楊志勇，趙 赫，郝建國，王穆峰

(天津市奶牛發(fā)展中心，天津 300381)

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口蹄疫二價苗對荷斯坦種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

楊志勇，趙 赫，郝建國，王穆峰

(天津市奶牛發(fā)展中心，天津 300381)

[目的]研究口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型二價滅活疫苗注射對荷斯坦種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響。[方法]2～9歲荷斯坦種公牛肌肉注射口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型二價滅活疫苗后，統(tǒng)計分析注射前半個月、注射后第一周、注射后第二周、注射后第三周和注射后第四周的射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力、凍精精子畸形率和凍精產(chǎn)量的差異性。[結(jié)果](1)2～9歲種公牛各時間段的射精量、鮮精密度、凍精活力、凍精產(chǎn)量無顯著差異(P>0.05)；注射后第一周的鮮精活力顯著低于注射前半個月和注射后第二周(P<0.05)，注射后第二周的畸形率顯著高于其他時間段(P<0.05)，其他各時間段之間無顯著差異(P>0.05)。(2)2歲種公牛，在各時間段之間無顯著差異(P>0.05)；(3)5～6歲種公牛，注射后第一周的鮮精活力顯著低于注射前半個月 (P<0.05)，注射后第二周的畸形率顯著高于其他各時間段(P<0.05)，其他各時間段差異不顯著(P>0.05)。(4)7～9歲種公牛，注射后第二周的鮮精密度顯著低于注射后第三周(P<0.05)，其他各時間段差異不顯著(P>0.05)。[結(jié)論]口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型二價滅活疫苗注射對荷斯坦種公牛射精量、凍精活力和凍精產(chǎn)量無顯著影響，對鮮精活力、鮮精密度和凍精精子畸形率有一定影響，并對不同年齡段種公牛的影響有差異性。

口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型二價滅活疫苗；種公牛；精液

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，主要感染對象為牛、羊、豬等偶蹄類家畜及野生偶蹄動物，發(fā)病率極高，傳播速度極快，往往會造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失，被國際獸疫局和聯(lián)合國糧農(nóng)組織列為A 類傳染病之首，我國將其列為一類傳染病第一位[1]。根據(jù)我國《口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范》的相關(guān)規(guī)定[2]，國家對口蹄疫實行強制免疫，免疫方法為口蹄疫疫苗注射。本文統(tǒng)計分析了口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型二價滅活疫苗注射前后2～9歲荷斯坦種公牛射精量、精液品質(zhì)和凍精產(chǎn)量的變化，從而探究口蹄疫二價苗注射對種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

數(shù)顯水浴鍋(TL402～420B，江蘇姜堰市醫(yī)療器械公司)，彩色攝像機(TK～C1481BEC，JVC JAPAN)，鏡檢加熱器(NFV52，富士平工業(yè)株式會社)，相差顯微鏡(BX41，OLYMPUS JAPAN)，密度儀(ACCUCELL，IMV FRANCE)分析天平(ER～108A，AND JAPAN)，精液二次稀釋裝置(FA～435，F(xiàn)HK JAPAN)，全自動細(xì)管精液冷凍儀(EUROTHERM 2704，IMV FRANCE)，超凈工作臺(DL～CJ～1ND～Ⅱ，北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司)，高壓滅菌器(SS～325，TOMY JAPAN)，恒溫培養(yǎng)箱(MIR～260，三洋電機株式會社)。

1.2 試驗動物

15頭體格健壯、性欲旺盛、正常進行冷凍精液生產(chǎn)的荷斯坦種公牛，年齡2～9歲，統(tǒng)一進行飼養(yǎng)、采精，自由飲水和運動。飼養(yǎng)管理參照《種公牛飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)程》(NY/T1446-2007)[3]進行。

1.3 實驗材料及處置方法

秋季，口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型二價滅活疫苗(以下稱口蹄疫二價苗)，種公牛頸部肌肉注射，成年牛2mL/頭。

1.4 精液采集、質(zhì)量檢測和冷凍精液制作

口蹄疫二價苗注射前后，嚴(yán)格按照《牛冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范》(NY/T1234-2006)[4]對種公牛進行精液采集，并對采取的精液進行質(zhì)量檢測、稀釋、冷凍和儲存。成年種公牛采精頻率為2次/周，青年種公牛1次/周。

由采精人員進行精液采集，室內(nèi)技術(shù)人員利用相差顯微鏡及相應(yīng)的顯像系統(tǒng)進行鮮精活力檢查，并通過密度儀來檢測鮮精密度，再利用分析天平稱量精液采集管和精液的重量來計算射精量。將鮮精活力達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)的精液用我站配置的專用稀釋液進行稀釋，放置4℃冷柜中平衡，并通過精液二次稀釋裝置對其進行二次稀釋。然后，進行分裝、打印、冷凍，并將凍精產(chǎn)品暫時儲存起來。待經(jīng)過型式檢驗合格后，方可儲存于相應(yīng)的液氮罐中，并放置于冷凍精液儲存庫中長期貯存。

1.5 凍精產(chǎn)品型式檢驗

嚴(yán)格按照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《牛冷凍精液》(GB 4143-2008)[5]進行，包括鮮精活力、凍精活力、凍精精子畸形率(簡稱“畸形率”，下同)等。

1.6 統(tǒng)計分析

采用統(tǒng)計軟件SPSS 19.0 One～Way ANOVA進行方差分析，并進行Duncan檢驗，各時間段數(shù)據(jù)均以“Mean±SD”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 口蹄疫二價苗對2～9歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

試驗結(jié)果見表1。從表1中我們可以看出，注射前半個月、注射后第一周、注射后第二周、注射后第三周和注射后第四周的射精量、鮮精密度、凍精活力、凍精產(chǎn)量(簡稱“產(chǎn)量”，下同)差異不顯著(P>0.05)。而注射后第一周的鮮精活力顯著低于注射前半個月和注射后第二周(P<0.05)，注射后第二周的畸形率顯著高于其他各時間段(P<0.05)，其他各時間段差異不顯著(P>0.05)。

表1 口蹄疫二價苗對2～9歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

注：表中同行數(shù)據(jù)肩注字母相同差異不顯著 (P>0.05) ， 同行數(shù)據(jù)肩注字母不同差異顯著 (P<0.05)。

2.2 口蹄疫二價苗對2歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

試驗結(jié)果見表2。從表2中我們可以看出，注射前半個月、注射后第一周、注射后第二周、注射后第三周和注射后第四周的射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力、產(chǎn)量和畸形率差異不顯著(P>0.05)。

表2 口蹄疫二價苗對2歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

注：表中同行數(shù)據(jù)肩注字母相同差異不顯著 (P>0.05) ； 同行數(shù)據(jù)肩注字母不同差異顯著 (P<0.05)

2.3 口蹄疫二價苗對5～6歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

試驗結(jié)果見表3。從表3中我們可以看出，注射前半個月、注射后第一周、注射后第二周、注射后第三周和注射后第四周的射精量、鮮精密度、凍精活力和產(chǎn)量差異不顯著(P>0.05)。而注射后第一周的鮮精活力顯著低于注射前半個月 (P<0.05)，注射后第二周的畸形率顯著高于其他各時間段(P<0.05)，其他各時間段差異不顯著(P>0.05)。

表3 口蹄疫二價苗對5～6歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

注：表中同行數(shù)據(jù)肩注字母相同差異不顯著 (P>0.05) ； 同行數(shù)據(jù)肩注字母不同差異顯著 (P<0.05)

2.4 口蹄疫二價苗對7～9歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

試驗結(jié)果見表4。從表4中我們可以看出，注射前半個月、注射后第一周、注射后第二周、注射后第三周和注射后第四周的射精量、鮮精活力、凍精活力、產(chǎn)量和畸形率差異不顯著(P>0.05)。而注射后第二周的鮮精密度顯著低于注射后第三周(P<0.05)，其他各時間段差異不顯著(P>0.05)。

表4 口蹄疫二價苗對7～9歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

注：表中同行數(shù)據(jù)肩注字母相同差異不顯著 (P>0.05) ； 同行數(shù)據(jù)肩注字母不同差異顯著 (P<0.05)

3 討論

國家對口蹄疫實行強制免疫，主要措施是口蹄疫疫苗注射，而這也是種公牛站防疫工作的重中之重。種公牛24～36月齡達(dá)到體成熟，3～6歲時是利用的最佳年齡，隨著年齡的增長，公牛的性欲與精液品質(zhì)開始下降[6]。所以，本試驗選取2～9歲荷斯坦種公牛來研究口蹄疫二價苗注射對其冷凍精液生產(chǎn)的影響，并分析了其對不同年齡段種公牛影響的差異性。

對所有試驗公牛來說，在射精量、鮮精密度、凍精活力、凍精產(chǎn)量方面差異不顯著，而注射后第一周的鮮精活力顯著降低，注射后第二周的畸形率顯著升高。這表明，口蹄疫二價苗注射后，首先導(dǎo)致鮮精活力下降，然后是畸形率升高，這種影響有先后順序，影響時間均為一周，而在其他方面無顯著影響。但對不同年齡段的試驗公牛影響又不盡相同。相同之處是對射精量、凍精活力、凍精產(chǎn)量均無顯著影響。不同之處是，2歲種公牛的其他方面也無顯著影響；5～6歲種公牛注射后第一周的鮮精活力顯著低于注射前半個月，第二周的畸形率顯著高于其他時間段，鮮精密度無顯著差異； 而7～9歲種公牛注射后第二周的鮮精密度顯著低于第三周，鮮精活力、畸形率無顯著差異。這表明，口蹄疫二價苗免疫注射對2歲種公牛精液生產(chǎn)無顯著影響。而對于7～9歲種公牛，注射后第二周鮮精密度到第三周有一個上升；雖然注射后第一周與第二周之間無統(tǒng)計學(xué)上的差異，但試驗數(shù)據(jù)平均值有下降的趨勢，也就是說鮮精密度有下降再上升的趨勢。并且，對5～6歲種公牛影響最大，首先是鮮精活力下降，然后是畸形率升高，這種影響有先后順序，但影響時間均為一周，而在其他方面無顯著影響。

綜上所述，口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型二價滅活疫苗注射對荷斯坦種公牛射精量、凍精活力和凍精產(chǎn)量無顯著影響，對鮮精活力、鮮精密度和凍精精子畸形率有一定影響，并對不同年齡段種公牛的影響有差異性。而這種影響可能與疫苗中氫氧化鋁或雙相礦物油等佐劑對動物細(xì)胞具有毒性作用有關(guān)[7]，也可能與口蹄疫疫苗免疫應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。對不同年齡段種公牛產(chǎn)生不同的影響，這可能與不同生理階段的生殖機能特點有關(guān)，其影響機理有待進一步研究。

荷斯坦牛是世界上主要的奶用牛品種，荷斯坦種公牛的后裔女兒具有優(yōu)良的產(chǎn)奶性能。由于人工授精和冷凍精液技術(shù)的普及，一頭種公牛一年可以在全國各地產(chǎn)生上萬的后代。而口蹄疫傳播速度快、發(fā)病率高，對奶牛生產(chǎn)性能危害嚴(yán)重；并且，口蹄疫病毒感染動物呼出物、唾液、糞便、尿液、乳、精液及肉和副產(chǎn)品均可帶毒，康復(fù)期動物可帶毒[2]，這導(dǎo)致種公?？谔阋咭卟〉挠绊懛秶鷮⒏鼜V、危害更加嚴(yán)重。所以，種公?？谔阋咭呙缱⑸涞瓤谔阋叻酪吖ぷ饕哺又匾?/p>

[1] 朱二勇，口蹄疫的研究進展[J].中國奶牛,2009,25(10)：40-41.

[2] 《口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范》農(nóng)醫(yī)發(fā)[2007]12號

[3] 《種公牛飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)程》(NY/T1446-2007)[4] 《牛冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范》(NY/T1234-2006)

[5] 《牛冷凍精液》(GB 4143-2008)

[6] 翁春玲,佟國軍,隋明. 影響種公牛精液品質(zhì)的因素[J].黑龍江動物繁殖,2009,17(2)：42-44.

[7] 蔣文俊,李華春,李樂等.口蹄疫疫苗研究進展[J].畜牧與獸醫(yī),2004,36 (5)：42-43.

The Effect of Foot-and-Mouth Disease Bivalent Vaccine on the Production of Frozen Semen of Holstein Bull

Yang Zhi-yong,Zhao He,Hao Jian-guo,Wang Mu-feng

(TheDiaryCattleDevelopmentCenterinTianjin,Tianjin, 300381,China)

【Objective】 The aims of this paper was to study the effect of injection of Inactivated Foot-and-Mouth Disease (type O and Asia 1) Bivalent Vaccine on the production of frozen semen of Holstein bull.【Method】 After intramuscular injecting Inactivated Foot-and-Mouth Disease (type O and Asia 1) Bivalent Vaccine into Holstein bull of 2～9 years old, the data were collected at two weeks before the injection, the first week, the second week, the third week and the fourth week after the injection, then it was analyzed about the difference of the volume per ejaculate, the sperm motility, the concentration of fresh semen, the frozon sperm motility, the abnormal frozon sperm percentage and the production of frozen semen.【Result】In Holstein bull of 2～9 years old, it had no significant difference for the volume per ejaculate, the concentration, the sperm motility and the production of frozen semen (P>0.05); the sperm motility of fresh semen of the first week after the injection was significantly lower than that of the second week and two weeks before the injection (P<0.05), and the abnormal sperm percentage was higher than that of other periods (P<0.05), but it had no significant difference in the other periods (P>0.05). In bull of 2 years old, it had no significant difference in each period (P>0.05). In bull of 5～6 years old, the sperm motility of fresh semen of the first week after the injection was significantly lower than that of two weeks before the injection (P<0.05), and the abnormal sperm percentage was higher than that of other periods (P<0.05), but it had no significant difference in the other periods (P>0.05). In bull of 7～9 years old, the concentration of fresh semen of the second week after injection was significantly lower than that of the third week (P<0.05), and it had no significant difference in the other periods (P>0.05).【Conclusion】 It had no significantly differences in the volume per ejaculate, the sperm motility and the production of frozen semen of Holstein bull when injecting the Inactivated Foot-and-Mouth Disease (type O and Asia 1) Bivalent Vaccine, but it had significantly differences in the abnormal sperm percentage of frozen semen, the sperm motility and the concentration of fresh semen in different ages.

Foot-and-Mouth Disease (type O); Inactivated Bivalent Vaccine (Asia 1); bull; semen

2016-02-10

2016-03-09

楊志勇(1980-)，男，碩士畢業(yè)，獸醫(yī)師，主要從事種公牛凍精生產(chǎn)和牛疫病防控工作

S852.5

A

1001-9111(2016)03-0030-04