李建偉 蒲維薇 肖樂(lè)宇

(新鄉(xiāng)市中心血站 成分科 新鄉(xiāng) 河南 453000)

?

兩種設(shè)備制備冷沉淀的效果比較

李建偉 蒲維薇 肖樂(lè)宇

(新鄉(xiāng)市中心血站 成分科 新鄉(xiāng) 河南 453000)

目的 對(duì)比分析恒溫?fù)u擺式水浴箱(CT-4T.6C型)和冷沉淀凝血因子制備儀(ZBK-LCD-A1型)制備的冷沉淀凝血因子的回收率和合格率。方法 按照CT-4T.6C型恒溫?fù)u擺式水浴箱的操作說(shuō)明書操作，隨機(jī)制備30袋冷沉淀凝血因子，共20批次。 按照Z(yǔ)BK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制備儀操作說(shuō)明書操作，隨機(jī)制備30袋冷沉淀凝血因子，共20批次。對(duì)比分析兩種設(shè)備制備的回收率和合格率。結(jié)果 采用冷沉淀凝血因子制備儀ZBK-LCD-A1所制備的冷沉淀凝血因子的回收率與合格率分別達(dá)95%、100%，明顯高于搖擺式水浴箱CT-4T.6C的75%和70%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制備儀所制備的冷沉淀凝血因子回收率及合格率高，且制備時(shí)間短，容量控制精準(zhǔn)，在制備過(guò)程中能嚴(yán)格控制融化的環(huán)境溫度、水浴溫度和時(shí)間，有效減少人為因素的影響，最大限度地獲得Ⅷ因子、纖維蛋白原，值得推廣應(yīng)用。

冷沉淀凝血因子；回收率；合格率

冷沉淀凝血因子是指采用特定的方法將保存期內(nèi)的新鮮冰凍血漿在1～6 ℃融化后，分離出大部分的血漿，并將剩余的冷不溶解物質(zhì)在1 h內(nèi)速凍呈固態(tài)的成分血[1]。由于冷沉淀中不穩(wěn)定凝血因子(Ⅷ因子)的損耗會(huì)隨著制備時(shí)間的延長(zhǎng)和溫度的升高而增加。因此，不同制備工藝和設(shè)備所制備出的冷沉淀凝血因子在質(zhì)量上存在較大的差異。良好而專業(yè)的融化設(shè)備和制備技術(shù)是保證冷沉淀凝血因子質(zhì)量的重要因素[2]。本文分別采用恒溫?fù)u擺式水浴箱(CT-4T.6C型)和冷沉淀凝血因子制備儀(ZBK-LCD-A1型)制備冷沉淀凝血因子，并對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行比較，具體如下。

1 材料和方法

1.1 儀器 6000i大容量低溫離心機(jī)(Thermo Fisher)、血漿速凍機(jī)(鄭州飛龍公司)、EPAMATIC-SL(Ⅲ)高效型全自動(dòng)全血成分分離機(jī)(德國(guó)LMB科技有限公司)、三洋低溫冷凍冰箱(日本三洋電機(jī)株式會(huì)社)、CT-4T.6C型恒溫?fù)u擺式水浴箱(美國(guó)CytoTherm公司)、ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制備儀(山東中保康)、CA-510血凝儀(希森美康醫(yī)用電子有限公司)、Ⅷ因子活性測(cè)定試劑盒(希森美康醫(yī)用電子有限公司)、纖維蛋白原測(cè)定試劑盒(希森美康醫(yī)用電子有限公司)。

1.2 原料漿的制備 采用山東威高集團(tuán)生產(chǎn)的一次性白細(xì)胞濾除五聯(lián)袋(抗凝劑CPD)采集全血400 ml，于6 h內(nèi)分離血漿。將血漿袋和空轉(zhuǎn)移袋疊加好迅速放入血漿速凍機(jī)進(jìn)行速凍，在1 h內(nèi)速凍呈固態(tài)的新鮮冰凍血漿。速凍后置入-35 ℃以下低溫冰箱中保存。實(shí)驗(yàn)期內(nèi)共計(jì)制備1 200袋原料漿。

1.3 操作方法 同時(shí)用兩種設(shè)備進(jìn)行制備，隨機(jī)從-35 ℃以下低溫冰箱中取出保存的原料漿進(jìn)行操作。(每次每種設(shè)備制備30袋，共計(jì)60袋)。

1.3.1 CT-4T.6C型恒溫?fù)u擺式水浴箱操作過(guò)程 操作前人工開(kāi)機(jī)將恒溫?fù)u擺式水浴箱中的水預(yù)冷至6℃。每次隨機(jī)將30袋血漿垂直置于恒溫(6 ℃)的循環(huán)水浴箱中，水浴箱自動(dòng)搖擺30 min后血漿開(kāi)始融化，人工使融化的血漿虹吸到空轉(zhuǎn)移袋。當(dāng)原血漿袋中剩余的白色絮狀冷不溶解物附著于冰塊上約為(25±5)ml時(shí)即成為冷沉淀。此過(guò)程約需50 min。

1.3.2 ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制備儀操作過(guò)程 根據(jù)設(shè)定時(shí)間設(shè)備自動(dòng)進(jìn)水開(kāi)機(jī)預(yù)冷。當(dāng)制備儀內(nèi)的環(huán)境溫度降至2～8 ℃、水溫降至2～6 ℃并恒定時(shí)，根據(jù)設(shè)備的智能顯示屏提示進(jìn)行操作，每次將30袋新鮮冰凍血漿逐一放入上稱重掛盒(血漿)和下稱重掛盒(空轉(zhuǎn)移袋)，血袋管路安裝于蠕動(dòng)泵及夾管閥內(nèi)。啟動(dòng)后待上稱重掛盒稱重完畢并存儲(chǔ)第一組數(shù)據(jù)后，上稱重掛盒自動(dòng)沉入水浴箱，血漿袋垂直固定浸于水浴中進(jìn)行血漿融化。新鮮冰凍血漿在2～6 ℃水浴箱內(nèi)，經(jīng)一段時(shí)間后蠕動(dòng)泵開(kāi)始工作，夾管閥打開(kāi)，管路自動(dòng)形成虹吸。融化的血漿經(jīng)虹吸流入下稱重掛盒中的空轉(zhuǎn)移袋內(nèi)，冷沉淀開(kāi)始制備。這時(shí)設(shè)備對(duì)放入下稱重掛盒中的轉(zhuǎn)移袋和在融化過(guò)程中的血漿進(jìn)行實(shí)時(shí)稱重(第二組數(shù)據(jù))；并對(duì)存儲(chǔ)的第一組數(shù)據(jù)和實(shí)時(shí)稱重的第二組數(shù)據(jù)進(jìn)行差值換算，當(dāng)差值達(dá)到設(shè)定的參考值[(25±5)ml]后，控制系統(tǒng)發(fā)送信號(hào)通知夾管閥將血漿管路夾緊閉合，使管路內(nèi)的血漿停止流動(dòng)。上稱重掛盒中附著在血漿冰塊上的白絮狀冷不溶解物即為冷沉淀。此過(guò)程約需40 min。制備完成后上稱重掛盒自動(dòng)將血漿袋從水浴箱內(nèi)提升上來(lái)，取出血漿袋(冷沉淀)和轉(zhuǎn)移袋(冷上清)進(jìn)行熱合，分別置于低溫速凍機(jī)進(jìn)行速凍并保存。

1.4 檢測(cè)指標(biāo) 將兩種設(shè)備制備的冷沉淀凝血因子從冰箱內(nèi)取出，同時(shí)置于37 ℃水浴箱中融化，待其完全融化后各取2 ml冷沉淀凝血因子，嚴(yán)格按照希森美康公司生產(chǎn)的CA-510血凝儀操作使用說(shuō)明書和纖維蛋白原測(cè)定試劑盒、Ⅷ因子活性測(cè)定試劑盒試劑說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)，采用凝血酶法檢測(cè)纖維蛋白原，采用一期法檢測(cè)Ⅷ因子。Ⅷ因子回收率=冷沉淀Ⅷ因子獲得量(IU)/原料血漿Ⅷ因子總量(IU)×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

通過(guò)兩種設(shè)備制備共計(jì)20批次1 200袋冷沉淀凝血因子。采用冷沉淀凝血因子制備儀ZBK-LCD-A1所制備的冷沉淀凝血因子的回收率與合格率分別達(dá)95%、100%，明顯高于搖擺式水浴箱CT-4T.6C的75%和70%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩種設(shè)備制備冷沉淀凝血因子的效果比較

3 討論

冷沉淀凝血因子主要富含Ⅷ因子、纖維蛋白原等活性物質(zhì)。Ⅷ因子是一種性質(zhì)不穩(wěn)定的凝血因子，在2～6 ℃水浴中制備的回收率較高，但在8 ℃以上會(huì)產(chǎn)生自融[3]。血漿在1 h內(nèi)融化所制備的冷沉淀質(zhì)量最好[4]，故冷沉淀的制備對(duì)融化溫度、融化時(shí)間(速度)及操作方法均有較高的要求。

CT-4T.6C型恒溫?fù)u擺式水浴箱的上水、排水均需人工操作，在制備時(shí)僅有一個(gè)水環(huán)境的局域溫度控制，虹吸出的血漿長(zhǎng)時(shí)間暴露在外界高溫條件下，容易引起蛋白質(zhì)等有效成分的破壞和損失；水浴箱體積小，且只能通過(guò)搖擺來(lái)達(dá)到水溫均衡和加速融化的目的，溫度交換慢，混勻不充分，影響融化速度。在搖擺過(guò)程中血袋不能始終處于垂直狀態(tài)，容易把剛剛析出未抱團(tuán)的冷沉淀物質(zhì)晃散而隨血漿被吸出，造成成品效價(jià)不足。本研究觀察到，在制備時(shí)有部分絮狀物(富含Ⅷ因子、纖維蛋白原等)會(huì)隨著融化的血漿轉(zhuǎn)移到空袋中。隨著血漿的不斷融化，轉(zhuǎn)移袋內(nèi)液體血漿中的絮狀物成分也會(huì)明顯增多[5]。這實(shí)際上是纖維蛋白原等不溶物質(zhì)未附著在冰塊上或血袋內(nèi)表面，而是隨血漿流出來(lái)，這樣極易造成終產(chǎn)品的不合格。另外，其在開(kāi)放環(huán)境下進(jìn)行制備，環(huán)境溫度不能受到良好的控制，溫度偏高，受人為因素影響較多，這些因素均能直接影響冷沉淀中Ⅷ因子、纖維蛋白原的含量和回收率。

ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制備儀具有微電腦自動(dòng)系統(tǒng)，可自動(dòng)上水、排水，并精確地將設(shè)備內(nèi)的環(huán)境溫度控制在2～8 ℃，水浴溫度控制在2～6 ℃。上稱重掛盒自動(dòng)升降確保血漿袋全部自動(dòng)垂直固定浸于水浴中，通過(guò)低溫循環(huán)水流不停作用于血漿袋以加速融化。在融化虹吸階段，血漿中的絮狀物無(wú)明顯轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，另蠕動(dòng)泵的應(yīng)用有效避免了血漿在形成虹吸過(guò)程中受人為因素的影響，這些均有利于Ⅷ因子、纖維蛋白原最大限度的收集以提高Ⅷ因子、纖維蛋白原的回收率。該設(shè)備為一鍵式智能操作，自動(dòng)化程度高，安全可靠，有效節(jié)省人力，提高工作效率。

由以上兩種設(shè)備相比可知，ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制備儀具有設(shè)備操作簡(jiǎn)便、制備時(shí)間短、容量控制精準(zhǔn)，在制備過(guò)程中能嚴(yán)格控制融化的環(huán)境溫度、水浴溫度和時(shí)間，有效減少人為因素的影響，最大限度地獲得Ⅷ因子、纖維蛋白原，回收率、合格率明顯高于CT-4T.6C型恒溫?fù)u擺式水浴箱，值得推廣應(yīng)用。

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部,中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì). GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2012.

[2] 孫森,杜濱,許雷.虹吸法制備冷沉淀的關(guān)鍵控制點(diǎn)[J].中國(guó)醫(yī)療前沿,2008 3(22):109.

[3] 高峰.臨床輸血與檢驗(yàn)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2007:139-140.

[4] 楊紹明.冷沉淀制備的關(guān)鍵點(diǎn)控制[J].贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,26(1):86.

[5] 陳峰,王麗,周華平,等.虹吸法制備冷沉淀的容量控制探討[J].中國(guó)輸血雜志,2011,24(11):974-975.

R 457.1+2

10.3969/j.issn.1004-437X.2016.10.011

2016-01-04)