洪麗萍，張汀，劉變玲，肖愛華

1.鄭州頤和醫(yī)院腎內(nèi)科，河南鄭州　450000；2.復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院腎內(nèi)科，上?！?00032；3.鄭州人民醫(yī)院腎內(nèi)科，河南鄭州　450000

MCP-1在老年IgA腎病患者中的表達(dá)及意義

洪麗萍1，張汀2，劉變玲3，肖愛華1

1.鄭州頤和醫(yī)院腎內(nèi)科，河南鄭州450000；2.復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院腎內(nèi)科，上海200032；3.鄭州人民醫(yī)院腎內(nèi)科，河南鄭州450000

目的 探討單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）在老年IgA腎?。↖gAN）患者腎臟組織、血液、尿液中的水平及意義。方法選取2014年1月—2016年1月在鄭州頤和醫(yī)院接受住院治療的青少年、老年IgAN患者各30例，以及門診體檢健康的青少年、老年人各30名作為健康對(duì)照。根據(jù)所有老年IgAN患者的24 h尿蛋白定量值，將其分為不同的亞組；并根據(jù)Lee組織學(xué)分級(jí)系統(tǒng)將老年IgAN患者分為Ⅰ～Ⅴ級(jí)。采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)腎臟組織中MCP-1表達(dá)，ELISA法檢測(cè)血液及尿液中MCP-1水平。結(jié)果老年IgAN患者腎臟組織、血液、尿液中的MCP-1表達(dá)水平顯著高于青少年IgAN患者（P＜0.05）：0.43%vs 0.40%、（124.32±20.12）pg/mL vs（116.34±16.37）pg/mL、（125.42±19.36）pg/mL vs（110.23±17.42）pg/mL。隨著病情的加重，老年IgAN患者腎臟組織、血液及尿液中MCP-1表達(dá)水平也顯著升高（P＜0.05）。結(jié)論 老年IgAN患者腎臟組織、血液、尿液中的MCP-1表達(dá)水平顯著增加，且與疾病進(jìn)展有關(guān)，可作為輔助老年IgAN診斷及預(yù)后觀察的潛在指標(biāo)。

MCP-1；老年IgA腎病；青少年IgA腎病

腎臟病是中國(guó)的常見病及多發(fā)病，每年每百萬(wàn)人群中有近百人由于各種原因的腎臟疾病進(jìn)展到終末期腎病而危及生命，IgA腎?。↖gAN）是一種最常見的原發(fā)性腎小球疾病，已成為我國(guó)終末期腎病的主要來(lái)源［1］。近年來(lái)，老年人群中的IgAN發(fā)病率逐年升高［2］，而且人口老齡化已成為影響IgAN發(fā)展為終末期腎病的重要因素［3］。單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）是趨化和激活單核巨噬細(xì)胞的重要炎癥因子，可能在I-gAN患者腎小管間質(zhì)病變及腎功能損害中起重要作用［4-5］。但是，老年IgAN患者中的MCP-1水平研究較少。該研究自該院于2014年1月—2016年1月收治的共120例作為研究對(duì)象，其中青少年IgAN、老年I-gAN患者各30例，以及門診體檢健康的青少年、老年人各30名作為健康對(duì)照。通過(guò)研究MCP-1在老年IgAN患者中的表達(dá)水平，可能為老年IgAN診斷及預(yù)后提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1　資料與方法

1.1主要試劑

山羊抗人MCP-1抗體［ab38085 abcam］、生物素化兔抗山羊IgG［yb36243Santa Cruz］，SABC免疫組化試劑盒+DAB顯色劑［cat.no.m5655］。

1.2一般資料

選取2014年1月—2016年1月在該院接受住院治療的青少年（男16例、女14例，年齡15～30歲，平均25.8歲）、老年IgAN患者（男15例、女15例，年齡60～71歲，平均66.5歲）各30例，以及門診體檢健康的青少年（男15名、女15名，年齡15～30歲，平均25.4歲）、老年人（男15名、女15名，年齡60～70歲，平均65.1歲）各30名作為健康對(duì)照。所有IgAN患者均經(jīng)B超引導(dǎo)腎穿刺活檢術(shù)證實(shí)為原發(fā)性IgAN，排除系統(tǒng)性紅斑狼瘡、過(guò)敏性紫癜及各型肝病所致的繼發(fā)性IgAN，且均無(wú)激素、細(xì)胞毒藥物等免疫抑制劑、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI）或血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（ARB）等藥物史。

根據(jù)所有老年IgAN患者的24 h尿蛋白定量值，將其分為不同水平24 h尿蛋白定量亞組，即I組（尿蛋白＜25 mg（24 h·kg）、Ⅱ組（尿蛋白25～50 mg（24 h·kg）和Ⅲ組（尿蛋白＞50 mg（24 h·kg）；并根據(jù)Lee組織學(xué)分級(jí)系統(tǒng)將老年IgAN患者分為Ⅰ～Ⅴ級(jí)。

1.3樣品采集

腎穿刺當(dāng)日抽取空腹血5 mL，并留取第1次新鮮晨尿20 mL，2 000 rpm離心10 min后，分別收集上清液置于-80℃保存?zhèn)溆?。所有腎組織取材時(shí)間均限制在離體后12 h內(nèi)，經(jīng)光鏡及免疫熒光檢查均未見異常后留取備用。

1.4腎組織MCP-1表達(dá)檢測(cè)

所有腎組織標(biāo)本經(jīng)固定、切片，及抗原修復(fù)處理后，依次滴加一抗、二抗孵育。經(jīng)免疫組化SABC試劑，DAB顯色劑處理后，顯微鏡（×100）下觀察染色結(jié)果，并采用Smartscape圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析。每例腎組織切片隨機(jī)選取10個(gè)不重疊視野，測(cè)定并計(jì)算陽(yáng)性面積灰度值的平均值。

1.5血液及尿液MCP-1水平檢測(cè)

采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定血液及尿液中的MCP-1水平，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作。

1.6統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料用（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組比較采用χ2分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1腎臟組織MCP-1表達(dá)分析

比較分析健康青少年（A組）、健康老年人（B組）、青少年IgAN患者（C組）以及老年IgAN患者（D組）腎臟組織中的MCP-1表達(dá)水平。如圖1所示：與A組和B組相比，C組和D組的腎臟組織MCP-1表達(dá)水平均顯著升高 （P＜0.05），且D組顯著高于C組 （P＜0.05）。此外，A組和B組相比，腎臟組織MCP-1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖1　各組腎臟組織MCP-1表達(dá)

2.2血液及尿液MCP-1水平分析

與A組和B組相比，C組和D組的血液及尿液MCP-1水平均顯著升高（P＜0.05），且D組顯著高于C組（P＜0.05）。同樣地，A組和B組相比，血液及尿液MCP-1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1　各組血液及尿液MCP-1水平比較［（±s），pg/mL］

表1　各組血液及尿液MCP-1水平比較［（±s），pg/mL］

注：與A組比較：aP＜0.05；與B組比較：bP＜0.05；與C組比較：cP＜0.05。

組別　血液　尿液A組（n=30）B組（n=30）C組（n=30）D組（n=30）100.56±12.38 98.29±12.26（116.34±16.37）a（124.32±20.12）bc46.85±9.87 43.29±8.73（110.23±17.42）a（125.42±19.36）bc

2.3老年IgAN患者不同水平24 h尿蛋白定量亞組MCP-1表達(dá)水平分析

比較分析不同水平24 h尿蛋白定量亞組腎組織、血液及尿液中的MCP-1表達(dá)水平，結(jié)果分別如圖2，表2所示。隨著老年IgAN患者24 h尿蛋白定量升高，其腎組織MCP-1表達(dá)逐漸增加（圖2。P＜0.05），且血液及尿液中的MCP-1水平也逐漸升高（表2。P＜0.05）。

表2　老年IgAN患者不同水平24h尿蛋白定量亞組血液及尿液MCP-1水平比較［（±s），pg/mL］

表2　老年IgAN患者不同水平24h尿蛋白定量亞組血液及尿液MCP-1水平比較［（±s），pg/mL］

注：與Ⅰ組比較：aP＜0.05；與Ⅱ組比較：bP＜0.05。

組別　血液　尿液Ⅰ組Ⅱ組Ⅲ組104.57±16.59（125.43±20.03）a（127.36±18.42）ab56.78±11.24（84.53±14.32）a（124.64±18.53）ab

圖2　老年IgAN患者不同水平24h尿蛋白定量亞組腎組織MCP-1表達(dá)

2.4老年IgAN患者不同組織學(xué)分級(jí)亞組MCP-1表達(dá)水平分析

比較分析不同組織學(xué)分級(jí)亞組（Ⅰ～Ⅴ級(jí)組）腎組織、血液及尿液中的MCP-1表達(dá)水平，結(jié)果如圖3、表3所示。老年IgAN患者中，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)組腎組織中的MCP-1表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Ⅳ、Ⅴ級(jí)組腎組織中的MCP-1表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而Ⅳ、Ⅴ級(jí)組腎組織MCP-1表達(dá)水平均顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)組（圖3。P＜0.05）。類似地，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)組血液及尿液MCP-1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Ⅳ、Ⅴ級(jí)組血液及尿液MCP-1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而Ⅳ、Ⅴ級(jí)組血液及尿液MCP-1表達(dá)水平顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)組（表3。P＜0.05）。

表3　老年Ig A腎病患者不同組織學(xué)分級(jí)亞組血液及尿液MCP-1水平比較［（±s），pg/mL］

表3　老年Ig A腎病患者不同組織學(xué)分級(jí)亞組血液及尿液MCP-1水平比較［（±s），pg/mL］

注：與Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)組相比：aP＜0.05。

組別　血液　尿液Ⅰ級(jí)Ⅱ級(jí)Ⅲ級(jí)Ⅳ級(jí)Ⅴ級(jí)116.45±20.46 102.32±18.54 106.84±16.73（121.48±16.46）a（126.53±17.34）a48.32±11.23 52.67±12.34 87.56±16.56（110.43±18.53）a（128.63±20.42）a

圖3　老年IgAN患者不同組織學(xué)分級(jí)亞組腎組織MCP-1表達(dá)

3　討論

隨著人口老齡化和腎活檢技術(shù)的發(fā)展，老年腎病患者的檢出比例逐漸增加，已成為影響老年人群生命健康的重要因素。IgAN是我國(guó)老年人群中第二常見的原發(fā)性腎小球疾病［6-7］，其預(yù)后的主要影響因素有高血壓、腎功能不全、蛋白尿、病理分級(jí)等。此外，老齡化也可作為影響IgAN進(jìn)展的危險(xiǎn)因素。

MCP-1是單核巨噬細(xì)胞趨化和激活的主要趨化因子［8］。研究表明，IgAN患者腎小管上皮細(xì)胞可通過(guò)分泌大量的MCP-1，趨化單核巨噬細(xì)胞在腎小管間質(zhì)中的浸潤(rùn)，同時(shí)激活其產(chǎn)生多種促炎細(xì)胞因子及促纖維因子，加重IgAN患者的腎小管間質(zhì)病變及腎功能不全發(fā)展［4，9］，也有觀點(diǎn)認(rèn)為，MCP-1能夠?qū)?xì)胞膜離子泵產(chǎn)生影響，從而改變細(xì)胞鈣濃度，進(jìn)而影響并加重腎小管間質(zhì)纖維化，從而加重IgAN患者腎功能惡化［10］。國(guó)內(nèi)的研究標(biāo)明，IgA腎病組腎組織中，隨間質(zhì)病變加重，表達(dá)MCP-1的細(xì)胞數(shù)量逐漸增加，MCP-1的表達(dá)量隨腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)展逐漸增多，與小管間質(zhì)病變的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)基本一致［11］，與該研究中，老年人與青少年IgAN患者腎臟組織MCP-1水平，血液及尿液中MCP-1水平顯著升高一致。該研究中，老年IgAN患者的MCP-1水平顯著高于青少年IgAN患者，提示MCP-1與老年IgAN患者疾病進(jìn)展有關(guān)，可能與老年患者病程較長(zhǎng)，常合并高血壓、慢性腎功能不全，老年IgAN患者病理改變常伴間質(zhì)損害，腎間質(zhì)纖維化程度比年輕組嚴(yán)重有關(guān)，該研究中患者例數(shù)相對(duì)較少，亦可能存在其他原因需進(jìn)一步研究。蛋白尿、腎小球?yàn)V過(guò)率水平及腎小管萎縮/間質(zhì)纖維化發(fā)生率是影響老年IgAN患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素［12］，該結(jié)論在動(dòng)物模型中也得到驗(yàn)證［13］。因此，該研究進(jìn)一步根據(jù)24 h尿蛋白定量及Lee組織學(xué)分級(jí)對(duì)老年IgAN患者進(jìn)行分組，對(duì)不同亞組間的MCP-1表達(dá)水平進(jìn)行差異比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著老年IgAN患者24 h尿蛋白定量和組織學(xué)分級(jí)的升高，其腎臟組織、血液及尿液中的MCP-1表達(dá)水平均逐漸增加，與國(guó)外研究［14］一致：MCP-1與24 h尿蛋白呈顯著正相關(guān)，可能與大量蛋白尿?qū)δI小管間質(zhì)的作用有關(guān)，蛋白尿可激活小管細(xì)胞膜、小管細(xì)胞基底側(cè)分泌MCP-1.這些研究結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，MCP-1參與老年IgAN患者疾病進(jìn)展。

綜上所述，該研究結(jié)果表明MCP-1水平與老年IgAN患者疾病進(jìn)展有關(guān)，可作為輔助老年IgAN診斷及預(yù)后觀察的潛在指標(biāo)。

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Expression and Significance of MCP-1 in Elderly Patients with IgA Nephropathy

HONG Li-ping1，ZHANG Ting2，LIU Bian-ling3，XIAO Ai-hua1
1.Department of Nephrology，Zhengzhou Yihe Hospital，Zhengzhou，Henan Proivnce，450000 China；2.Department of Renal medicine，Zhongshan Hospital Affiliated to Fudan University，Shanghai，200032 China；3.Department of Renal Medicine，Zhengzhou People's Hospital，Zhengzhou，Henan Province，450000 China

Objective This study mainly investigated the expression of monocyte chemoattractant protein（MCP）-1 in the kidney tissues，blood and urine samples from elderly patients with IgA nephropathy（IgAN），aiming to identify the role of MCP-1 in IgAN.Methods 30 cases of adolescents IgAN patients and 30 cases of elderly IgAN patients from January 2014 to January 2016 in Zhengzhou Yihe hospital were selected.30 cases of healthy adolescents and 30 cases of elderly healthy people as control from the Outpatient physical examination in the same hospital.The elderly patients with IgAN were divided into different subgroups according to the levels of 24 h urine protein excretion and Lee classification.The expression of MCP-1 in kidney tissues was analyzed by immunohistochemistry，while the levels of MCP-1 in blood and urine samples were measured with an enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）kit.Results MCP-1 expression in kidney tissues，or its levels in the blood and urine，from elderly patients with IgAN were significantly higher than those in young patients with IgAN（P＜0.05）：0.43%vs 0.40%、（124.32±20.12）pg/mL vs（116.34±16.37）pg/ mL、（125.42±19.36）pg/mL vs（110.23±17.42）pg/mL。Moreover，in elderly patients with IgAN，the expression or levels of MCP-1 in kidney tissues or blood and urine samples were also increased with the higher（P＜0.05）.Conclusion The expression levels of MCP-1 were significantly increased in elderly patients with IgAN，which was also closely related to the development of IgAN.This study indicated that MCP-1 might be one potential marker for the diagnosis and prognosis of IgAN in elderly patients.

MCP-1；Elderly IgAN；Adolescents IgAN

R743

A

2096-1782（2016）10－0010-04

10.19368/j.cnki.2096-1782.2016.10.010

洪麗萍（1981.12-），女，河南信陽(yáng)人，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：慢性腎炎。

肖愛華（1964.1-），女，河南遂平人，本科，主任醫(yī)師，研究方向：糖尿病腎病，慢性腎臟病一體化治療，E-mail：xah6569@sina.com。

（2016-07-15）