張迪，李超，倪宏波*

（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院，黑龍江大慶　163319）

豬高致病性和普通藍耳病病毒混感的實驗室診斷報告

張迪，李超，倪宏波*

（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院，黑龍江大慶163319）

黑龍江省大慶市某豬場連續(xù)3頭母豬出現(xiàn)初生仔豬流產(chǎn)、死胎和木乃伊胎，伴有皮下出血、淤血等臨床特征，采用PCR方法對送檢胎兒采集的樣品進行病原檢測，結(jié)果顯示：送檢胎兒發(fā)生了豬高致病性和普通藍耳病病毒混合感染。

豬；高致病性藍耳病；普通藍耳??；混合感染；診斷

豬藍耳病又稱豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS），是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起豬的一種高度傳染性疾病，病豬和帶毒豬是本病的主要傳染源，主要經(jīng)消化道傳播，仔豬和育肥豬是PRRSV的主要貯存宿主。隨著養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，我國的養(yǎng)豬業(yè)發(fā)生了很大的變化并具一定規(guī)模，大部分豬病由原來的單一病原轉(zhuǎn)變?yōu)槎嘁蜃訁f(xié)同作用。OIE將豬繁殖與呼吸綜合征列為B類動物傳染病。該病最早于1987年在美國中西部發(fā)現(xiàn)，我國臺灣省1991年出現(xiàn)此病，日本1994年暴發(fā)PRRS。PRRSV只感染豬，分為兩個型，即美洲型和歐洲型，具有變異性，歐洲和美洲分離毒株之間存在顯著的抗原差異性，有很少的交叉反應(yīng)。我國大陸在1995年首次發(fā)生，現(xiàn)稱為普通藍耳病，我國的PRRS分離毒株均屬美洲型，迄今還沒有發(fā)現(xiàn)歐洲型毒株，2007年確認該病毒出現(xiàn)高致病性變異，現(xiàn)已在豬場廣泛存在，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。

2016年5月，黑龍江省大慶市某養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)24頭母豬，連續(xù)3頭母豬出現(xiàn)初生仔豬流產(chǎn)、死胎和木乃伊胎,將死亡胎兒送檢，經(jīng)實驗室診斷確診為豬高致病性和普通藍耳病病毒混合感染，現(xiàn)將結(jié)果報告如下：

1　材料與方法

1.1病料的采集

無菌采集送檢胎兒的肝臟、肺臟、腎臟和淋巴結(jié)等病料。

1.2試劑

DNA提取試劑盒和PCR試劑（TaqDNA聚合酶、dNTP等）購于北京天根生化科技有限公司；RNA快速提取試劑盒

購于北京博凌科為生物科技有限公司。

表1　引物序列

1.3引物設(shè)計

根據(jù)GenBank中已發(fā)表的偽狂犬病病毒、高致病性藍耳病病毒、普通藍耳病病毒、豬瘟病毒、細小病毒和流行性乙型腦炎病毒等的基因序列設(shè)計特異引物，并送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。序列見表1。

2　結(jié)果

2.1臨診癥狀

妊娠母豬病初精神沉郁，食欲不振，體溫升高，隨著病程加重，發(fā)生流產(chǎn)、早產(chǎn)，產(chǎn)死胎和木乃伊胎。幸存仔豬表現(xiàn)為呼吸困難，肌肉震顫，呼吸麻痹，共濟失調(diào)，有的仔豬耳朵和軀體末端皮膚發(fā)紺等現(xiàn)象。

2.2剖檢變化

流產(chǎn)胎兒皮膚出血，臍帶周圍的皮膚廣泛出血；臍帶發(fā)生出血性擴張和壞死性動脈炎；可見肺臟組織學(xué)病變，如大理石樣，肺臟間質(zhì)水腫，肺小葉隆起，肺泡間質(zhì)增厚，表面有淤血點；肝臟變性壞死，質(zhì)脆，呈暗紅色；切面三界不明顯，質(zhì)脆，腎囊出血性水腫，腎臟實質(zhì)嚴重出血；腎淤血腫大，水腫樣。

2.3實驗室檢測

2.3.1細菌檢測在無菌條件下分別剪取一小塊深部組織臟器，接種涂抹于5%兔血脂培養(yǎng)基上和營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，分別做需氧和厭氧培養(yǎng)，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h，觀察菌落形態(tài)和溶血情況等，所有的病料均未分離到細菌。

2.3.2病毒檢測將送檢來的肝臟病料洗凈，取0.5g于研磨器中進行研磨，加入1.5mL的pH值為7.2的PBS液研磨，用AXYGEN試劑盒進行DNA和RNA的提取，通過對RNA的反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，并以此為模板（其中細小病毒以DNA為模板、高致病性藍耳病病毒及普通藍耳病病毒以cDNA模板、日本乙型腦炎以RNA為模板、偽狂犬病病毒以DNA為模板），分別選用所合成的各種特異性引物進行PCR擴增，擴增結(jié)果經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分析，結(jié)果可知：第2孔道420bp左右有一條條帶，與高致病性藍耳病病毒片段相符；第3孔道在372bp左右有一條條帶，與普通藍耳病病毒片段相符，其它均無擴增結(jié)果，因此可確定該病為高致病性藍耳病和普通藍耳病混合感染所致。如圖1所示。

3　討論

3.1發(fā)病原因

豬場養(yǎng)殖方式落后，管理不當(dāng)及防疫意識淡薄，防疫機制不健全是發(fā)生豬藍耳病的重要原因，該豬場設(shè)施落后陳舊，衛(wèi)生環(huán)境較差，母豬只進行了豬瘟和偽狂犬病疫苗免疫，平時的消毒操作不規(guī)范，而且沒有嚴格按照規(guī)定執(zhí)行。

3.2防治措施

加強飼養(yǎng)管理，尤其是加強衛(wèi)生管理，制定并執(zhí)行嚴格的消毒方案，完善防疫措施，調(diào)整免疫程序，補充豬高致病性藍耳病、普通藍耳病和細小病毒疫苗免疫，對全場母豬進行豬高致病性藍耳病和普通藍耳病疫苗緊急接種。育肥豬舍做到“全進全出”，空欄期進行嚴格消毒處理，堅持自繁自養(yǎng)，對后備豬進行偽狂犬病野毒抗體的監(jiān)測，淘汰陽性豬，建立穩(wěn)定的母豬群。

4　結(jié)論

通過病理解剖和實驗室診斷，確定該豬場發(fā)生高致病性藍耳病和普通藍耳病感染，建議豬場今后加強管理，做好防治措施，避免此類疾病再次發(fā)生。

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10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．11.011

張迪（1994～），黑龍江省人，本科生

★倪宏波（1972～），黑龍江省人，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事分子細菌學(xué)和免疫學(xué)研究