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        免疫比濁法測定抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的臨床應用

        2016-11-19 06:17:12陳浩全曾嫚妮
        國際檢驗醫(yī)學雜志 2016年20期
        關鍵詞:瓜氨酸精密度試劑

        陳浩全,曾嫚妮

        (1.廣西壯族自治區(qū)玉林市中西醫(yī)結合骨科醫(yī)院檢驗科 537000;2.廣西壯族自治區(qū)玉林市第一人民醫(yī)院檢驗科 537000)

        ?

        ·論 著·

        免疫比濁法測定抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的臨床應用

        陳浩全1,曾嫚妮2

        (1.廣西壯族自治區(qū)玉林市中西醫(yī)結合骨科醫(yī)院檢驗科 537000;2.廣西壯族自治區(qū)玉林市第一人民醫(yī)院檢驗科 537000)

        目的 評價免疫比濁法檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(CCP)在類風濕關節(jié)炎(RA)診斷中的臨床價值。方法 收集195例RA、105 例骨關節(jié)炎、52例骨質疏松、42例結締組織、40例系統(tǒng)性紅斑狼瘡、305例其他疾病患者,以及90例健康對照者的血清標本,分別使用免疫比濁法(Latex)、化學發(fā)光微粒子免疫法(CMIA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)檢測CCP并比較結果。結果 Latex法檢測RA陽性141例(72.30%),關節(jié)炎陽性54例(51.42%),骨質疏松陽性15例(28.84%),結締組織陽性15例(35.71%),系統(tǒng)性紅斑狼瘡陽性18例(45.0%),其他疾病陽性11例(3.60%),90例健康對照者均為陰性。批內(nèi)變異系數(shù)為1.9%~2.0%,總變異系數(shù)為2.0%~2.1%,Latex法試劑線性范圍為0.8~100 U/mL。Latex法、CMIA法、ELISA法檢測CCP的敏感性和特異性差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論 Latex法檢測CCP的敏感性和特異性好,線性范圍寬,可用于臨床。

        免疫比濁法; 類風濕關節(jié)炎; 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體

        類風濕關節(jié)炎 (RA) 是一種自身免疫疾病,其基本病理改變?yōu)榛ぱ?,由于關節(jié)滑膜炎性和增生,造成關節(jié)軟骨、骨、滑膜破壞,最終導致關節(jié)畸形和功能喪失。關節(jié)滑膜的破壞可在RA發(fā)病3個月內(nèi)出現(xiàn),若未及時治療,部分患者可在2年內(nèi)出現(xiàn)不可逆的骨質破壞。因此RA的早期診斷極其重要。RA的診斷依據(jù)主要是臨床表現(xiàn)、X光線檢查、類風濕因子(RF)檢測[1-2]。但RA早期癥狀隱匿,符合上述標準時患者已出現(xiàn)骨關節(jié)損壞,且RF在其他自身免疫性疾病中也有一定的陽性率,不利于RA的早期診斷和干預治療。近年來,抗瓜氨酸化蛋白抗體(ACPAs)系列的發(fā)現(xiàn)是RA診斷領域新的里程碑,ACPAs在RA的鑒別診斷和病情監(jiān)測中發(fā)揮重要作用[3-4]。在不典型RA患者,尤其是早期和老年RA患者,ACPAs具有重要的診斷意義[5]。目前抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(CCP)檢測多采用實驗時間較長的酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)法,現(xiàn)應用免疫比濁法(Latex)測定CCP抗體,通過與化學發(fā)光微粒子免疫法(CMIA)和ELISA法比較,評價其在RA中的診斷價值及優(yōu)勢。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 選取該院2014年2月至2016年2月的住院和門診患者,所有病例均符合1987年美國風濕病學學會(ACR)的RA分類診斷標準。RA患者195例,骨關節(jié)炎患者105 例,骨質疏松患者52例,結締組織患者42例,系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者40例,其他疾病患者(無自身免疫性疾病及風濕病史)305 例。健康對照者90例,均為該院體檢中心體檢健康者,且無自身免疫性疾病及風濕病史。

        1.2 儀器與試劑 采集所有研究對象的血清標本,2~8 ℃保存,1周內(nèi)完成檢測。Latex法采用德國西門子ADVIA 2400自動生化儀及寧波美康試劑盒;ELISA法使用北京普朗酶標儀及德國歐蒙生物酶聯(lián)免疫試劑盒;CMIA法應用美國雅培i2000自動化學發(fā)光儀及雅培配套試劑盒。

        1.3 檢測方法

        1.3.1 3種檢測方法判斷標準 Latex法檢驗結果大于或等于35 U/mL為陽性,小于35 U/mL為陰性。ELISA法OD<0.8×OD臨界質控為陰性;0.8×OD臨界質控:>OD<1.2×OD臨界質控為可疑,OD>1.2×OD臨界質控為陽性。CMIA法檢驗結果大于等于5 U/mL為陽性,小于5 U/mL為陰性。

        1.3.2 精密度評價 依據(jù)CLSI EP15-A文件標準[6],Latex法試劑分別測定高、低2個水平(濃度約11、85 U/mL)的混合血清,連續(xù)檢測5 d,第5天測4次。計算各水平的批內(nèi)及總變異系數(shù)(CV%),并確認其不精密度范圍是否與廠商標注的相符合。

        1.3.3 線性范圍 采用1例低濃度混合血清(L)和1例高濃度混合血清(H)及生理鹽水(S),按0.25L;0.75S、0.5L;0.5S、1.0L、0.1H;0.9L、0.2H;0.8L、0.3H;0.7L、0.4H;0.6L、0.5H;0.5L、0.6H;0.4L、0.7H;0.3L、0.8H;0.2L、0.9H;0.1L、1.0H,配成13個濃度梯度的混合血清。其預期濃度按公式:X=(CL×VL+CH×VH)/(VL+VH)計算。使用Latex法試劑對混合血清按濃度從低到高各測3次,記錄結果。按照CLSI EP6-A文件標準初步檢查數(shù)據(jù)[7],檢查離群值,判斷重復性,進行多元線性回歸,將結果分別擬合1、2、3次多項式,并繪制散點圖進行評價。

        1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析,計數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示,組間比較使用χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結 果

        2.1 3種方法檢測的符合率結果比較 30例確定為陽性的標本(印跡法確認),Latex法檢測陽性28例(93.3%),CMIA法檢測陽性29例(96.6%),ELISA法檢測陽性27例(90.0%)。30例確認陰性的標本,Latex法檢測陰性28例(93.3%),CMIA法檢測陰性29例(96.7%),ELISA法檢測陰性28例(93.3%)。3種方法的符合率為90.0%。

        2.2 3種方法檢測CCP抗體的敏感性和特異性結果比較 3種方法檢測抗CCP抗體的敏感性和特異性比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

        表1 3種方法檢測CCP抗體的敏感性和特異性結果比較[n(%)]

        2.3 精密度試驗 Latex法試劑的實測精密度小于試劑盒標注的精密度,變異較小,可滿足臨床應用。見表2。

        表2 Latex法試劑的精密度試驗

        2.4 線性范圍評價 Latex法檢測標本濃度范圍為0.8~100 U/mL,無明顯離群值數(shù)據(jù),最佳擬合為一次多項式。Pearson相關性分析顯示,預期值與實測值擬合相關方程中b值為0.95~1.02,a與0無顯著性差異,P=0.264,相關系數(shù)(R2)為0.994,均大于0.975,線性范圍良好。見圖1。

        3 討 論

        Schellekens將1條由19個氨基酸殘基組成的瓜氨酸肽鏈中的2個絲氨酸替換為半胱氨酸,形成與β-轉角具有相似結構的二硫鍵,合成CCP??笴CP抗體陽性率僅略高于RF,可能是由于環(huán)瓜氨酸多肽是在微絲蛋白及其他類似于波形蛋白結構的基礎上人工合成的多肽抗體,比波形蛋白小20倍,抗原決定簇較少,減弱其抗原性,但其特異性可達95%以上[8]??笴CP抗體陽性是侵蝕性關節(jié)損害的一個重要標志及危險因素,聯(lián)合檢測IgM RF和抗CCP抗體能夠提高RA的診斷水平[9]。本研究應用Latex法檢測CCP抗體,通過與CMIA法和ELISA法比較,其敏感性及特異性差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),3種方法的符合率為90.0%,Latex法試劑精密度高,批內(nèi)變異系數(shù)為1.9%~2.0%,總變異系數(shù)為2.0%~2.1%;線性范圍寬(0.8~100 U/mL),能在全自動生化儀上進行快速檢測,值得臨床推廣應用。

        [1]葉荻慶,唐靜.67例臨床標本ANA和RF測定結果分析[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2003,19(12):1517-1518.

        [2]魯然.風濕性關節(jié)炎的實驗室研究與進展[J].中國誤診學雜志,2004,4(6):846-847.

        [3]CordonnierC,MeyerO,PalazzoE,etal.DiagnosticvalueofantiRA33antibodyantikeratinantibody,antiperinuclearfactorandantinuclearantibodyinearlyrheumatoid arthritis comparison with rheumatoid factor[J].Br JR heumato,1996,35(7):620-624.

        [4] Youinou P,Serre G.The antiperinuclear factor and antikeratin antibody Systems[J].Int Arch Allergy Immunol,1995,107(4):508-518.

        [5]Vangaalen FA.Testing for antibodies to cyclic citrullinated peptides and Rheumatoid factor-what is best for early RA[J].Nat Clin Pract Rheumatol,2007,3(9):488-489.

        [6]CLSI.EP15-A User demonstration of performance for preaccuracy[S].Wayne,PA:CLSI,2001.

        [7]CLSI.EP6-A Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures[S].Wayne,PA:CLSI,2003.

        [8] Coenen D,Verschueren P,Westhovens R,et al.Technical and diagnostic perform-Ance of 6 assays for the measurement of citrullinated protein/peptide antibodies in the diagnosis of rheumatoid arthritis[J].Clin Chem,2007,53(3):498-504.

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        The clinical application to detect the anti cyclic citrullinated peptide antibody by immune Turbidimetry

        CHENHaoquan1,ZENGManni2

        (1.DepartmentofLaboratory,OrthopaedicsHospitalofYulinCity,Yulin,Guangxi537000,China;2.DepartmentofLaboratory,theFirstPeople′sHospitalofYulin,Yulin,Guangxi537000,China)

        Objective To evaluate the clinical application value of anti cyclic citrullinated peptide antibody(CCP) by immune turbidity method for the the diagnosis of rheumatoid arthritis (RA).Methods The serum of 195 cases of RA patients,105 cases of osteoarthritis,52 cases of osteoporosis,42 cases of connective tissue,40 patients with systemic lupus erythematosus,305 cases of patients with other diseases and 90 cases of healthy controls were collected,the CCP were detected by latex CMIA and ELISA.Results The CCP positive were 141 cases in RA(72.30%),54 cases(51.42%) in arthritis,15 cases in osteoporosis (28.84%),15 cases in connective tissue(35.71%),18 cases (45.0%) in systemic lupus erythematosus (SLE),11 cases (3.60%) in other diseases.There were negative in 90 cases of healthy controls.The variation coefficient was 1.9%-2.0%,and the total coefficient of variation was 2.0%-2.1%.The linear range of Latex method was divided into 0.8-100 U/mL.There were no diffrence in the sensitivity and specificity of detection to CCP by CMIA,ELISA and Latex.Conclusion The sensitivity and specificity of detection to CCP by Latex was good,and there was wide linear range.

        immunoturbidimetry; rheumatoid arthritis; anti cyclic citrullinated peptide antibody

        陳浩全,男,副主任技師,主要從事臨床生物化學研究。

        10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.021

        A

        1673-4130(2016)20-2857-03

        2016-03-12

        2016-06-21)

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