盧永娟 （甘肅省定西市安定區(qū)李家堡畜牧獸醫(yī)站 743000）

小鼠各發(fā)情周期卵巢Ghrelin的表達(dá)

盧永娟 （甘肅省定西市安定區(qū)李家堡畜牧獸醫(yī)站 743000）

本研究通過免疫組織化學(xué)技術(shù)及DAB顯色技術(shù)檢測小鼠發(fā)情周期ghrelin的表達(dá)情況，以研究小鼠動(dòng)情周期卵巢中g(shù)hrelin的定位及表達(dá)規(guī)律。結(jié)果顯示，發(fā)情前期及間期ghrelin陽性細(xì)胞主要在生長卵泡中表達(dá)，而發(fā)情期開始在成熟卵泡中表達(dá)，并且黃體中也有陽性反應(yīng)，到發(fā)情后期成熟卵泡中陽性反應(yīng)明顯，主要集中于顆粒細(xì)胞和卵丘；發(fā)情間期黃體中陽性反應(yīng)最強(qiáng)?？梢?，ghrelin對動(dòng)物生殖具有重要的影響。

Ghrelin；卵巢；動(dòng)情周期；免疫組化

Ghrelin是由28個(gè)氨基酸組成的內(nèi)源性肽，屬于促生長激素分泌素受體 （GSH-R）的內(nèi)源性配體，研究發(fā)現(xiàn)，ghrelin在卵巢、睪丸中高度表達(dá)，且具有調(diào)節(jié)激素分泌的作用，而激素是調(diào)節(jié)動(dòng)物生殖發(fā)育的重要物質(zhì)，ghrelin對動(dòng)物性腺發(fā)育具有重要作用。發(fā)情周期是雌性動(dòng)物生殖發(fā)育的特殊，研究ghrelin在此階段的表達(dá)規(guī)律對闡明ghrelin調(diào)控動(dòng)物生殖發(fā)育機(jī)理至關(guān)重要[1]。本實(shí)驗(yàn)通過免疫組織化學(xué)及DAB顯色技術(shù)對小鼠整個(gè)發(fā)情周期卵巢內(nèi)ghrelin的表達(dá)進(jìn)行研究，為ghrelin在生殖系統(tǒng)中作用及ghrelin對動(dòng)情周期的調(diào)控研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

小鼠購于蘭州獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。隨機(jī)分為4組，每組3只。在室溫22℃、控光條件下 (14h光照，10h黑暗)按常規(guī)方式飼養(yǎng)。

1.2 方法

采集樣品 （根據(jù)小鼠發(fā)情的不同時(shí)期采集卵巢組織）-4%多聚甲醛固定12h-自來水沖洗10h-梯度酒精脫水-二甲苯透明-浸蠟-包埋-切片-使用S-P免疫組化進(jìn)行染色-顯色-照相。

1.3 觀察結(jié)果

通過免疫組織化學(xué)DAB棕色法呈色，免疫法陽性細(xì)胞呈棕黃色。

2 結(jié)果

結(jié)果顯示，在發(fā)情前期生長卵泡呈陽性表達(dá)，部分腔卵泡呈弱陽性，如圖A；發(fā)情期生長卵泡中免疫反應(yīng)強(qiáng)陽性，有腔卵泡中陽性反應(yīng)同發(fā)情前期，但部分顆粒細(xì)胞中出現(xiàn)陽性細(xì)胞，如圖B；發(fā)情后期主要集中于成熟卵泡及卵母細(xì)胞周圍顆粒細(xì)胞中，如圖C；發(fā)情間期成熟卵泡中無陽性細(xì)胞，而生長卵泡中陽性反應(yīng)明顯，如圖D。

圖 小鼠發(fā)情各期卵巢內(nèi)ghrelin的表達(dá)

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，小鼠卵巢整個(gè)發(fā)情周期都有g(shù)hrelin的表達(dá)，并且呈規(guī)律性變化。發(fā)情前期生長卵泡陽性免疫反應(yīng)，發(fā)情期開始在成熟卵泡中表達(dá)，到發(fā)情后期成熟卵泡中陽性反應(yīng)明顯，主要集中于顆粒細(xì)胞及卵丘；在間情期成熟卵泡中不表達(dá)，在生長卵泡中表達(dá)量比較低，在間情期黃體中g(shù)hrelin陽性反應(yīng)達(dá)到最強(qiáng)。杜晨光等發(fā)現(xiàn)，綿羊各級卵泡中均有g(shù)hrelin表達(dá)卵母細(xì)胞呈強(qiáng)陽性，這與本次研究結(jié)果相一致，不同的是，綿羊顆粒細(xì)胞及卵丘細(xì)胞陽性反應(yīng)較弱[2]。研究表明，發(fā)情周期各個(gè)階段ghrelin在下丘腦和垂體中的表達(dá)與卵巢ghrelin的表達(dá)不一致，下丘腦、垂體與卵巢ghrelin表達(dá)的差異提示，ghrelin與GnRH可能存在某種相互調(diào)節(jié)作用；小鼠各級卵泡及發(fā)情周期各階段ghrelin表達(dá)位置的變化說明，ghrelin對動(dòng)物卵泡及生殖發(fā)育具有重要調(diào)控作用。目前，物種間存在的差異還需進(jìn)一步驗(yàn)證，而且ghrelin通過何種機(jī)制調(diào)控卵泡發(fā)育及生殖的還需要進(jìn)一步研究探討。

本實(shí)驗(yàn)對小鼠卵巢發(fā)情周期各階段ghrelin進(jìn)行免疫組化定位研究表明，ghrelin在各個(gè)階段均有表達(dá)，且呈規(guī)律性變化，揭示ghrelin在生殖調(diào)控中具有潛在價(jià)值。

[1]楊靜,羅英霞,王然,等.Ghrelin在不同生理期小鼠卵巢的表達(dá)[J].農(nóng)技服務(wù),2011,28(5)：660-661.

[2]杜晨光,曹貴方.綿羊卵泡內(nèi)ghrelin的免疫組化定位[J].華北農(nóng)學(xué)報(bào),2008,23(3)：151-153.