王仁華

（江西農(nóng)業(yè)大學動物科學技術學院，南昌 330045）

飼料中鹽酸克倫特羅的檢測技術

王仁華

（江西農(nóng)業(yè)大學動物科學技術學院，南昌 330045）

1 鹽酸克倫特羅的理化特性及藥用機理

1.1 鹽酸克倫特羅的理化特性

克倫特羅（clenbuterol，CLB）又稱克喘素，俗稱“瘦肉精”，化學名為α-［(叔丁氨基）甲基］-4-氨基-3，5-二氯苯甲醇，是最早發(fā)現(xiàn)的具有營養(yǎng)再分配作用并被大量非法使用的β-興奮劑，分子成為：C12H18CL12N2O·HCl，分子量為313．65。它是一種選擇性β-2腎上腺素受體激動劑，白色或類似白色的結晶體粉末，無臭、味微苦，易溶于水、甲醇、乙醇，微溶于氯仿，不溶于苯和乙醚，化學性質(zhì)穩(wěn)定，加熱到172 ℃才開始分解，經(jīng)260 ℃油煎5 min才會被破壞減半?？诜笤谖改c道中迅速吸收，10～20 min起效，2～3 h血液濃度達到峰值，作用維持5 h左右，半衰期為25～39 h，消除5個半衰期（消除97%）約需5～8 d，在動物眼睛、毛發(fā)、肝、肺、腎等組織中易引起蓄積。為保證人民身體健康，避免誤食克倫特羅殘留物引發(fā)中毒，必須從禁止應用克倫特羅制造飼料添加劑，及在養(yǎng)殖場中禁用該藥補飼家畜2個關鍵環(huán)節(jié)入手，嚴格把關。

1.2 鹽酸克倫特羅的藥用機理

鹽酸克倫特羅（CLB）于1964年首次在美國合成，屬于β-類興奮劑，最初在臨床上主要用于防治人、畜支氣管哮喘和痙攣。研究證明，作為藥物CLB對呼吸、生殖、泌尿、骨骼、神經(jīng)等系統(tǒng)疾病具有較好治療作用。β-2受體主要分布于血管、支氣管、骨骼肌和平滑肌等部位，鹽酸克倫特羅與β-2受體選擇性結合后，使β-2受體出現(xiàn)興奮效應，主要表現(xiàn)為平滑肌舒張、通氣改善等。1984年美國一家公司意外發(fā)現(xiàn)將高于CLB治療劑量5～10倍以上（＞1 μg/kg·d）添加于飼料飼喂動物后，可明顯促進動物生長、改善胴體品質(zhì)、提高瘦肉率，于是歐美等國就開始將CLB廣泛用于動物飼料。20世紀80年代后期，我國部分大專院校和科研機構也開始向飼料企業(yè)和養(yǎng)殖戶推廣該物質(zhì)作為飼料添加劑使用。由于CLB能使飼料轉化率和瘦肉率提高10%～15%，骨骼肌脂肪降低8%～15%，所以養(yǎng)殖戶和飼料企業(yè)經(jīng)常把CLB俗稱為“瘦肉精”或“肉多素”，其提高瘦肉率機理在于CLB通過腎上腺素刺激腺苷酸環(huán)化酶的合成，從而升高環(huán)腺苷酸（cAMP）的濃度，提高激素敏感脂酶的活性，加快脂肪分解，使血液中游離脂肪酸（FFA）進入肌肉的量增加，進一步為蛋白質(zhì)的合成提供物質(zhì)基礎；同時，CLB作為一種植物性神經(jīng)調(diào)節(jié)劑，可降低血液中抑制肌肉興奮性的Mg2+濃度，間接促進肌肉興奮，改變細胞膜的通透性，參與機體內(nèi)的代謝調(diào)控及營養(yǎng)重分配，抑制蛋白質(zhì)的分解和脂肪的合成，進而增加氮的組織沉積。

2 動物性食品中鹽酸克倫特羅的殘留危害

長期或超標、濫用鹽酸克倫特羅，不僅降低了動物產(chǎn)品的品質(zhì)，造成重大經(jīng)濟損失，更為嚴重的是危害人體健康，影響生命質(zhì)量。

2.1 食物中毒

人類食用有CLB殘留的動物性產(chǎn)品后的中毒表現(xiàn)主要有：肌肉震顫、心悸、頭暈、頭痛、惡心、神經(jīng)過敏等。如果動物性食品中的鹽酸克倫特羅殘留嚴重，人體一次攝入的量過大，就會引起急性中毒反應。如1998年5月，香港居民因食用了內(nèi)地供應的豬內(nèi)臟，造成17人中毒；2001年1月8日和10日，浙江省杭州、嘉興、金華等地的大量市民，因食用了含鹽酸克倫特羅的豬肉而引發(fā)食物中毒；1990年西班牙有43個家庭的成員因吃了含大量鹽酸克倫特羅的牛肝而發(fā)生了集體食物中毒；2006年9月21日上海市民300多人因食用含有鹽酸克倫特羅的豬肉集體中毒。藥物殘留的危害絕大多數(shù)是通過長期接觸或在體內(nèi)逐漸蓄積而造成的。

2.2 對胃腸道菌群的影響

在身體健康的情況下，人體內(nèi)腸道所寄生的細菌多數(shù)是非致病性菌群或條件性致病菌群，只有少數(shù)是屬于致病菌。這些菌群在相互抵抗下維持著平衡，構成人體內(nèi)外的微生態(tài)環(huán)境。當長期或大量攝入動物性食品中殘留的鹽酸克倫特羅后，人體菌群失調(diào)，正常的消化道微生態(tài)環(huán)境發(fā)生紊亂，敏感菌群受到抑制，而不敏感的有害菌群乘機大量繁殖，導致感染。常見的消化道不良反應如惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等。

2.3 過敏反應和變態(tài)反應

部分人對某些抗菌藥物過敏，輕者引起皮膚瘙癢、發(fā)熱、尋麻疹、蜂窩脂炎及關節(jié)腫痛等，重者可出現(xiàn)過敏性休克、急性血管性水腫，甚至危及生命。之所以發(fā)生過敏反應，是因為殘留在食品中的鹽酸克倫特羅進入人體后致敏，產(chǎn)生抗體。當這些被致敏的個體再次接觸鹽酸克倫特羅時，就會與抗體結合生成抗原抗體復合物，發(fā)生過敏反應。

2.4 “三致”作用

“三致”即致畸、致癌、致突變，指藥物及某些化學藥品可引起人類基因突變或染色體畸變而產(chǎn)生對人類的潛在危害。當人們長期食用含鹽酸克倫特羅藥物殘留的動物性食品后，這些殘留物便會對人體產(chǎn)生有害作用，或在人體內(nèi)蓄積，最終產(chǎn)生致畸、致癌、致突變作用。

3 動物性食品中鹽酸克倫特羅的檢測方法

3.1 現(xiàn)場檢測

生豬在屠宰后可以通過肉的品質(zhì)與顏色觀察，對是否含有鹽酸克倫特羅進行判斷，如果飼喂鹽酸克倫特羅較為嚴重，肉色就相對較深、皮下肥膘非常薄幾乎不可見、后臀肌肉更加飽滿且肉質(zhì)鮮艷膈肌較厚、大腸小腸壁薄冠油少、板油薄，當豬肉具有這些性狀的話通?？蓱岩娠曃沽他}酸克倫特羅。

3.2 實驗室檢測

實驗室檢測分為酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測和色譜分析法。色譜分析法又包括：高效液相色譜儀（HPLC）和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS），其中GC-MS為確證法。但這2種方法比較復雜、耗時，而且檢測成本較高，會浪費大量的人力物力。而ELISA具有特異性高、靈敏度高、穩(wěn)定性好、操作簡單，并可同時對大批量樣品進行快速檢測的特點，目前廣泛應用于食品中獸藥、毒素檢測的初篩。

4 鹽酸克倫特羅檢測技術發(fā)展趨勢

找到一種快速、準確、靈敏、無漏檢且自動化程度高的鹽酸克倫特羅檢測方法是所有檢測方法研究者的共同目標，生物傳感器技術和生物芯片可以使這種目標得以實現(xiàn)。

4.1 生物傳感器技術（BS）

生物傳感器技術（BS）是當今世界上備受關注的綜合高科技技術之一。所謂 BS即由生物活性物質(zhì)作為敏感元件，即生物識別系統(tǒng)（感受器），再配上適當?shù)膿Q能器及輸出顯示裝置所構成的分析工具。其原理為分子識別部分與被識別物質(zhì)相接觸，可發(fā)生化學變化、熱變化、光變化以及直接誘導電信號，而后利用電學測量方法進行檢測、控制及顯示輸出。酶標免疫傳感技術是酶標免疫技術與光電分析技術相結合而產(chǎn)生的一種電化學免疫分析技術，是利用生物傳感器進行免疫測定的一種實驗手段。其特點是利用酶的化學放大作用，通過測定抗原或抗體標記酶作為示蹤酶，將酶與底物反應的化學變化用換能器轉化為電信號，從而輸出待測物質(zhì)的含量。目前酶標免疫傳感技術的靈敏度可達 0．01 ng/g，而且可在幾分鐘之內(nèi)完成檢測全過程。

4.2 生物芯片技術

生物芯片的一個突出優(yōu)點是能平行快速分析上百個或數(shù)千個多態(tài)性樣品， 如農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥和獸藥殘留的檢測、微生物的檢測和動植基因突變的檢測等，都可通過生物芯片和生物傳感器來實現(xiàn)。

5 展望

檢測鹽酸克倫特羅的方法如HPLC、GC-MS的最低檢測限都在0．5 ng/g 以上，而且檢測過程煩瑣、檢測時間長、需貴重儀器、難于操作，不能實現(xiàn)現(xiàn)場檢測；ELISA法最低檢測限可達 0．05 ng/g，靈敏度和精確度都符合標準，但假陽性率高，而且也不能實現(xiàn)現(xiàn)場檢測。相信隨著科技的不斷發(fā)展，酶標免疫傳感器技術和生物芯片技術將成為檢測鹽酸克倫特羅殘留的較為理想的方法，并且從定性和定量2個方面實現(xiàn)對鹽酸克倫特羅殘留的檢測。

2015-11-28)

江西科技師范大學第九屆本科生創(chuàng)新、創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目，2015 江西省農(nóng)牧漁業(yè)科研項目。