岳蒙蒙，趙金良，唐首杰，王 燕，趙永華

(上海海洋大學(xué) 農(nóng)業(yè)部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201306)

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性成熟前期尼羅羅非魚(yú)雌雄性別生長(zhǎng)差異與性類(lèi)固醇激素水平比較

岳蒙蒙，趙金良*，唐首杰，王 燕，趙永華

(上海海洋大學(xué) 農(nóng)業(yè)部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201306)

利用分子標(biāo)記法、醋酸洋紅壓片法、組織切片技術(shù)等方法進(jìn)行個(gè)體性別鑒定，比較了性成熟前期(0.5～4.0月齡)尼羅羅非魚(yú)雌、雄魚(yú)生長(zhǎng)差異，并檢測(cè)了2.5～4.0月齡雌、雄魚(yú)血清睪酮(T)、雌二醇(E2)激素含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雌、雄魚(yú)全長(zhǎng)、體質(zhì)量分別自3.0月齡、2.5月齡開(kāi)始出現(xiàn)差異顯著(P<0.05)。Logistic擬合全長(zhǎng)、體質(zhì)量生長(zhǎng)方程為：Lt(♀)=16.443/(1+e(2.821-1.363*t))，Lt(♂)=18.248/(1+e(2.752-1.295*t))；Wt(♀)=107.704/(1+e(5.157-1.464*t))，Wt(♂)=134.796/(1+e(5.080-1.417*t))，雌、雄魚(yú)體質(zhì)量生長(zhǎng)拐點(diǎn)分別為3.523、3.585月齡，拐點(diǎn)體質(zhì)量分別為52.352、67.398 g。雄魚(yú)全長(zhǎng)、體質(zhì)量生長(zhǎng)速度始終大于雌魚(yú)，雄魚(yú)快速增長(zhǎng)期區(qū)間長(zhǎng)度、體質(zhì)量增加量大于雌魚(yú)。2.5月齡之后，雌、雄魚(yú)E2含量差異顯著(P<0.05)，3.0月齡之后，雌、雄魚(yú)T含量差異顯著(P<0.05)，推測(cè)E2、T含量差異是引起尼羅羅非魚(yú)雌雄性別生長(zhǎng)差異的原因之一。

尼羅羅非魚(yú)；雌雄性別；性類(lèi)固醇激素

雌雄生長(zhǎng)差異是雌雄異體動(dòng)物兩性異形(sexual dimorphism)的重要表現(xiàn)之一[1]。魚(yú)類(lèi)中，兩性生長(zhǎng)差異也有不同類(lèi)型，如鲆鰈類(lèi)魚(yú)類(lèi)，一般是雌性生長(zhǎng)快于雄性[2]，而羅非魚(yú)則相反，雄性快于雌性[3]，還有一些魚(yú)類(lèi)，某一發(fā)育階段雌魚(yú)生長(zhǎng)快、另一發(fā)育階段則是雄魚(yú)生長(zhǎng)快[4-5]。由于魚(yú)類(lèi)兩性生長(zhǎng)間存在明顯差異，生產(chǎn)上常利用單性苗種養(yǎng)殖，提高養(yǎng)殖產(chǎn)量[6]。

尼羅羅非魚(yú)(Oreochromisniloticus)因生長(zhǎng)快、繁殖周期短、適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)，成為我國(guó)主要淡水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)之一。性成熟階段，尼羅羅非魚(yú)雌、雄魚(yú)生長(zhǎng)差異顯著，雄魚(yú)比雌魚(yú)生長(zhǎng)快20%～48%[3]；魚(yú)類(lèi)性別生長(zhǎng)差異可能與性腺發(fā)育、性類(lèi)固醇激素分泌水平存在某種密切關(guān)聯(lián)，但關(guān)于何時(shí)產(chǎn)生雌雄生長(zhǎng)差異及差異原因卻鮮有報(bào)道。研究表明，尼羅羅非魚(yú)性別分化約在孵化后30 d內(nèi)完成，性腺成熟約在孵化后100～130 d[7]。為此，本研究利用性別分子標(biāo)記法、性腺組織醋酸洋紅壓片法、H.E染色法、性腺及生殖孔觀察等方法，對(duì)0.5～4.0月齡尼羅羅非魚(yú)個(gè)體進(jìn)行性別鑒定，研究性成熟前雌、雄魚(yú)的生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律，及性類(lèi)固醇激素(睪酮T、雌二醇E2)含量水平。通過(guò)擬合雌、雄魚(yú)生長(zhǎng)方程、生長(zhǎng)曲線(xiàn)，分析雌、雄魚(yú)生長(zhǎng)顯著差異的時(shí)間階段，以及性類(lèi)固醇激素水平與雌、雄魚(yú)生長(zhǎng)差異間的關(guān)聯(lián)性，以期為尼羅羅非魚(yú)雌雄性別生長(zhǎng)規(guī)律提供基礎(chǔ)生物學(xué)資料，也為其合理養(yǎng)殖提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

尼羅羅非魚(yú)取自于上海海洋大學(xué)羅非魚(yú)種質(zhì)資源試驗(yàn)站，為新吉富羅非魚(yú)。選擇2015年5月30日出苗的同批魚(yú)苗在水泥池(7.7 m×3.9 m×1.3 m)中培育，養(yǎng)殖密度依苗種規(guī)格逐步調(diào)整，飼料選用寧波天邦公司羅非魚(yú)專(zhuān)用配合飼料，每日投喂兩次，時(shí)間分別為8：00、18：00。每15 d抽樣一次，每次隨機(jī)采集60尾魚(yú)。

1.2 方法

1.2.1 全長(zhǎng)、體質(zhì)量測(cè)量

對(duì)全部抽取樣本進(jìn)行常規(guī)生物學(xué)測(cè)量，用游標(biāo)卡尺測(cè)量全長(zhǎng)(精確至0.1 mm)，體質(zhì)量使用電子天平測(cè)量(精確至0.01 g)。

1.2.2 性別鑒定

分子標(biāo)記法：0.5～1.0月齡個(gè)體，剪取尾鰭保存于無(wú)水乙醇中，采用動(dòng)物組織基因組DNA快速提取試劑盒提取DNA。用微量分光光度計(jì)測(cè)定濃度并用無(wú)菌水稀釋至20 ng·μL-1，-20 ℃冰箱備用。性別分子標(biāo)記選擇參照Sun等[8]，Marker-5引物序列：Marker-5F TAAATTAATGACATTTCAGTTATG；Marker-5R CAGAAATGTAGACGCCCAGGTATC，由生工生物工程(上海)有限公司合成。PCR反應(yīng)體系為10 μL：上下游引物(10 μmol·L-1)各0.5 μL；模板DNA 1.0 μL；2×TaqPCR Master Mix 5.0 μL，ddH2O 3.0 μL。反應(yīng)條件為：94 ℃ 3 min； 94 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 90 s，34個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)拍照，根據(jù)擴(kuò)增特異條帶鑒定性別。

醋酸洋紅壓片法：1.5～2.0月齡個(gè)體，采用醋酸洋紅壓片法鑒別(SC/T1105—2007《羅非魚(yú)魚(yú)種性別鑒定方法》)。魚(yú)苗腹腔注射5%冰醋酸溶液0.2～0.3 mL，30 s后剪開(kāi)腹部，取出性腺組織。將性腺組織放在預(yù)先滴有醋酸洋紅溶液的載玻片上，再滴入1滴結(jié)晶紫乙醇溶液，染色3～5 min，蓋上蓋玻片，輕輕壓平性腺。在Olympus BX41顯微鏡下觀察，根據(jù)生殖細(xì)胞大小、排列方式等特征進(jìn)行性別鑒定。

組織切片法：2.0～3.0月齡個(gè)體，解剖后取性腺組織，用Bouin’s液固定。經(jīng)石蠟包埋后，常規(guī)切片，厚度5～6 μm，H.E染色、脫水，中性樹(shù)膠封片。Olympus BX41顯微鏡下觀察。

性腺、生殖孔外觀觀察法：3.0～4.0月齡個(gè)體，解剖后取性腺，外觀觀察進(jìn)行性別鑒定；或直接通過(guò)生殖孔外觀觀察鑒定性別。

1.2.3 生長(zhǎng)方程擬合

生長(zhǎng)曲線(xiàn)模型能反映個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育的變化規(guī)律，雌、雄魚(yú)全長(zhǎng)—體質(zhì)量關(guān)系用冪函數(shù)關(guān)系式W=aLb表示；W是體質(zhì)量，L是全長(zhǎng)，a和b是參數(shù)。

選用邏輯斯蒂(Logistic)方程擬合尼羅羅非魚(yú)雌、雄魚(yú)的生長(zhǎng)曲線(xiàn)，描述雌、雄魚(yú)生長(zhǎng)特征。

Logistic ：Lt=a/(1+e(b-k×t))，Wt=a/((1+e(b-k×t)f)

拐點(diǎn)月齡b/k；拐點(diǎn)體質(zhì)量a/2；最大月增重即一階導(dǎo)數(shù)dW/dt=kW/2；在上述模型中，t表示月齡，Lt表示t時(shí)全長(zhǎng)，Wt表示t時(shí)體質(zhì)量，a、b、k、f 為方程參數(shù)，生長(zhǎng)參數(shù)估算采用三點(diǎn)法及最小二乘法[9]。

1.2.4 性類(lèi)固醇激素含量測(cè)定

2.5～4.0月齡，采用斷尾采血或尾柄靜脈抽血1～2 mL，4 ℃冰箱中靜置3～4 h。待血液完全凝集，3 500 r·min-1離心20 min，吸取上層血清。使用上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供的鯉魚(yú)ELISA試劑盒檢測(cè)雌二醇(E2)、睪酮(T)含量。采用酶聯(lián)免疫吸附的方法，在BioTek Synergy酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定各自吸光度(D值)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得出公式并計(jì)算各樣品中E2、T含量。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)均用Excel 2007軟件進(jìn)行整理，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)形式表示。使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行差異顯著性分析；雙曲線(xiàn)繪制采用Sigma Plot10.0制作圖表；部分?jǐn)?shù)據(jù)求導(dǎo)及運(yùn)算使用Microsoft Mathematics軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同發(fā)育時(shí)期雌、雄個(gè)體性別鑒定

分子標(biāo)記鑒定中，Marker-5擴(kuò)增產(chǎn)物表現(xiàn)為1個(gè)條帶(產(chǎn)物大小為293 bp)的個(gè)體為雄性，無(wú)該特異條帶的個(gè)體判為雌性(圖1)。醋酸洋紅壓片鑒定中，生殖細(xì)胞(精原細(xì)胞)緊密堆積在一起，體積較小，細(xì)胞間隔不易區(qū)分的性腺為精巢；生殖細(xì)胞(卵母細(xì)胞)體積較大，呈圓形或卵圓形，細(xì)胞間隔容易分辨，邊緣清晰的性腺為卵巢(圖2)。組織切片鑒定中，卵巢可見(jiàn)圓形、卵圓形或多角圓形卵母細(xì)胞，具有很薄的細(xì)胞膜和濾泡膜；同期，精巢中可見(jiàn)成群成簇排列的精原細(xì)胞，其直徑和核徑均較卵母細(xì)胞小(圖3)。性腺外觀觀察中，卵巢肉色或淡黃色，外形小囊狀，囊內(nèi)可見(jiàn)微細(xì)的卵粒零散分布；精巢肉白色，呈帶狀或扁平三棱柱狀，背面有縱行血管。生殖孔外觀觀察法：雌魚(yú)腹部有三開(kāi)孔(泌尿孔、生殖孔、肛門(mén))；雄魚(yú)腹部有兩個(gè)開(kāi)孔(泄殖孔、肛門(mén))，泄殖孔位于前端圓形凸起上。各時(shí)期雌雄魚(yú)個(gè)體數(shù)見(jiàn)表1。

1、2、4、6、8、9為雄性； 3、5、7為雌性1， 2， 4， 6， 8， 9 were male; 3， 5， 7 were female圖1 尼羅羅非魚(yú)性別鑒別Marker-5分子標(biāo)記Fig.1 Sex identification of Oreochromis niloticus individuals by using Marker-5

A，卵巢Ovary(10×10); B，精巢Testis(10×10)圖2 尼羅羅非魚(yú)性別鑒定醋酸洋紅染色Fig.2 Sex identification of Oreochromis niloticus gonads by using acid red dyeing method

A，卵巢Ovary(10×10); B，精巢Testis(10×10)圖3 尼羅羅非魚(yú)性別鑒定H.E染色Fig.3 Sex identification of Oreochromis niloticus gonads by using H.E staining

2.2 雌、雄魚(yú)生長(zhǎng)特征

2.2.1 雌、雄魚(yú)全長(zhǎng)和體質(zhì)量生長(zhǎng)比較

不同月齡尼羅羅非魚(yú)雌、雄魚(yú)的實(shí)測(cè)平均全長(zhǎng)和體質(zhì)量列于表1。雌、雄魚(yú)全長(zhǎng)和體質(zhì)量出現(xiàn)顯著差異時(shí)間分別出現(xiàn)在3.0和2.5月齡。

各月齡雌雄魚(yú)的實(shí)測(cè)全長(zhǎng)(L)與體質(zhì)量(W)散點(diǎn)分布圖見(jiàn)圖4，體質(zhì)量與全長(zhǎng)生長(zhǎng)關(guān)系回歸雌、雄魚(yú)體質(zhì)量—全長(zhǎng)生長(zhǎng)方程差異明顯，雌魚(yú)b值大于3，呈勻速生長(zhǎng)；雄魚(yú)b值接近于3，略呈異速生長(zhǎng)。

圖4 尼羅羅非魚(yú)雌雄全長(zhǎng)—體質(zhì)量生長(zhǎng)關(guān)系Fig.4 Relationship between total length and body weight of female and male Oreochromis niloticus

表1 尼羅羅非魚(yú)雌雄魚(yú)全長(zhǎng)、體質(zhì)量實(shí)測(cè)值

Table 1 Total length， body weight of female and maleOreochromisniloticusat different month ages

采樣時(shí)間Samplingdate月齡Monthage♀全長(zhǎng)Totallength/cm體質(zhì)量Bodyweight/g樣本數(shù)SampleNo.♂全長(zhǎng)Totallength/cm體質(zhì)量Bodyweight/g樣本數(shù)SampleNo.2015-06-150.51.711±0.1910.101±0.038281.756±0.2200.131±0.036322015-06-301.03.329±0.2830.485±0.175373.467±0.4630.577±0.255232015-07-151.55.254±0.7872.611±0.887275.906±0.4563.668±0.633332015-07-302.08.059±0.6247.989±1.642368.868±0.80210.962±1.013242015-08-152.510.871±0.80524.052±3.519*2211.603±0.92530.323±3.574382015-09-013.013.197±0.939*42.571±10.134**3114.013±1.30250.897±11.967292015-09-153.514.938±1.581**49.369±11.048**2616.002±1.36962.215±13.751342015-10-014.015.375±1.519**76.810±17.666**3517.150±1.61394.950±18.34625

*顯示同一指標(biāo)雌雄魚(yú)間差異顯著(P<0.05)，**顯示差異極顯著(P<0.01)。表4同。

*means the difference in the same index of the female and maleOreochromisniloticuswas significant (P<0.05)， and**means the difference was extremely significant (P<0.01). The same as Table 4.

關(guān)系為：

W(♀)=0.016L3.017(R2=0.995，n=242)

W(♂)=0.020L2.938(R2=0.995，n=238)

2.2.2 雌、雄魚(yú)Logistic 生長(zhǎng)方程

雌、雄魚(yú)全長(zhǎng)、體質(zhì)量Logistic 生長(zhǎng)方程參數(shù)見(jiàn)表2，擬合曲線(xiàn)見(jiàn)圖5。雌、雄魚(yú)全長(zhǎng)、體質(zhì)量的擬合度R2均大于0.94，擬合效果均較好。隨著月齡增加，雌、雄魚(yú)全長(zhǎng)、體質(zhì)量差異逐漸增大，全長(zhǎng)生長(zhǎng)速度最大時(shí)月齡為2.069和2.125，全長(zhǎng)生長(zhǎng)曲線(xiàn)不具拐點(diǎn)，隨著月齡的增加，逐漸趨向漸進(jìn)值；體質(zhì)量的拐點(diǎn)月齡為3.523和3.585，拐點(diǎn)體質(zhì)量值為52.352和67.398 g，雄魚(yú)體質(zhì)量拐點(diǎn)月齡與拐點(diǎn)體質(zhì)量值均大于雌魚(yú)。

表2 尼羅羅非魚(yú)雌雄魚(yú)Logistic 方程模型參數(shù)及擬合度

Table 2 The parameter values and the fit goodness of Logistic models of female and maleOreochromisniloticus

模型參數(shù)ModelparametersLogistic方程abkR2S2拐點(diǎn)月齡Inflectionmonthage拐點(diǎn)體質(zhì)量Inflectionweight全長(zhǎng)Totallength♀16.443±0.2232.821±0.0671.363±0.0430.9990.1242.069—♂18.248±0.4212.752±0.0981.295±0.0650.9980.3522.125—體質(zhì)量Bodyweight♀104.704±30.9035.157±0.7581.464±0.3740.980111.7503.52352.352♂134.796±37.8455.080±0.6171.417±0.3170.985129.5373.58567.398

圖5 尼羅羅非魚(yú)雌雄全長(zhǎng)(A)、體質(zhì)量(B)實(shí)測(cè)值和預(yù)測(cè)值的生長(zhǎng)曲線(xiàn)Fig.5 Growth curves of observed and predicted values of total length(A) and body weight(B) of female and male Oreochromis niloticus

對(duì)Logistic方程求一階導(dǎo)數(shù)和二階導(dǎo)數(shù)，分別得雌、雄魚(yú)生長(zhǎng)速度、生長(zhǎng)加速度。雌、雄魚(yú)的全長(zhǎng)、體質(zhì)量生長(zhǎng)速度均是先上升后下降，呈倒鐘形(圖6)。雄魚(yú)全長(zhǎng)、體質(zhì)量生長(zhǎng)速度始終大于雌魚(yú)；隨著生長(zhǎng)發(fā)育，雌、雄魚(yú)體質(zhì)量差異逐漸增大，體質(zhì)量生長(zhǎng)速度的差異也逐漸增大。生長(zhǎng)速度曲線(xiàn)的頂點(diǎn)即為生長(zhǎng)拐點(diǎn)。雌、雄魚(yú)全長(zhǎng)生長(zhǎng)速度分別在2.069和2.125月齡達(dá)到頂點(diǎn)，體質(zhì)量生長(zhǎng)速度分別在3.523和3.585月齡達(dá)到最大值。

雌、雄魚(yú)全長(zhǎng)、體質(zhì)量生長(zhǎng)加速度變化規(guī)律類(lèi)似，呈上升—下降—上升趨勢(shì)(圖6)。在全長(zhǎng)生長(zhǎng)速度最大時(shí)，加速度為零，此后為負(fù)值，生長(zhǎng)速度減小。在生長(zhǎng)拐點(diǎn)之前，雄魚(yú)體質(zhì)量生長(zhǎng)加速度大于雌魚(yú)，雌、雄魚(yú)體質(zhì)量生長(zhǎng)速度差異逐漸增大；拐點(diǎn)之后，生長(zhǎng)加速度小于零，生長(zhǎng)速度減小。

(A)全長(zhǎng)Total length; (B)體質(zhì)量Body weight圖6 尼羅羅非魚(yú)雌雄生長(zhǎng)速度、生長(zhǎng)加速度Fig.6 Speed and additive speed of growth for the female and male Oreochromis niloticus

體質(zhì)量生長(zhǎng)加速度的最大值和最小值(兩個(gè)極值)分別對(duì)應(yīng)始速點(diǎn)和終速點(diǎn)(圖6-B)。據(jù)此可將生長(zhǎng)過(guò)程分成3個(gè)時(shí)期：緩慢生長(zhǎng)期、快速生長(zhǎng)期和漸進(jìn)生長(zhǎng)期(表3)。雌魚(yú)進(jìn)入快速生長(zhǎng)期的始速點(diǎn)(2.623月齡)和終速點(diǎn)(4.422月齡)都比雄魚(yú)(2.655月齡，4.514月齡)提前，雄魚(yú)快速增長(zhǎng)期的凈增長(zhǎng)量(77.831 g)和快速增長(zhǎng)期持續(xù)時(shí)間(1.859月齡)均大于雌魚(yú)(60.525 g，1.799月齡)，雄魚(yú)體質(zhì)量增加顯著大于雌魚(yú)(圖5-B)。

2.3 雌、雄魚(yú)血清睪酮和雌二醇含量

隨月齡增加，雌、雄魚(yú)血清睪酮(T)、雌二醇(E2)含量隨之升高，且差別逐漸增大。2.5月齡，雌、雄魚(yú)血清雌二醇含量差異顯著(P<0.05)，3.0月齡，睪酮、雌二醇含量均差異顯著(P<0.05)；3.5月齡和4.0月齡后，雌、雄魚(yú)睪酮、雌二醇含量差異極顯著(P<0.01)(表4)。

表3 尼羅羅非魚(yú)雌雄體質(zhì)量生長(zhǎng)過(guò)程區(qū)間

Table 3 Three growth intervals of body weight of female and maleOreochromisniloticus

性別Gender緩慢生長(zhǎng)期Slow-growthperiod月齡Monthage體質(zhì)量Bodyweight/g快速生長(zhǎng)期Fast-growthperiod月齡Monthage體質(zhì)量Bodyweight/g漸進(jìn)生長(zhǎng)期Asymptoticgrowthperi-od月齡Monthage體質(zhì)量Bodyweight/g♀0～2.62322.0512.623～4.42222.051～82.5754.42282.575♂0～2.65528.4652.655～4.51428.465～106.2964.514106.296

表4 尼羅羅非魚(yú)雌雄魚(yú)血清睪酮和雌二醇含量變化

Table 4 Changes of blood serum T and E2of female and maleOreochromisniloticusat different month ages

月齡Monthage睪酮T/(nmol·L-1)♀♂雌二醇E2/(ng·L-1)♀♂2.514.985±2.41918.776±2.595120.119±19.991110.441±16.355*3.015.343±3.44120.398±3.590*128.249±29.331115.238±28.835*3.517.236±3.99823.441±5.397**140.353±33.453125.243±30.304**4.020.329±5.02127.309±7.497**154.602±38.302133.902±32.497**

3 討論

近年來(lái)，Logistic、Gompertz[10-11]和 von Bertalanffy[12]等非線(xiàn)性方程被廣泛用于魚(yú)類(lèi)雌雄生長(zhǎng)過(guò)程研究。本研究用Logistic方程擬合了0.5～4.0月齡尼羅羅非魚(yú)雌、雄全長(zhǎng)和體質(zhì)量生長(zhǎng)特征，全長(zhǎng)為：Lt(♀)=16.443/(1+e(2.821-1.363*t))，Lt(♂)=18.248/(1+e(2.752-1.295*t))；體質(zhì)量為：Wt(♀)=107.704/(1+e(5.157-1.464*t))，Wt(♂)=134.796/(1+e(5.080-1.417*t))。雄魚(yú)全長(zhǎng)生長(zhǎng)速度最大時(shí)的月齡、體質(zhì)量拐點(diǎn)月齡、拐點(diǎn)體質(zhì)量值均大于雌魚(yú)。雌、雄魚(yú)體質(zhì)量生長(zhǎng)拐點(diǎn)分別在3.523、3.585月齡時(shí)，生長(zhǎng)速度及其差異達(dá)到最大，雌魚(yú)進(jìn)入快速生長(zhǎng)期的始速點(diǎn)和終速點(diǎn)均較雄魚(yú)提前，但雄魚(yú)快速生長(zhǎng)區(qū)間時(shí)長(zhǎng)及體質(zhì)量?jī)粼鲩L(zhǎng)量均大于雌魚(yú)，雌雄生長(zhǎng)特征存在差異顯著。

該研究發(fā)現(xiàn)，性成熟前尼羅羅非魚(yú)雌、雄魚(yú)生長(zhǎng)差異已開(kāi)始出現(xiàn)，全長(zhǎng)、體質(zhì)量出現(xiàn)顯著差異時(shí)間分別始于3.0、2.5月齡，隨著月齡增加，雌、雄性別間生長(zhǎng)差異顯著性增加。這可能與雌、雄魚(yú)在性腺發(fā)育過(guò)程中進(jìn)行的生殖投入不同有關(guān)。普遍認(rèn)為，處于性腺發(fā)育周期的大部分能量都要用于性腺發(fā)育，但雌性和雄性的能量代謝配置不同，雄性較雌性分配更多能量到生長(zhǎng)，生殖則相對(duì)較少[1]。研究發(fā)現(xiàn)，尼羅羅非魚(yú)魚(yú)苗自孵化15 d時(shí)性腺原基向卵巢發(fā)育已定型，精巢在孵化后30 d完成分化，較卵巢晚；雄魚(yú)性成熟約在3.6月齡，較雌魚(yú)(4.3月齡)早[13-14]。因此，尼羅羅非魚(yú)雄魚(yú)性腺發(fā)育周期短，性腺成熟周期內(nèi)供性腺發(fā)育所耗能量較雌魚(yú)少，能量分配更多用于增加體質(zhì)量。

羅非魚(yú)兩性生長(zhǎng)分化差異主要來(lái)自性腺發(fā)育及性別分化引起的性激素水平不同。關(guān)于尼羅羅非魚(yú)性腺發(fā)育過(guò)程報(bào)道較多。王令玲等[7]報(bào)道，出膜后2～3 d，性腺原基形成；約30日齡，生殖細(xì)胞開(kāi)始分化成卵原細(xì)胞或精原細(xì)胞。朱云林[15]研究表明，出膜后第3日齡，開(kāi)始出現(xiàn)原始生殖嵴，10～20日齡是性別分化時(shí)期。Hines等[16]研究發(fā)現(xiàn)，孵化后36 d可分辨卵巢。Ijiri等[17]認(rèn)為，孵化后3～5 d為生殖嵴發(fā)育時(shí)期，孵化后25～30 d，XX型性腺開(kāi)始減數(shù)分裂。陳漢興[18]認(rèn)為，孵化后5 d出現(xiàn)生殖嵴，孵化后28 d可清晰辨認(rèn)卵原細(xì)胞，呈現(xiàn)明顯的性腺分化組織學(xué)特征，孵化后42 d可辨認(rèn)精原細(xì)胞。但Rothbard等[20]認(rèn)為，孵化后20 d即可從組織學(xué)上分辨出雌雄。這些結(jié)果表明，尼羅羅非魚(yú)性別分化大約在孵化后30 d左右完成，性腺分化前期也未發(fā)現(xiàn)雌、雄魚(yú)生長(zhǎng)間存在明顯差異。

性腺發(fā)育是內(nèi)源性類(lèi)固醇激素分泌的前提基礎(chǔ)。研究表明，在性別分化期前、中、后不同階段，羅非魚(yú)內(nèi)源性類(lèi)固醇激素水平存在變異[21]。雄激素在卵中較高，受精后、性腺形成前則急劇下降，孵化后22 d迅速升高，而此間雌激素水平極低甚至未被檢測(cè)；兩性性別分化后，雌激素在孵化后43 d迅速升高，雄激素在孵化后57～64 d出現(xiàn)雙峰[16]。內(nèi)源性類(lèi)固醇激素的合成是在性腺分化后，由卵巢、精巢中性固醇分泌細(xì)胞分別合成分泌；性腺分化后，雌激素出現(xiàn)早于雄激素，推測(cè)雌雄魚(yú)生長(zhǎng)差異出現(xiàn)時(shí)間與該時(shí)期雌、雄性激素分泌差異存在關(guān)聯(lián)。

本研究表明，2.5月齡尼羅羅非魚(yú)雌、雄魚(yú)雌二醇含量差異顯著；3.0月齡雌、雄魚(yú)睪酮和雌二醇含量差異顯著(P<0.05)，之后差異逐漸增大。推測(cè)雌雄性別生長(zhǎng)差異可能與性固醇激素水平間存在一定關(guān)聯(lián)。一方面，性固醇激素可提高魚(yú)類(lèi)攝食水平、食物轉(zhuǎn)化率。研究表明，尼羅羅非魚(yú)雄魚(yú)血清11-KT濃度高于雌魚(yú)，11-KT可增加雄魚(yú)攝食量、提高食物轉(zhuǎn)化率[21]。在投喂不同濃度甲基睪酮飼料后，隨著雄性激素劑量增加，鯉(Cyprinuscarpio)的食物轉(zhuǎn)化率也有增加表現(xiàn)[22]。另一方面，性固醇激素可通過(guò)GH-IGF通路調(diào)節(jié)生長(zhǎng)發(fā)育。虹鱒(Oncorhynchusmykiss)中，雌二醇可降低肝臟對(duì)GH信號(hào)因子敏感性，下調(diào)igf-1表達(dá)量；睪酮?jiǎng)t可上調(diào)igf-1表達(dá)量[23-25]。在莫桑比克羅非魚(yú)(O.mossambicus)中，E2可降低雌、雄魚(yú)igf-1 mRNA表達(dá)量，降低雄魚(yú)igfbpmRNA表達(dá)量，增加雌魚(yú)igfbpmRNA表達(dá)量，進(jìn)而調(diào)節(jié)肝臟GH-IGF信號(hào)通路[26-27]。馬細(xì)蘭等[28]研究指出，E2可下調(diào)雄性尼羅羅非魚(yú)垂體GH mRNA和肝臟GHR mRNA表達(dá)量。

本研究中，尼羅羅非魚(yú)雌、雄魚(yú)中雄激素水平顯著差異出現(xiàn)在3月齡，雄魚(yú)大于雌魚(yú)；雌激素水平顯著差異出現(xiàn)在2.5月齡，雌魚(yú)大于雄魚(yú)。不同性別中雌、雄激素水平與其生長(zhǎng)性能間存在一定關(guān)聯(lián)，即雄魚(yú)雄激素水平高、雌激素水平低，生長(zhǎng)更快；而雌魚(yú)雄激素水平相對(duì)低，雌激素水平高，生長(zhǎng)較慢。因此認(rèn)為，尼羅羅非魚(yú)個(gè)體生長(zhǎng)可能受雌、雄激素水平(相對(duì)高低)影響調(diào)控。

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(責(zé)任編輯 張 韻)

Study on growth difference and steroid hormones between female and male Nile tilapiaOreochromisniloticusbefore sexual maturity

YUE Meng-meng， ZHAO Jin-liang*， TANG Shou-jie， WANG Yan， ZHAO Yong-hua

(LaboratoryofFreshwaterFisheriesGermplasmResources，MinistryofAgriculture，ShanghaiOceanUniversity，Shanghai201306，China)

Studies were conducted to reveal the growth differences between female and male Nile tilapia (Oreochromisniloticus) by identifying the gender with molecular marker， acid red dyeing method and histological section， meanwhile， the content of serum steroid hormones， testosterone (T) and estradiol (E2)， were also investigated. Results showed that the total length， body weight in the female and male began to show significant differences (P<0.05) at 3.0 and 2.5 months age， respectively. Simultaneously， the Logistic growth equation can be expressed asLt(♀)=16.443/(1+e(2.821-1.363*t))，Lt(♂)=18.248/(1+e(2.72-1.295*t))，Wt(♀)=107.704/(1+e(5.157-1.464*t))，Wt(♂)=134.796/(1+e(5.080-1.417*t)). The inflection point for the body weight growth was 3.523 month in the female and 3.585 month in the male， and the corresponding weight was 52.352 and 67.398 g, respectively. The growth rate of total length and body weight in the male was throughout larger than that in the female. Furthermore， the male showed longer period and heavier increment than the female in the fast-growing period. After 3.0 months age， the content of E2and T between the male and female was significantly different(P<0.05)， respectively. Results suggested that the relative content of E2and T may result in the growth difference between the male and female Nile tilapia.

Oreochromisniloticus; female and male; steroid hormones

http://www.zjnyxb.cn

10.3969/j.issn.1004-1524.2016.10.08

2016-01-22

國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專(zhuān)項(xiàng)資金(CARS-49)；水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種中心上海市協(xié)同創(chuàng)新中心(ZF1206)

岳蒙蒙(1990—)，女，河南鄭州人，博士研究生，從事水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種與繁殖研究。E-mail: 1534451302@qq.com

*通信作者，趙金良， E-mail: jlzhao@shou.edu.cn

S917.4

A

1004-1524(2016)10-1678-09

浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)ActaAgriculturaeZhejiangensis， 2016，28(10): 1678-1686

岳蒙蒙，趙金良，唐首杰，等. 性成熟前期尼羅羅非魚(yú)雌雄性別生長(zhǎng)差異與性類(lèi)固醇激素水平比較[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2017，27(10)： 1678-1686.