溫憲春，李祖彬，陳德慶，葛斌，鮑紅光，曹維海，劉得水，岳麗玲，劉吉成

1.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院，黑龍江齊齊哈爾161006；2齊齊哈爾市第一醫(yī)院，黑龍江齊齊哈爾161005

乳腺癌組織標(biāo)本庫的創(chuàng)建與管理

溫憲春1，李祖彬1，陳德慶2，葛斌2，鮑紅光1，曹維海2，劉得水1，岳麗玲1，劉吉成1

1.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院，黑龍江齊齊哈爾161006；2齊齊哈爾市第一醫(yī)院，黑龍江齊齊哈爾161005

目的依托齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院三所附屬醫(yī)院和齊齊哈爾市第一醫(yī)院的臨床資源，建立一個(gè)系統(tǒng)的、規(guī)范的乳腺癌組織標(biāo)本庫，為臨床和科學(xué)研究者提供合適數(shù)量的腫瘤標(biāo)本，從而促進(jìn)乳腺癌發(fā)病機(jī)理的研究。方法收集乳腺癌患者手術(shù)切除后的新鮮腫瘤組織，包括腫瘤組織1.5 cm距離的癌旁組織、腫瘤組織和距離腫瘤組織＞5 cm的切緣遠(yuǎn)端非腫瘤組織以及腫瘤患者的全血和血清/血漿標(biāo)本。采用一套信息管理體系對于標(biāo)本進(jìn)行管理，所有的標(biāo)本及其相關(guān)臨床信息資料均錄入數(shù)據(jù)庫，可隨時(shí)調(diào)用和查詢。結(jié)果從2012年6月創(chuàng)建至2015年3月，共收集261例乳腺癌患者新鮮組織；全血和血清共1 989份，全套標(biāo)本者176例。結(jié)論建立了一套系統(tǒng)的，具有一定規(guī)模的乳腺癌組織標(biāo)本資源庫，形成了規(guī)范的管理辦法和建設(shè)規(guī)劃，為今后乳腺癌的基礎(chǔ)與臨床研究提供物質(zhì)與信息資源。

乳腺癌；組織標(biāo)本庫；數(shù)據(jù)庫

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，且其發(fā)病率和病死率仍在逐年增加，在女性腫瘤中居首位［1-2］。因此，有關(guān)乳腺癌細(xì)胞和動(dòng)物模型成為了乳腺癌研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域，如果乳腺癌腫瘤標(biāo)本建設(shè)不夠完善，會導(dǎo)致臨床資源的巨大浪費(fèi)，為了提高腫瘤標(biāo)本資源管理效率，及時(shí)為科研提供優(yōu)質(zhì)的，足夠數(shù)量的標(biāo)本，齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院依托三所附屬醫(yī)院和齊齊哈爾市第一醫(yī)院的臨床資源優(yōu)勢，于2012年6月組建乳腺癌組織標(biāo)本庫，收集乳腺癌患者的腫瘤組織標(biāo)本、全血、血清和血漿，探索了一條規(guī)范化的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、儲存和管理辦法［3-5］，為今后開展腫瘤科學(xué)研究工作提供服務(wù)平臺。

1 乳腺癌組織標(biāo)本庫的建立

1.1 標(biāo)本來源及倫理問題

由齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院三所附屬醫(yī)院和齊齊哈爾齊市第一醫(yī)院收治，經(jīng)各院病理科確診為乳腺癌的患者。在收集患者標(biāo)本之前，對標(biāo)本采集以及意義進(jìn)行說明，必須得到患者以及患者家屬的知情同意書，經(jīng)齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院倫理委員會批準(zhǔn)，并與相對應(yīng)的病理科和臨床科室進(jìn)行統(tǒng)一管理和協(xié)商，保證在病理診斷的基礎(chǔ)上收集標(biāo)本［6］。

1.2 主要儀器設(shè)備

-80℃超低溫冰箱（美國Thermo），-150℃超低溫冰箱（海爾），并連接溫度監(jiān)控報(bào)警系統(tǒng)；-20℃冰箱（美菱）；液氮罐（四川金鳳低溫設(shè)備公司）；醫(yī)用離心機(jī)（北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司）；生物安全柜、取材器械、信息管理軟件、二維條碼打印機(jī)及相關(guān)匹配的聯(lián)想電腦等。

1.3 標(biāo)本收集和處理

1.3.1 組織標(biāo)本收集、處理及保存在手術(shù)室內(nèi)臨床醫(yī)生選擇相應(yīng)的病例。在不影響病理診斷取材的情況下，腫瘤組織離體后30 min內(nèi)，按腫瘤、瘤旁和切緣遠(yuǎn)端非腫瘤組織區(qū)分，分別切取4～6塊組織（約為0.5 cm×0.5 cm×3 cm），在已經(jīng)標(biāo)記好二維碼的凍存管放入組織并置于液氮中處理30 min，然后再置放于-80℃超低溫冰箱儲存同時(shí)，切取一小塊組織采用石蠟包埋，蠟塊編號，分類存放。

1.3.2 血液標(biāo)本的收集、處理和保存根據(jù)臨床醫(yī)生選擇的病例，在此病例中收集患者血液標(biāo)本。采血分為抗凝血和非抗凝血各5 mL，2 h內(nèi)將非抗凝血分離血清，200 μL/管分裝，連同抗凝血（即全血）經(jīng)二維條碼打印機(jī)標(biāo)記，放置于在-80℃超低溫冰箱儲存［7］。

1.4 標(biāo)本的質(zhì)量控制

1.4.1 腫瘤采取的準(zhǔn)確性所有標(biāo)本均經(jīng)病理專業(yè)技術(shù)人員判定，確保腫瘤癌旁組織和腫瘤組織以及切緣遠(yuǎn)端非腫瘤組織的正確采集，明確區(qū)分腫瘤組織與非腫瘤組織，采集者部分組織時(shí)，均要注意腫瘤組織的大小、形態(tài)、數(shù)量、硬度、顏色等因素，確保采集各種組織的質(zhì)量。

1.4.2 血液標(biāo)本的質(zhì)量本研究評價(jià)血液標(biāo)本質(zhì)量均采用血液管理質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，主要包括：①標(biāo)本是否出現(xiàn)溶血或者脂血甚至出現(xiàn)黃疸。②確保血液標(biāo)本達(dá)到血液量的標(biāo)準(zhǔn)，保證足量；③標(biāo)本不能出現(xiàn)凝血。

1.4.3 控制標(biāo)本的離體時(shí)間有專人定時(shí)到手術(shù)室內(nèi)收集新鮮的腫瘤組織標(biāo)本，保證時(shí)間控制在標(biāo)本離體時(shí)間在30 min內(nèi)，在采取標(biāo)本和轉(zhuǎn)運(yùn)過程中避免腫瘤組織、癌旁組織以及切緣遠(yuǎn)端非腫瘤組織相互污染，注意避免基因組DNA、RNA和蛋白的降解。

1.4.4 標(biāo)本的控制與抽查每日巡查溫度監(jiān)控系統(tǒng)的記錄值，定期檢測低溫冰箱的報(bào)警系統(tǒng)，確保組織標(biāo)本和血液標(biāo)本的存放環(huán)境，定期采用隨機(jī)方式抽取樣本，提取基因組DNA、RNA和蛋白，采用紫外分光光度計(jì)測量樣本的濃度和純度。

2 標(biāo)本庫的日常規(guī)范化管理

2.1 數(shù)據(jù)庫管理

在信息化支持方面，引進(jìn)了信息化管理軟件，這為信息化建設(shè)提供了信息平臺，數(shù)據(jù)庫主要包括：①患者的個(gè)人資料，包括患者性別、年齡、家庭收入、職業(yè)等基本資料，臨床資料和病理診斷，行為生活方式等病例資料。②臨床診斷信息：血常規(guī)、胸部CT、血生化等臨床檢查指標(biāo)。③標(biāo)本信息：標(biāo)本編號、日期、腫瘤部位、病變部位和病理類型等信息。④使用管理登記：包括出庫編號、日期、使用人及使用單位和審批人（經(jīng)學(xué)院主管領(lǐng)導(dǎo)和標(biāo)本庫負(fù)責(zé)人審批后才可使用），登記使用數(shù)量。

2.2 標(biāo)本庫的管理

通過排班制度，專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的收集、存儲和出庫工作，定期巡查設(shè)備的運(yùn)行狀態(tài)［8］。標(biāo)本庫專業(yè)技術(shù)人員保持與各醫(yī)院手術(shù)科室、手術(shù)室、病案室密切聯(lián)系，學(xué)院主管領(lǐng)導(dǎo)定期與各所醫(yī)院及時(shí)溝通，保證標(biāo)本收集工作順利進(jìn)行。

3 結(jié)果

自2012年6月乳腺癌組織標(biāo)本庫建庫以來，積極與各所醫(yī)院相關(guān)科室進(jìn)行密切聯(lián)系和溝通，盡可能第一時(shí)間收集新鮮的乳腺癌組織標(biāo)本。截至2014年3月份新鮮乳腺癌組織標(biāo)本261例，其中導(dǎo)管內(nèi)癌32例，小葉原位癌10例，浸潤性導(dǎo)管癌166例，浸潤性小葉癌53例全血和血清共1989份，其中全套標(biāo)本（即同例患者同時(shí)具有全血、血清和組織標(biāo)本）有187例，見表1和表2。

同時(shí)該院引進(jìn)標(biāo)本庫信息數(shù)據(jù)管理軟件，將標(biāo)本庫管理進(jìn)入信息化管理模式，到目前為止，標(biāo)本庫已經(jīng)提供組織標(biāo)本75份，這些標(biāo)本所提取DNA、RNA及蛋白質(zhì)量，效果良好。

表1 乳腺癌組織標(biāo)本庫的構(gòu)成表（例）

表2 乳腺癌組織標(biāo)本庫血液樣本數(shù)（份）

4 討論

根據(jù)臨床數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)乳腺癌已經(jīng)成為女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，且患病人數(shù)呈現(xiàn)逐年增加的趨勢。目前，隨著手術(shù)技術(shù)的成熟和放療化療技術(shù)的發(fā)展，均提高了早期乳腺癌患者的生存率，但是晚期或者是復(fù)發(fā)患者的治療仍然是臨床工作的難題，仍居女性因癌癥死亡原因之首［9］。近年來，乳腺癌的基因治療和靶向藥物成為了研究主要發(fā)展對象，在這樣的基礎(chǔ)上，更需要乳腺癌標(biāo)本庫的建立為臨床研究工作提供足夠數(shù)量和質(zhì)量的標(biāo)本［10］。

乳腺癌組織標(biāo)本庫創(chuàng)建為開展乳腺癌疾病發(fā)病機(jī)理及臨床治療研究具有重要意義。雖然腫瘤的研究技術(shù)蓬勃發(fā)展，乳腺癌已經(jīng)成為腫瘤研究中的重點(diǎn)領(lǐng)域，但是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞株的研究均具有一定的局限性，而人的自身組織是研究腫瘤工作的有效途徑。因此建立一定規(guī)模和規(guī)范化管理的標(biāo)本庫成為了這些研究的基礎(chǔ)。國外已經(jīng)建立起了腫瘤組織庫和規(guī)范化的管理模式［11］，而我國也緊跟國際步伐建立起了腫瘤標(biāo)本庫，國內(nèi)一些大學(xué)、醫(yī)院及科研單位已經(jīng)建立或開始籌備腫瘤組織標(biāo)本庫，如北京大學(xué)、華西醫(yī)科大學(xué)及廣州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院等［7，12-13］。目前東北地區(qū)尚沒有一所院?；蚩蒲袉挝唤⒊梢?guī)模的組織標(biāo)本庫。因此，齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院于2012年6月以學(xué)校牽頭，各所附屬醫(yī)院和齊齊哈爾第一醫(yī)院醫(yī)院臨床科室、病理科和手術(shù)室協(xié)助，籌建了符合臨床科室和科學(xué)研究的乳腺癌標(biāo)本庫從而整合了各所醫(yī)院寶貴的臨床標(biāo)本資源。標(biāo)本庫的建立一方面主要從以下幾個(gè)部分嚴(yán)把質(zhì)量關(guān)：從標(biāo)本的采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、儲存、抽檢、管理和出入庫的規(guī)范化管理模式，以滿足科學(xué)研究的需要。另一方面嚴(yán)格按照標(biāo)本庫的規(guī)章制度進(jìn)行管理，必須專人管理，負(fù)責(zé)取材、處理、入庫、編號及出庫等信息處理，以保證樣本的均一性。

高質(zhì)量的人體標(biāo)本是乳腺癌分子生物學(xué)及臨床研究的先決條件。標(biāo)本庫必須具有規(guī)范統(tǒng)一的取材標(biāo)準(zhǔn)及定期的質(zhì)量控制，才能保證標(biāo)本的有效性及穩(wěn)定性。因此建立規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化乳腺癌組織標(biāo)本庫不僅可以充分保護(hù)、合理利用臨床資源，而且可為基礎(chǔ)和臨床研究提供高質(zhì)量的服務(wù)平臺。

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Construction and Management of Breast Cancer Tissue Specimen Bank

WEN Xian-chun1，LI Zu-bin1，CHEN De-qing2，GE Bin2，BAO Hong-guang1，CAO Wei-hai2，LIU De-shui1，YUE Li-ling1，LIU Ji-cheng1
1.Qiqihar Medical College，Qiqihar，Heilongjiang Province，161006 China；2.Qiqihar First Hospital，Qiqihar，Heilongjiang Province，161005 China

Objective To establish a systematical and standardized breast cancer tissue specimen bank based on the clinical resources of Third Affiliated Hospital of Qiqihar Medical School and Qiqihar First Hospital and provide a suitable number of tumor specimens for clinical and scientific researchers thus promoting the research of breast cancer pathogenesis.Methods The fresh tumor tissues of the patients with breast cancer after resection were collected，including the peritumoral liver tissues at 1.5cm from the tumor tissues，tumor tissues and incisal margin distal non-tumor tissues at＞5 cm from the tumor tissues and whole blood，serum/plasma specimens of the tumor patients，and the specimens were managed by a set of information management system，and all specimens and related clinical information data were input into the database，and could be invoked and inquired.Results From June 2012 to March 2015，261 cases of fresh tissues of patients with breast cancer and 1989 pieces of whole blood and serum and 176 cases of full set of specimens were collected.Conclusion The establishment of a set of systematical breast cancer tissue specimen resource bank with a certain scale and formation of standardized management method and construction plan can provide material and information resources for the basic and clinical research of breast cancer in future.

Breastcancer；Tissuespecimenbank；Database

R737.9

A

1672-5654（2016）10（c）-0008-04

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.30.008

2016-07-24）

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No.81202084）；齊齊哈爾市科學(xué)技術(shù)項(xiàng)目（No.SFGG-201201）。

溫憲春（1980-），男，黑龍江哈爾濱人，碩士，實(shí)驗(yàn)師，研究方向：糖尿病和抗腫瘤。

劉吉成（1958.5-），男，黑龍江勃利人，醫(yī)學(xué)博士，教授，研究方向：腫瘤發(fā)病機(jī)制，E-mail：qqybliu@126.com。