王舞妮　孫　墅　戴　軼　鄧彩弟（深圳市第二人民醫(yī)院深圳518000）

研究薄荷復(fù)方煎液對齲病、牙周病致病菌的抑制和殺滅作用

王舞妮孫墅戴軼鄧彩弟（深圳市第二人民醫(yī)院深圳518000）

目的：觀察并分析薄荷復(fù)方煎液在抑制齲病和牙周病的各種致病菌中的作用。方法：本研究中的實驗菌株主要包括牙齦卟啉單胞菌和血鏈球菌，所用藥方為薄荷復(fù)方煎液，重點觀察它在抑制齲病和牙周病的各種致病菌中的作用。結(jié)果：薄荷復(fù)方煎液能夠有效地減少牙齦卟啉單胞菌及血鏈球菌的產(chǎn)酸量，能夠抑制其生物活性，從而減少不溶性葡聚糖的合成。結(jié)論：對于口腔細(xì)菌的糖代謝以及酸代謝來說，薄荷復(fù)方煎液均能發(fā)揮抑制效果。

薄荷復(fù)方煎液 齲病 牙周病 致病菌 抑制 殺滅

在以往的研究中，我們發(fā)現(xiàn)，薄荷復(fù)方煎液能夠?qū)崿F(xiàn)牙齦卟啉單胞菌和血鏈球菌的最小抑菌濃度，也能實現(xiàn)最小殺菌濃度。為了深入地分析薄荷復(fù)方煎液抑制齲病和牙周病的各種致病菌的作用及其具體機(jī)制，重點分析此煎液對于致病菌的生理活性的具體影響，開展本次研究，實現(xiàn)了預(yù)期的研究目標(biāo)，現(xiàn)作如下匯報。

1　配制薄荷復(fù)方煎液

本研究中的藥物成分主要是食鹽10g，薄荷15g，川椒10g，補(bǔ)骨脂15g，仙靈脾10g，細(xì)辛5g，石菖蒲10g，白芷10g，露蜂房10g，蚤休20g。將上述藥物加入1000mL的水中，文火煎，時長為3h左右，直至水量變?yōu)?00mL，對其進(jìn)行過濾，并需要進(jìn)行離心處理，以獲取原液。

2　選取致病菌

本研究將血鏈球菌作為齲病致病菌，將牙齦卟啉單胞菌作為牙周病致病菌。

3　試驗儀器及器材

本研究使用全自動細(xì)菌鑒定儀（西門子公司）和藥敏分析儀（飛利浦公司）；全自動厭氧培養(yǎng)箱；全自動血培養(yǎng)儀（英國DE公司）；超凈工作臺；CO2培養(yǎng)箱。

4　配制培養(yǎng)基

4.1配制TPY液體培養(yǎng)基：取13.2g的TPY液體培養(yǎng)基，并將其加入500mL的蒸餾水，也可以選取等體積的去離子水，充分?jǐn)嚢韬螅枰掷m(xù)加熱，直至其煮沸并徹底溶解，然后將其裝入三角瓶，并需要在121℃的溫度下進(jìn)行高壓滅菌處理，時長為15min[1]。

4.2配制腦心浸出液肉湯：取18g的腦心浸出液，將其加入500mL的蒸餾水，也可以選取等體積的去離子水，充分?jǐn)嚢韬?，需要持續(xù)加熱，直至其煮沸并徹底溶解，然后將其裝入三角瓶，并需要在121℃的溫度下進(jìn)行高壓滅菌處理，時長為15min。

5　復(fù)蘇致病菌

5.1復(fù)蘇血鏈球菌：在凍干粉EP管中加入1mL的TPY液體培養(yǎng)基，然后需要混勻，并需要將其置入溫度為37℃的溫箱中進(jìn)行孵育，時長為30min左右，然后在8個菌種保存管中分別注入菌懸液，并需要將其保存于零下20℃的環(huán)境中；然后取菌懸液，并需要于血平板分區(qū)處進(jìn)行畫線操作。

5.2復(fù)蘇牙齦卟啉單胞菌：在凍干粉EP管中加入1mL的無菌小牛血清，然后需要把菌懸液加入BHI肉湯培養(yǎng)基，需要將其在37℃的環(huán)境中進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，時長為24h。

6　測定最小抑菌濃度

在BHI液體培養(yǎng)基中分別接種牙齦卟啉單胞菌和血鏈球菌，并對其進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，時長為24h。然后借助48孔板對4種致病菌的MIC進(jìn)行測定[2]。

7　分組

結(jié)合測定結(jié)果，借助1 MNaOH，對BHI液體培養(yǎng)基的pH值進(jìn)行調(diào)節(jié)。空白對照為培養(yǎng)基內(nèi)的pH值的變化；本研究中共設(shè)5組觀察組。

8　結(jié)果

8.1培養(yǎng)液的pH值變化與薄荷復(fù)方煎液濃度的關(guān)系分析：牙齦卟啉單胞菌和血鏈球菌的產(chǎn)酸能力都相對較強(qiáng)，且不存在明顯差異，如果將pH值降至5.6左右，那么薄荷復(fù)方煎液對于兩種致病菌的產(chǎn)酸能力均有顯著的抑制作用；當(dāng)比例為1∶2時，pH值能夠始終大于7；當(dāng)比例為1∶16時，對于產(chǎn)酸能力仍有顯著的抑制作用。如表1所示。

表1　培養(yǎng)液的pH值變化與薄荷復(fù)方煎液濃度的關(guān)系分析（±s）

表1　培養(yǎng)液的pH值變化與薄荷復(fù)方煎液濃度的關(guān)系分析（±s）

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8.2水不溶性葡聚糖的濃度的變化與薄荷復(fù)方煎液濃度的關(guān)系分析：在牙齦卟啉單胞菌和血鏈球菌合成水不溶性葡聚糖的過程中，薄荷復(fù)方煎液有著顯著的抑制作用，當(dāng)比例為1∶8時，仍能顯著影響血鏈球菌，當(dāng)比例為1∶4時，仍能顯著影響牙齦卟啉單胞菌。如表2所示。

表2　水不溶性葡聚糖的濃度的變化與薄荷復(fù)方煎液濃度的關(guān)系分析（±s）

表2　水不溶性葡聚糖的濃度的變化與薄荷復(fù)方煎液濃度的關(guān)系分析（±s）

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9　討論

在人體結(jié)構(gòu)中，口腔環(huán)境比較適合細(xì)菌滋長，在口腔處于健康的狀態(tài)下，各種菌群之間屬于平衡關(guān)系，但是這一平衡一旦被打破，便會導(dǎo)致牙周病以及齲病等口腔疾病。有研究人員指出，牙周病是導(dǎo)致牙齒缺失的一個重要因素，需要引起足夠重視。

在齲病的發(fā)病中，黏性放線菌、變形鏈球菌、血鏈球菌以及乳桿菌等均屬于常見的致病菌。與此同時，在牙周病的發(fā)病中，牙齦卟啉單胞菌和伴放線桿菌均屬于常見的致病菌。

在口腔細(xì)菌致齲的病變過程中，生物學(xué)特征主要包括兩個方面，一個是產(chǎn)酸，另一個便是產(chǎn)生細(xì)胞外多糖。在常見的口腔細(xì)菌中，產(chǎn)生有機(jī)酸的方式主要是代謝碳水化合物，且伴隨產(chǎn)物的逐漸累積，pH值會出現(xiàn)程度各異的降低表現(xiàn)，并會最終導(dǎo)致牙體硬組織出現(xiàn)脫礦情況，并會最終誘發(fā)齲損[3]。在口腔細(xì)菌的致齲性中，合成細(xì)胞外多糖的實際能力始終是廣大醫(yī)務(wù)工作者密切關(guān)注的熱點問題，一般而言，細(xì)胞外多糖主要是由水溶性多糖（WSG）和水不溶性多糖（WIG）兩個方面構(gòu)成的，其中，WIG有助于增強(qiáng)細(xì)菌的粘附力，在菌斑基質(zhì)的生成中有著較高的參與度，會為致齲菌的生物屏障提供保護(hù)作用，WSG主要是以胞外貯能形式存在，在菌斑的代謝中有著較高的參與度[4]。有研究人員指出，在牙周病的發(fā)病中，菌斑生物膜屬于重要的始動因子，并和機(jī)體免疫反應(yīng)密切相關(guān)[5]。

本研究重點觀察了薄荷復(fù)方煎液在齲病、牙周病的治療中的效果，在以往檢出最小殺菌濃度以及最小抑菌濃度的基礎(chǔ)上，判斷此煎液對牙齦卟啉單胞菌以及血鏈球菌的生理活性的影響。本研究結(jié)果提示，對于口腔細(xì)菌的糖代謝以及酸代謝來說，薄荷復(fù)方煎液均能發(fā)揮抑制效果，值得推廣。

[1]束雅春，秦昆明，劉曉，等.HPLC測定荊芥飲片煎煮過程中胡薄荷酮的含量變化[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17（16）：60-62.

[2]曹寅，張琪，徐燕，等.降糖固齒湯抑制牙周致病菌實驗的研究[J].口腔醫(yī)學(xué)，2012，32（10）：622-624.

[3]吉秋霞，徐全臣，于新波，等.殼聚糖及其季銨鹽對牙周常見致病菌的體外抑菌活性[J].青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，47（1）：23-24，27.

[4]楊清嶺，趙麗，孔宇，等.三種中藥牙膏對口腔致病菌抑制作用的體外實驗研究[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2013，25（2）：157-160.

[5]李正軍.中西藥聯(lián)合治療100例牙周病的臨床體會[J].現(xiàn)代診斷與治療，2013，24（1）：68.

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1672-8351（2016）11-0021-02