馮賢巧，陳錦成，陳志科，蘇丹萍，賀東生*

（1．陽(yáng)江市畜牧科學(xué)研究與技術(shù)推廣中心，廣東 陽(yáng)江 529500；2．廣州市南沙區(qū)大崗鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站， 廣州 511470；3．華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，廣州510640）

乙型腦炎和豬繁殖與呼吸綜合征混合感染的診斷

馮賢巧1，陳錦成2，陳志科1，蘇丹萍3，賀東生3*

（1．陽(yáng)江市畜牧科學(xué)研究與技術(shù)推廣中心，廣東 陽(yáng)江 529500；2．廣州市南沙區(qū)大崗鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站， 廣州 511470；3．華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，廣州510640）

目前，豬場(chǎng)疫病混合感染的現(xiàn)象普遍存在，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失。2015年4月廣東省某豬場(chǎng)母豬群發(fā)生以發(fā)熱、返情、流產(chǎn)、產(chǎn)死胎為主要特征的傳染病，根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢變化并結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷方法進(jìn)行綜合診斷，最終結(jié)果顯示：導(dǎo)致該豬場(chǎng)母豬群繁殖障礙的主要病原為乙型腦炎病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒混合感染。

乙型腦炎；豬繁殖與呼吸綜合征；繁殖障礙；混合感染

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）又稱豬藍(lán)耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的豬急性傳染病，造成母豬繁殖障礙和仔豬的呼吸癥狀，具有發(fā)病快、死亡率高等特點(diǎn)。乙型腦炎是由日本乙型腦炎病毒（JEV）引起的一種主要侵害宿主中樞神經(jīng)系統(tǒng)的急性人獸共患自然疫源性傳染病，主要通過(guò)蚊蟲傳播，可造成妊娠母豬流產(chǎn)、死胎、繁殖障礙，及少數(shù)豬的神經(jīng)癥狀。由于豬只機(jī)體抵抗力下降、病原微生物抗逆性增強(qiáng)、病原種類的日趨復(fù)雜、毒株發(fā)生變異及飼養(yǎng)管理不當(dāng)?shù)纫蛩氐挠绊懀i場(chǎng)疫病混合感染的情況普遍存在，這使豬群臨床癥狀更加復(fù)雜，同時(shí)使死亡率大大提高。2015年4月廣東省某豬場(chǎng)母豬群出現(xiàn)以發(fā)熱、返情、流產(chǎn)、產(chǎn)死胎為主要特征的傳染病案例，經(jīng)臨床及實(shí)驗(yàn)室綜合診斷確診為豬繁殖與呼吸綜合征和乙型腦炎混合感染?，F(xiàn)將此次疫情介紹如下。

1 臨床癥狀及剖檢病變

2015年4月，廣東省某存欄900頭母豬的豬場(chǎng)妊娠母豬部分發(fā)病，病豬主要為一胎和二胎母豬，占70%左右。妊娠母豬主要表現(xiàn)為懷孕前期返情，中后期流產(chǎn)，臨床母豬產(chǎn)死胎和弱仔，部分母豬發(fā)熱，部分弱仔體溫升高，呼吸困難，部分仔豬震顫、神經(jīng)癥狀，最后都?xì)w于死亡，見(jiàn)圖1。

圖1 死胎與弱仔

圖2 肺部及腹股溝淋巴結(jié)病變

剖檢死胎可見(jiàn)皮下水腫，胸腹腔積液，肝、肺腫大出血，脾腎有壞死點(diǎn)，腦充血水腫，積液。剖檢死亡弱仔可見(jiàn)間質(zhì)性肺炎，出血，腹股溝淋巴結(jié)出血水腫，見(jiàn)圖2。

2 實(shí)驗(yàn)室診斷

2.1 細(xì)菌檢測(cè)

無(wú)菌采集病豬腦、肝、肺及胸腹腔積液，接種于鮮血培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基（MAC）、胰蛋白大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）上，37 ℃溫箱中培養(yǎng)24 h以上。同時(shí)將病變病料涂片進(jìn)行革蘭氏染色和瑞氏染色鏡檢。

2.2 病毒核酸檢測(cè)

選取部分死胎和病死仔豬的具有典型病變特征的腦、肺臟、淋巴結(jié)、脾臟等臟器進(jìn)行研磨處理后，利用TAKARA MiniBEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver．5．0試劑盒進(jìn)行病毒DNA和RNA的抽提，設(shè)計(jì)合成特異性的檢測(cè)引物，采用PCR和RT-PCR方法對(duì)豬2型圓環(huán)病毒（PCV2）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬瘟病毒（CSFV）、乙型腦炎病毒（JEV）、豬偽狂犬病毒（PRV）、豬細(xì)小病毒（PPV）進(jìn)行檢測(cè)。

3 結(jié)果

3.1 細(xì)菌檢測(cè)結(jié)果

經(jīng)接種培養(yǎng)，在各培養(yǎng)基上無(wú)細(xì)菌菌落生長(zhǎng)，病料涂片經(jīng)革蘭氏染色和瑞氏染色，未見(jiàn)病原菌，說(shuō)明引起該次疫情不是由細(xì)菌引起，并且無(wú)細(xì)菌的混合感染或繼發(fā)感染。

3.2 病毒核酸檢測(cè)結(jié)果

圖3 PRRSV RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

圖4 JEV RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

以提取的病料中的總病毒DNA或RNA為模板，使用PCV2、PRRSV、CSFV、JEV、PRV、PPV特異性檢測(cè)引物進(jìn)行PCR或RT-PCR反應(yīng)，結(jié)果顯示，PRRSV引物的RT-PCR擴(kuò)增出278 bp的陽(yáng)性條帶（圖3），JEV引物的RT-PCR擴(kuò)增出480 bp的陽(yáng)性條帶（圖4），均與預(yù)期的片段大小相符；而PCV2、PRV、CSFV、PPV檢測(cè)無(wú)陽(yáng)性條帶出現(xiàn)，為陰性。

4 討論

隨著我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)集約化、規(guī)模化程度的不斷提高，豬場(chǎng)各種混合感染疫情已屢見(jiàn)不鮮，加上疫病非典型化、病原變異、新發(fā)疫病等多方面的原因，給獸醫(yī)臨床的確診和防治工作增加了一定的難度，并影響著我國(guó)現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)健康快速發(fā)展。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)診斷及病原基因檢測(cè)為疫病的確診提供了技術(shù)支持和捷徑，尤其是豬繁殖障礙性疫病的臨床表現(xiàn)及剖檢病變有很大的相似之處，臨床的初步診斷不一定完全可靠，需要經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷才能確診。

乙型腦炎是一種自然疫源性人獸共患傳染病，主要通過(guò)蚊蟲傳播，而廣東地處亞熱帶地區(qū)，一年四季均有蚊子存在，是乙型腦炎的高發(fā)地區(qū)，疫苗是預(yù)防本病最有效的方法，免疫不確實(shí)極易引起本病的發(fā)生。豬繁殖與呼吸綜合征給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了重大的損失，由此引起的豬群免疫力低下、免疫抑制，極易造成豬群的混合感染和繼發(fā)感染。本次疫情就是在結(jié)合發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢病變的基礎(chǔ)上，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室PCR診斷結(jié)果，確診為豬乙型腦炎和豬繁殖與呼吸綜合征混合感染。

針對(duì)以上結(jié)果，我們建議豬場(chǎng)對(duì)后備豬和經(jīng)產(chǎn)豬群全群緊急免疫接種豬乙型腦炎疫苗，2周后接種豬藍(lán)耳病疫苗，疫情在2周后逐步得到控制。這提示我們平時(shí)要制定全面、科學(xué)合理的免疫程序，在每年的4月份，對(duì)豬場(chǎng)進(jìn)行乙型腦炎疫苗的全群免疫，尤其是后備公母豬；做好豬繁殖與呼吸綜合征的免疫，一年免3次。同時(shí)定期進(jìn)行免疫抗體水平監(jiān)測(cè)，提高免疫效果和豬群對(duì)疫病的抵抗力。采取一定的綜合防治措施，加強(qiáng)衛(wèi)生和飼養(yǎng)管理，嚴(yán)格控制引種和確?！叭M(jìn)全出”，這是有效防控混合感染發(fā)生的重要手段。

2016-02-08）

廣東省農(nóng)科推專項(xiàng)粵財(cái)農(nóng)［2013］185和2012廣州番禺科技局農(nóng)業(yè)項(xiàng)目資助

*通訊作者