努爾子亞·曼那洪 帖提古麗·阿卜杜力 范芳芳 趙生俊 聶繼紅

1.新疆醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院，新疆烏魯木齊830000；2.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，新疆烏魯木齊830000

VKORC1與CYP2C9基因多態(tài)性對(duì)新疆維吾爾族患者華法林日穩(wěn)定劑量的影響

努爾子亞·曼那洪1帖提古麗·阿卜杜力1范芳芳2趙生俊2聶繼紅2

1.新疆醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院，新疆烏魯木齊830000；2.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，新疆烏魯木齊830000

目的探討維生素K環(huán)氧化物還原酶復(fù)合體亞單位1（VKORC1）、細(xì)胞色素P450 2C9（CYP2C9）基因多態(tài)性對(duì)新疆維吾爾族患者華法林日穩(wěn)定劑量的影響。方法選取2014年7月～2016年1月新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院服用華法林抗凝的120例新疆維吾爾族患者，國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR）值在2.0～3.0；采用多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）直接測(cè)序法對(duì)患者進(jìn)行VKORC1、CYP2C9基因多態(tài)性檢測(cè)；研究VKORC1、CYP2C9基因多態(tài)性、人口學(xué)特征、合并疾病及合并用藥情況對(duì)華法林日穩(wěn)定劑量的影響。結(jié)果年齡與華法林穩(wěn)定劑量呈負(fù)相關(guān)（r＜0，P＜0.05），身高、吸煙、高血壓與華法林日穩(wěn)定劑量呈正相關(guān)（r＞0，P＜0.05）。CYP2C9*3、VKORC1基因多態(tài)性對(duì)華法林穩(wěn)定劑量的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［（r＜0，P＜0.05）、（r＞0，P＜0.05）］。CYP2C9*3、VKORC1-1639A＞G，VKORC1-1173T＞C分別可解釋5.6%、25.1%、25.6%的個(gè)體間華法林穩(wěn)定劑量的差異，而年齡、身高、吸煙、高血壓等非遺傳因素對(duì)個(gè)體間華法林穩(wěn)定劑量差異的貢獻(xiàn)分別為9%、4.5%、1.5%、3.2%。結(jié)論CYP2C9與VKORC1基因多態(tài)性是影響新疆維吾爾族患者華法林穩(wěn)定劑量的主要因素。

華法林；VKORC1；CYP2C9；基因多態(tài)性

華法林是香豆素類口服抗凝藥物，臨床上被廣泛應(yīng)用于人工瓣膜置換術(shù)后、深靜脈血栓、肺栓塞、心房顫動(dòng)、左心室血栓等血栓栓塞性疾病的治療［1］。華法林治療窗窄，用量上個(gè)體與民族間存在明顯差異［2］，在不同個(gè)體間的日穩(wěn)定劑量有1～20 mg/d不等［3-4］。近年的研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞色素CYP2C9（CYP2C9）及維生素K環(huán)氧化物還原酶復(fù)合體亞單位1（VKORC1）基因多態(tài)性是影響華法林劑量的主要遺傳因素［5］。目前CYP2C9及VKORC1基因多態(tài)性對(duì)新疆維吾爾族患者華法林穩(wěn)定劑量影響的研究較少，因此本研究以新疆維吾爾族患者為研究對(duì)象，研究VKORC1、CYP2C9基因多態(tài)性、人口學(xué)特征、合并疾病及合并用藥對(duì)華法林日穩(wěn)定劑量的影響，為新疆維吾爾族患者華法林的個(gè)體化給藥提供依據(jù)。

1 象與方法

1.1 研究對(duì)象

2014年7月～2016年1月在新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)院住；或門診就診的正在服用華法林抗凝的維吾爾族患者120例，抗凝指征包括人工瓣膜置換術(shù)后、心房顫動(dòng)、深靜脈血栓、肺栓塞、左心室血栓。本研究方案已通過新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡＞18歲；②堅(jiān)持服用華法林片治療至少2個(gè)月以上；③國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR）穩(wěn)定達(dá)標(biāo)（定義：至少連續(xù)2次，每次間隔1周以上，INR值均在2.0～3.0）；④患者自愿參加，簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①孕婦；②有嚴(yán)重性肝功能異常［肝功能分級(jí)（CTP）評(píng)分C級(jí)者］；腎功能異常者（內(nèi)生肌酐清除率≤50mL/min）；③有出血傾向者［凝血酶原時(shí)間（PT）、活化部分凝血酶時(shí)間（APTT）過度延長(zhǎng)者］，凝血機(jī)制障礙者；④個(gè)體間有血緣關(guān)系。

1.2 方法

1.2.1 基因檢測(cè)臨床獲取患者抗凝外周血3mL，使用QIAamp全血基因組DNA抽提試劑盒提取基因組DNA。采用Sanger直接測(cè)序法進(jìn)行基因分型?；驒z測(cè)位咖包括VKORC1基因的-1639A＞G（rs9923231）及1173T＞C（rs9934438）位咖、CYP2C9基因的CYP2C9*2（rsl79 9853）及CYP2C9*3（rsl057910）位咖。VKORC1、CYP2C9基因多態(tài)性位咖相關(guān)引物序列見表1。

1.2.2 數(shù)據(jù)收集采用Epidata 3.2軟件和CRF（病例報(bào)告表）收集數(shù)據(jù)，主要包括：人口學(xué)特征：性別、年齡、身高、體重等；華法林日穩(wěn)定劑量；個(gè)人史：主要包括吸煙（既往有連續(xù)或累計(jì)吸煙6個(gè)月及以上，并且在納入本研究時(shí)每天至少吸1支卷煙者）、飲酒史（長(zhǎng)期大量飲酒，即攝入純酒精125 mL/d，或白酒＜150 g/d，或啤酒＜＞4瓶/d，持續(xù)6～10年）；合并用藥情況（β受體阻滯劑，他汀類，地高辛，阿司匹林等）；合并疾?。ǜ哐獕骸⒐谛牟?、腦梗死等）；基因多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。非正態(tài)分布的計(jì)量資料用中位數(shù)（M）及四分位數(shù)（P25，P75）表示，采用非參數(shù)檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用X2檢驗(yàn)。分析患者非遺傳因素（年齡、身高、體重、吸煙史、飲酒史、合并疾病、合并用藥等）及CYP2C9、VKORC1基因型與華法林日穩(wěn)定劑量的相關(guān)性，采用線性回歸的方法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 各個(gè)檢測(cè)位點(diǎn)的引物

2 果

2.1 納入患者臨床基線特征

患者一般臨床信息及華法林日均穩(wěn)定劑量具體見表2。

2.2 基因檢測(cè)結(jié)果

CYP2C9及VKORC1的各位咖等位基因及基因型頻率分布情況見表3。結(jié)果顯示，在本研究患者中位咖CYP2C9*2的變異較少，僅有3.7%的患者攜帶突變基因。CYP2C9*3位咖的變異也較少，僅有6.7%的患者攜帶突變基因。VKORC1-1639AA、AG、GG基因型的患者分別占44.2%、41.7%、14.2%?；驒z測(cè)結(jié)果中新疆維吾爾族患者基因分布基本符合Hardyweinberg遺傳平衡定律（P＞0.05），因此本研究人群具有群體代表性。

2.3 CYP2C9及VKORC1基因型患者華法林穩(wěn)定劑量的差異

不同CYP2C9及VKORC1基因型患者的華法林穩(wěn)定劑量的差異見表4，本研究中CYP2C9*2基因型患者的華法林穩(wěn)定劑量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。不同CYP2C9*3、VKORC1-1639A＞G、VKORC1-1173T＞C基因型患者的華法林穩(wěn)定劑量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 患者基線特征（n=120）

表3 CYP2C9及VKORC1的等位基因及基因型分布

VKORC1-1639GG基因型患者的日均穩(wěn)定劑量是AA基因型患者的1.7倍［（4.47±1.69）比（2.52±0.88）mg］，VKORC1-1639AG基因型患者的日均穩(wěn)定劑量是AA基因型患者的1.3倍［（g3.35±1.15）比（2.52±0.88）mg］。VKORC1-1173TC基因型患者的日均穩(wěn)定劑量是TT基因型患者的1.3倍［（3.40±1.15）比（2.48±0.84）mg］，VKORC1-1173CC基因型患者的日均穩(wěn)定劑量是TT基因型患者的1.8倍［（4.48±1.79）比（2.48±0.84）mg］。

表4 不同CYP2C9及VKORC1基因型患者華法林穩(wěn)定劑量

2.4 影響華法林穩(wěn)定劑量的因素分析

2.4.1 非遺傳因素對(duì)華法林穩(wěn)定劑量的影響考慮單因素而排除其他因素的影響時(shí)，非遺傳因素中年齡與華法林穩(wěn)定劑量呈負(fù)相關(guān)（r＜0，P＜0.05），身高、吸煙、高血壓與華法林日穩(wěn)定劑量呈正相關(guān)（r＞0，P＜0.05）。年齡、身高、吸煙、高血壓分別可解釋9%、4.5%、1.5%、3.2%的個(gè)體間華法林穩(wěn)定劑量差異。見表5。

2.4.2 CYP2C9、VKORC1對(duì)華法林穩(wěn)定劑量的影響CYP2C9*2基因多態(tài)性與華法林穩(wěn)定劑量無相關(guān)性（r＜0，P＞0.05），而CYP2C9*3呈負(fù)相關(guān)（r＜0，P＜0.05）。VKORC1-1639A＞G、VKORC1-1173T＞C呈正相關(guān)（r＞0，P＜0.05）。CYP2C9*3可解釋5.6%個(gè)體間華法林穩(wěn)定劑量的差異。VKORC1-1639A＞G、VKORC1-1173T＞C分別可解釋25.1%、25.6%的個(gè)體間華法林穩(wěn)定劑量的差異。見表5。

3 論

本研究結(jié)果顯示，CYP2C9*2的基因變異較少見，與Xiong等［6］研究中的CYP2C9*2基因分布情況一致。有6.7%的患者攜帶至少一個(gè)CYP2C9*3變異基因，這一結(jié)論與中國(guó)漢族人群CYP2C9*3基因分布相近［7］，低于高加索人，但高于東亞的日本、韓國(guó)人［8-10］。VKORC1-1639A＞G的基因分布與張艷等［11］在新疆維吾爾族人群中的基因分布頻率基本相近，但不同于漢族人群、歐美人群的基因分布［7］。此外，不同VKORC1-1639A＞G基因型患者的華法林穩(wěn)定劑量差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這一結(jié)果與既往的研究已證實(shí)的VKORC1-1639AA基因型在各民族間的分布不一致可解釋民族之間華法林劑量的差異相符［8］。

分析影響華法林日穩(wěn)定劑量的因素線性回歸結(jié)果顯示，本研究非遺傳因素中年齡、吸煙對(duì)華法林日穩(wěn)定劑量的影響也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。年齡與穩(wěn)定劑量的相關(guān)性與已有的研究報(bào)道［5，12-14］一致，患者華法林劑量隨著年齡的增加而降低。CYP2C9*3與VKORC1-1639A＞G、-1173T＞C變異基因型對(duì)華法林穩(wěn)定劑量的影響是相反的，即攜帶CYP2C9*3突變基因的患者所需的華法林穩(wěn)定劑量比"生型低，而攜帶VKORC-1639A＞G、-1173T＞C變異基因的患者所需的華法林穩(wěn)定劑量比"生型增加。CYP2C9*2基因多態(tài)性對(duì)本研究納入的維吾爾族患者華法林穩(wěn)定劑量沒有影響，考慮本研究維吾爾族患者中同中國(guó)漢族人群一樣CYP2C9*2基因變異率極低有關(guān)系。本研究發(fā)現(xiàn)CYP2C9*3基因多態(tài)性對(duì)華法林劑量個(gè)體差異的貢獻(xiàn)是5.6%高于Lee等［15］研究結(jié)果、低于Gen［16］研究結(jié)果，CYP2C9*3、VKORC1兩種基因多態(tài)性對(duì)新疆維吾爾族患者華法林劑量個(gè)體差異的貢獻(xiàn)比例大于非遺傳因素，與既往國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道的結(jié)果一致［17-20］。

表5 影響華法林穩(wěn)定劑量因素分析

綜上所述，CYP2C9與VKORC1基因多態(tài)性是影響新疆維吾爾族患者華法林穩(wěn)定劑量的主要遺傳因素。

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Im pact of VKORC1，CYP2C9 gene polymorphism s on W arfarin m aintenance dose variation in Xinjiang Uyghur population

Nuerziya·Mannahong1Patigul·Abdulla1FAN Fangfang2ZHAO Shengjun2NIE Jihong2
1.Postgraduate School of Xinjiang Medical University，Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi 830000，China；
2.Department of Pharmacy，Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to College of Xinjiang Medical University，Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi 830000，China

Objective To explore the effect of vitamin K epoxide reductase complex1（VKORC1），cytochrome P450 2C9（CYP2C9）gene polymorphism on Warfarin maintenance dose in Xinjiang Uyghur patients.M ethods 120 patients who took Warfarin to anticoagulation recruited in Traditional Chinese Medical Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University from July 2014 to Jan 2016 were selected，all patients required international normalized ratio（INR）was range from 2.0 to 3.0；Using PCR direct sequencing method detected VKORC1，CYP2C9 gene polymorphism；analyzed the effect of VKORC1，CYP2C9 gene polymorphism，demographic characteristics，accompanied diseases and concomitant medications on Warfarin maintenance dose.Resu lts There was negative correlation between age and Warfarin maintenance dose（r＜0，P＜0.05），height，smoking，hypertension had positive correlation with Warfarinmaintenance dose（r＞0，P＜0.05）.CYP2C9*3，VKORC1 gene polymorphisms had statistical significance in interindividual variation on Warfarinmaintenance dose［（r＜0，P＜0.05），（r＞0，P＜0.05）］.CYP2C9*3，VKORC1-1639A＞G，VKORC1-1173T＞C genetic factors and age，height，smoking，hypertension non-genetic factors respectively contributed to 5.6%，25.1%，

Warfarin；VKORC1；CYP2C9；Gene polymorphism

R968

A

1673-7210（2016）05（c）-0017-05

2016-02-18本文編輯：蘇暢）

新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（2014211C102）。

努爾子亞·曼那洪（1988.2-），女，新疆醫(yī)科大學(xué)2013級(jí)藥學(xué)專業(yè)在讀碩士研究生；研究方向：臨床藥學(xué)。

聶繼紅（1962.10-），女，教授，碩士生研究導(dǎo)師，新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部主任；研究方向：藥事管理和中藥新藥研發(fā)。

25.6 %and 9%，4.5%，1.5%，3.2%individual variation on Warfarin maintenance dose.Conclusion CYP2C9 and VKORC1 gene polymorphisms are the main factors for the effecting Warfarin maintain dose in Xinjiang Uyghur population.