李裕 黃勇 歐陽龍 高華 周汝順 曹峰 李艷平

（1湖南省獸藥飼料監(jiān)察所長(zhǎng)沙410006；2沅江市畜牧水產(chǎn)局沅江413100）

氨基酸分析儀識(shí)別魚粉中摻入蛋氨酸、賴氨酸原料一例

李裕1黃勇1歐陽龍1高華2周汝順1曹峰1李艷平1

（1湖南省獸藥飼料監(jiān)察所長(zhǎng)沙410006；2沅江市畜牧水產(chǎn)局沅江413100）

分別用酸水解、酸提取兩種方法對(duì)魚粉樣品進(jìn)行處理，氨基酸分析儀上機(jī)測(cè)定。分別測(cè)定魚粉中各氨基酸含量和可能摻入的氨基酸原料含量。發(fā)現(xiàn)一例摻有賴氨酸、蛋氨酸原料的假冒進(jìn)口魚粉。

魚粉；氨基酸；摻假

魚粉是一種重要的飼料原料。魚粉的蛋白含量高，賴氨酸、蛋氨酸等必需氨基酸含量高，礦物質(zhì)、維生素比較豐富，含有未知的促生長(zhǎng)因子，能夠增加飼料的適口性。魚粉的用量大、價(jià)格高，因此摻假現(xiàn)象屢見不鮮。摻入物五花八門，多為價(jià)格比魚粉低的增重物（石粉、蝦蟹殼粉、食鹽等）、非蛋白氮（尿素、脲醛樹脂、三聚氰胺等）、植物性蛋白（豆粕、菜粕、玉米蛋白粉等）、動(dòng)物性蛋白（羽毛粉、皮粉、肉骨粉等）。暫無在魚粉中摻入氨基酸原料進(jìn)行制假的報(bào)道。

1 材料及方法

某飼料廠家送檢魚粉樣品一份，約500克（包裝、標(biāo)簽標(biāo)示為某國(guó)進(jìn)口魚粉，蛋白65%）。

SKRAM 433D氨基酸自動(dòng)分析儀。儀器為離子色譜柱后衍生系統(tǒng)，570nm、440nm雙通道檢測(cè)器。

1.3.1 酸水解法

稱取樣品約100mg，放置水解玻璃管中。胖肚移液管加入含1‰苯酚的6mol/L鹽酸溶液15.00mL，封口后110℃水解20小時(shí)。濾紙過濾后，移取100μL水解液，真空干燥后，加入1000μL上機(jī)緩沖液重新溶解，過0.22μm針頭濾器，即得樣品上機(jī)試液。

1.3.2 酸提取法

稱取樣品約350mg，放置100mL容量瓶中。加入約60mL0.1mol/L鹽酸溶液充分振搖，定容?；靹蚝鬄V紙過濾，取1mL濾液過0.22μm針頭濾器，即得樣品上機(jī)試液。

將十七種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（100nmol/ mL）、以上兩種處理方式的樣品試液上機(jī)，外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果

圖一為十七種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖。圖二為酸水解法處理魚粉樣品的色譜圖。圖三為酸提取法魚粉樣品的色譜圖，圖中可見明顯的蛋氨酸、賴氨酸色譜峰。

圖一 十七種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)570nm譜圖

圖二 酸水解法處理魚粉樣品570nm譜圖

圖三 酸提取法處理魚粉樣品570nm譜圖

見表一。酸水解法測(cè)定結(jié)果顯示，該魚粉樣品

蛋氨酸含量為2.36%，賴氨酸為4.86%。均高于特極品魚粉的氨基酸指標(biāo)要求。酸提取法測(cè)定結(jié)果顯示，該魚粉樣品中以單個(gè)氨基酸分子形式存在的蛋氨酸含量為1.20%，賴氨酸為1.60%。而以單個(gè)氨基酸分子形式存在的其他氨基酸含量均不超過0.15%。

表一 兩種處理方法測(cè)定魚粉中氨基酸的含量

3 討論

依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB/T 19164-2003魚粉》，魚粉評(píng)級(jí)的重要指標(biāo)為賴氨酸和蛋氨酸的含量（如特級(jí)品要求賴氨酸≥4.6%，蛋氨酸≥1.7%；一級(jí)品要求賴氨酸≥4.4%，蛋氨酸≥1.5%）。近年來，隨著高效液相色譜儀、氨基酸分析儀的日益普及，氨基酸分析在魚粉質(zhì)量評(píng)定中的應(yīng)用也越來越普遍。

參考2016年3月的國(guó)內(nèi)市場(chǎng)價(jià)格情況：進(jìn)口魚粉的平均價(jià)格為12.44元/kg，98.5%賴氨酸為7.72元/kg，65%賴氨酸為4.75元/kg，固體蛋氨酸和液體蛋氨酸的平均價(jià)格分別為32.27元/kg、25.27元/kg。賴氨酸原料的價(jià)格低于進(jìn)口魚粉的價(jià)格，蛋氨酸價(jià)格偏高，但其最高添加量不超過1.5%即可達(dá)到特級(jí)品要求。因此，在摻雜魚粉、次等魚粉中加入賴氨酸、蛋氨酸原料，冒充高價(jià)優(yōu)質(zhì)魚粉，仍有較大的牟利空間。

魚粉中以單個(gè)分子形式存在的氨基酸含量不高。測(cè)定魚粉中的氨基酸，需要使用酸水解法處理，使蛋白質(zhì)肽鏈斷裂、水解，得到單個(gè)的氨基酸分子，然后上機(jī)進(jìn)行測(cè)定。而對(duì)于添加的氨基酸原料，氨基酸以單個(gè)分子形式存在，只需用稀鹽酸溶解（即酸提取法）直接上機(jī)測(cè)定。所以分別使用酸水解法和酸提取法能清楚分辨魚粉中是否摻有氨基酸原料，且能準(zhǔn)確測(cè)定出摻入的氨基酸種類及其含量。本例中，魚粉樣品的酸提取法測(cè)定結(jié)果為蛋氨酸含量1.20%、賴氨酸含量1.60%，屬于明顯的人為添加。