為早期診斷和干預RA很有必要〔12〕。目前診斷RA的免疫學指標主要包括CRP、抗環(huán)瓜氨酸肽(anti-CCP)抗體、RF、ESR、抗核周因子等〔13〕，也通過它們來評估病情和療效：①在炎癥發(fā)生過程中急性相反應蛋白(CRP)由于細胞因子等因素的刺激導致其合成增加高達100～1000倍，提示著炎癥和損傷，且其增加幅度與疾病嚴重程度相關(guān)，患者在RA活動期CRP持續(xù)升高，緩解期則下降〔14，15〕；②ESR是反映炎癥的敏感指標，在RA患者中若ESR快，則患者關(guān)節(jié)腫脹、晨僵等癥狀就會嚴重，疾病的進展快、預后差，若ESR下降則提示治療有效〔16〕；③RA患者關(guān)節(jié)滑膜充血、水腫甚至軟骨破壞是因為RF與變性的IgG結(jié)合形成免疫復合物在關(guān)節(jié)滑膜等處沉積并誘發(fā)炎癥，多數(shù)觀察組血清中RF增加，且其滴度與病情嚴重程度呈正相關(guān)，故可用于判斷病情和治療效果，因其特異性較低，一般與抗-CCP抗體、ESR、CRP等其他指標聯(lián)合檢測〔17〕。IL-37是2000年在腫瘤研究過程中發(fā)現(xiàn)的IL-1家庭的成員，其基因位于人的2號染色體，因具有先天性炎癥免疫抑制劑的作用〔18〕而備受關(guān)注。經(jīng)證實，IL-37分子量最大的異構(gòu)體IL-37b在肝缺血再灌注損傷〔19〕、系統(tǒng)性紅斑狼瘡〔20〕、外源性刺激誘導的結(jié)腸炎、關(guān)節(jié)炎、胰腺炎〔21〕等多種炎癥性疾病中起保護作用。本實驗說明關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、DAS28評分、CRP、ESR、RF可以反映RA的病情變化〔22〕；治療前觀察組血清IL-37水平明顯高于對照組，可能是病理狀態(tài)下觀察組體內(nèi)的TNF等促炎癥細胞因子誘導IL-37的生成〔23，24〕，治療后觀察組IL-37較治療前明顯下降，可能生成的IL-37發(fā)揮抑炎作用控制了炎癥的惡化，而隨著炎癥的好轉(zhuǎn)，誘導生成的IL-37也減少。本研究中，經(jīng)Pearman分析，發(fā)現(xiàn)IL-37與RA的病情進展有密切關(guān)系。

綜上所述，IL-37在RA患者血清中高表達，與RA的病情變化密切相關(guān)，隨著炎癥反應嚴重而升高。同時，IL-37可抑制炎癥反應，可作為診斷和治療RA等炎癥疾病的新依據(jù)和新靶點。

1 池里群，周 彬，高文元，等.治療類風濕性關(guān)節(jié)炎常用藥物的研究進展〔J〕.中國中藥雜志，2014；39(15)：2851-8.

2 趙艷寧，楊 帆，彭 靜，等.CD4+CD25+Treg細胞在類風濕關(guān)節(jié)炎中的研究進展〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2015；15(5)：988-90.

3 Haseeb A，Haqqi TM.Immunopathogenesis of osteoarthritis〔J〕.Clin Immunol，2013；146(3)：185-96.

4 Bulau AM，Nold MF，Li SZ，etal.Role of caspase-1 in nuclear translocation of IL-37，release of the cytokine，and IL-37 inhibition of innate immune responses〔J〕.Proc Natl Acad Sci U S A，2014；111(7)：2650-5.

5 姚洪鋒，郭瑜佳，駱方軍，等.重癥急性胰腺炎小鼠IL-37的動態(tài)變化及其意義研究〔J〕.浙江中醫(yī)藥大學學報，2014；38(6)：764-9.

6 馮子彥.類風濕關(guān)節(jié)炎的診斷治療進展〔J〕.中國誤診學雜志，2012；12(2)：262-3.

7 馬 進，陳 岷，李 獲，等.中藥聯(lián)合抗風濕藥治療類風濕性關(guān)節(jié)炎活動期的臨床觀察〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2014；20(5)：192-6.

8 Long XB，Hu S，Wang N，etal.Clara cell 10-kDa protein gene transfection inhibits NF-κB activity in airway epithelial cells〔J〕.PLoS One，2012；7(4)：e35960.

9 范 蓉.類風濕關(guān)節(jié)炎的研究進展〔J〕.醫(yī)學綜述，2014；20(11)：2014-6.

10 陸柳丹，韋 嵩.中醫(yī)治療類風濕性關(guān)節(jié)炎研究進展〔J〕.遼寧中醫(yī)藥大學學報，2013；15(10)：86-8.

11 黃傳兵，劉 健，諶 曦，等.新風膠囊治療類風濕性關(guān)節(jié)炎療效觀察〔J〕.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013；33(12)：1599-602.

12 曾小威.類風濕性關(guān)節(jié)炎治療及免疫分子機制研究進展〔J〕.中華實用診斷與治療雜志，2015；29(11)：1044-6.

13 楊永昌，張淑艷，賈志凌，等.抗CCP抗體、類風濕因子及C反應蛋白在類風濕性關(guān)節(jié)炎診斷中的應用評價〔J〕.國際檢驗醫(yī)學雜志，2014；35(6)：781-3.

14 羅孟蘭.C反應蛋白、紅細胞沉降率及血清免疫球蛋白檢測對類風濕性關(guān)節(jié)炎患者的臨床價值〔J〕.臨床和實驗醫(yī)學雜志，2012；11(19)：1568-9.

15 萬 興，李 良，秦建華，等.C反應蛋白在活動期類風濕性關(guān)節(jié)炎患者中的臨床意義〔J〕.實用中西醫(yī)結(jié)合臨床，2012；12(3)：77-8.

16 裴秀云.血小板和紅細胞沉降率檢測在類風濕性關(guān)節(jié)炎患者中的意義〔J〕.基層醫(yī)學論壇，2013；17(5)：621-2.

17 穆銀玉，吳巧萍.聯(lián)合檢測四項指標對類風濕性關(guān)節(jié)炎早期診斷的價值〔J〕.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2012；22(2)：301-2.

18 Banchereau J，Pascual V，O′Garra A.From IL-2 to IL-37：the expanding spectrum of anti-inflammatory cytokines〔J〕.Nat Immunol，2012；13(10)：925-31.

19 Sakai N，van Sweringen H L，Belizaire R M，etal.IL-37 reduces liver inflammatory injury via effects on hepatocytes and non-parenchymal cells〔J〕.J Gastroenterol Hepatol，2012；27(10)：1609-16.

20 Song L，Qiu F，F(xiàn)an Y，etal.Glucocorticoid Regulates Interleukin-37 in Systemic Lupus Erythematossus〔J〕.J Clin Immunol，2013；33(1)：111-7.

21 李夢媛，楊星九，徐大模，等.IL-37對炎癥相關(guān)性疾病的抑制作用〔J〕.中國比較醫(yī)學雜志，2015；25(12)：75-80.

22 陳瑞林，陶 怡，邱可為，等.類風濕關(guān)節(jié)炎患者Treg細胞變化及與病情活動度的關(guān)系〔J〕.南方醫(yī)科大學學報，2012；32(6)：886-9.

23 柯慶喜，張志偉，趙付前，等.腫瘤壞死因子-α對人滑膜成纖維細胞白細胞介素-37表達的影響〔J〕.實用醫(yī)學雜志，2013；29(5)：691-3.

24 黃玲玲.類風濕關(guān)節(jié)炎達標治療的影響因素研究進展〔J〕.安徽醫(yī)科大學學報，2015；50(12)：1831-4.

〔2015-12-30修回〕

(編輯 李相軍)

王穎翠(1972-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事冠心病心衰方面的研究。

孫淑銀(1965-)，女，主治醫(yī)師，主要從事風濕免疫方面的研究。

R593.22

A

1005-9202(2016)20-5115-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.20.085

1 山東大學齊魯醫(yī)院青島院區(qū)心血管中心