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        新生兒退黃中藥洗液對(duì)溶血性黃疸大鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究

        2016-11-18 00:34:22王艷寧朱世龍吳曙粵
        中國(guó)民族民間醫(yī)藥 2016年20期
        關(guān)鍵詞:溶血性洗液黃疸

        王艷寧 朱世龍 吳曙粵

        廣西醫(yī)科大學(xué)附屬南寧市第一人民醫(yī)院,廣西 南寧 530022

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        實(shí)驗(yàn)研究

        新生兒退黃中藥洗液對(duì)溶血性黃疸大鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究

        王艷寧 朱世龍 吳曙粵*

        廣西醫(yī)科大學(xué)附屬南寧市第一人民醫(yī)院,廣西 南寧 530022

        目的:分析新生兒退黃中藥洗液對(duì)乙酰苯肼(APH)所致大鼠溶血性貧血模型的退黃作用。方法:50只大鼠隨機(jī)分為正常組(10只)和APH處理組(40只)。將APH 150 mg/kg腹腔注射大鼠,48h后經(jīng)APH處理的大鼠隨機(jī)分為陽(yáng)性對(duì)照組及新生兒退黃中藥洗液高、中、低劑量組(藥液分別稀釋5、10、50倍),每組10只。正常組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠每天給予自來(lái)水泡浴,洗液組予洗液泡浴15min,連續(xù)3 d。泡浴結(jié)束后摘眼球取血測(cè)定大鼠血清總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽汁酸(TBA);并觀察大鼠心肝肺腎的生理形態(tài)。結(jié)果:APH處理組大鼠肝功能受損,肝臟組織切片示肝血竇有擴(kuò)張、充血及肝總管內(nèi)鐵血黃素淤積、膽紅素淤積的程度較正常組高,心肺腎組織無(wú)明顯變化;血清肝功能各項(xiàng)指標(biāo)較正常組明顯升高(P<0.01)。各濃度退黃外洗液組與陽(yáng)性對(duì)照組比較,血清肝功能指標(biāo)均下降并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),但組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論:新生兒退黃中藥洗液對(duì)APH所致的大鼠溶血性黃疸均有退黃、降酶作用,各濃度組效果相當(dāng),且對(duì)心肝肺腎無(wú)組織損害。

        新生兒退黃中藥洗液;乙酰苯肼;大鼠;溶血性黃疸模型

        新生兒退黃中藥洗液來(lái)源于我院吳曙粵主任醫(yī)師多年臨床經(jīng)驗(yàn)方,該方主要成分為茵陳、大黃、山梔子、柴胡等15味中藥組成,有利膽、消炎、保肝、退黃作用[1],并獲國(guó)家發(fā)明專利(專利號(hào):Zl200510019562.1)。臨床上泡浴用于新生兒黃疸患兒,取得了良好效果[2],研究以乙酰苯肼(APH)腹腔注射大鼠制成溶血性黃疸模型,通過(guò)檢測(cè)經(jīng)新生兒退黃中藥洗液泡浴后溶血性黃疸大鼠的血清肝功能的相關(guān)指標(biāo)血清總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽汁酸(TBA)的水平并觀察心肝肺腎等組織的病理變化,探討洗液對(duì)溶血性黃疸大鼠的退黃利膽作用。

        1 儀器與材料

        1.1 動(dòng)物 健康SD大鼠50只,雌雄不分,體質(zhì)量(200±20)g,由廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,合格證號(hào)SCXK桂2009-0002,廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心恒溫飼養(yǎng),自由飲水并喂標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料。

        1.2 藥物 新生兒退黃中藥洗液(自制,登記號(hào)為20120412,250mL/瓶),分別將新生兒退黃中藥洗液原液(生藥量為3g/mL)稀釋為5倍、10倍、50倍,制成高、中、低濃度洗液,即濃度分別為600mg/mL、300mg/mL、60mg/mL。

        1.3 儀器 日立7600全自動(dòng)生化分析儀;DT5-3離心機(jī)(北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司);JY5002電子天平(上海志榮電子科技有限公司);Excelsior ES型自動(dòng)脫水機(jī)、Finesse325切片機(jī)(英國(guó)珊頓公司); YB-6LF冷凍包埋機(jī)、YR-14染色機(jī)(湖北亞光公司); BA400型光學(xué)顯微鏡(中國(guó)Motio公司)。

        1.4 試劑 乙酰苯肼(批號(hào):120929,天津市大茂化學(xué)試劑廠);總膽紅素測(cè)定試劑盒-TBIL(批號(hào):17066)、直接膽紅素測(cè)定試劑盒-DBIL(批號(hào):16932)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒-ALT(批號(hào):27031)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒AST(批號(hào):26026)、總膽汁酸測(cè)定試劑盒-TBA(批號(hào):10089)均購(gòu)自德國(guó)DiaSys公司。

        2 方法

        2.1 動(dòng)物分組與造模 50只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后,隨機(jī)分為正常組(10只)和乙酰苯肼處理組(40只)。將乙酰苯肼[3](APH)150 mg/kg腹腔注射大鼠,48h后[4]經(jīng)乙酰苯肼處理后的大鼠成為紅細(xì)胞氧化性溶血黃疸大鼠,再將這40只溶血性黃疸大鼠隨機(jī)分為陽(yáng)性對(duì)照組(10只)、新生兒退黃中藥洗液高、中、低劑量組,每組10只。各洗液組給予38℃高、中、低濃度洗液1 000mL泡浴15min,1次/d,連續(xù)3d;正常組和陽(yáng)性對(duì)照組給予等容積38℃自來(lái)水泡浴15min,1次/d,連續(xù)3d。

        2.2 血清肝功能檢測(cè) 各組大鼠第三天藥浴或水浴結(jié)束1h后眼球取血2mL,用離心機(jī)3000r/min離心10 min,分離血清。按試劑盒說(shuō)明書操作(TBIL/DBIL的測(cè)定使用釩酸鹽氧化法,ALT/AST使用底物法,TBA使用酶循環(huán)法),用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA的活性。另間接膽紅素(IBIL)=TBIL-DBIL。

        2.3 心肝肺腎肝組織形態(tài)的觀察 經(jīng)眼球取血的大鼠立即處死,摘取心、肝、肺、腎臟,分別切取1.0cm×0.8cm×0.3 cm 心、肝、肺、腎組織1 塊,10%中性甲醛固定1周,逐級(jí)酒精脫水、二甲苯透明、浸臘、包埋、切片,片厚6μm,采用HE 染色方法,光鏡觀察各切片的組織形態(tài)。

        心臟切片觀察有無(wú)心肌細(xì)胞壞死;腎臟切片觀察腎小球、腎小管的形態(tài)結(jié)構(gòu)是否正常,腎小管內(nèi)是否為膽紅素管型;肝臟切片觀察肝細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)是否正常,膽管(肝管)是否有膽汁淤積,肝血竇中是否有擴(kuò)張、充血、含鐵血黃素淤積以及膽紅素的淤積。肺臟切片觀察肺間質(zhì)是否有充血、水腫以及肺泡隔是否有充血。并以輕、中、重度作為量化指標(biāo)。

        3 結(jié)果

        3.1 大鼠肝功能變化 經(jīng)乙酰苯肼造模后大鼠(陽(yáng)性對(duì)照組、洗液各組)的血清肝功能指標(biāo)TBIL、DBIL、IBIL、AST、ALT、TBA 均較正常組明顯升高(P<0.01),且以間接膽紅素升高為主;高、中、低濃度洗液組血清TBIL、DBIL、IBIL、AST、ALT、TBA低于陽(yáng)性對(duì)照組(P<0.05),并高于正常組(P<0.05),組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

        表1 新生兒退黃中藥洗液對(duì)ANT致大鼠溶血性黃疸模型肝功能的影響 ±s,n=10)

        注:與正常組相比,△P<0.01;與陽(yáng)性對(duì)照組相比,*P<0.05。

        3.2 大鼠各組織病理切片的結(jié)果 各組大鼠的心臟、肺臟、腎臟肉眼未見明顯病變,鏡下組織切片亦未見異常:心肌細(xì)胞無(wú)壞死;腎小球、腎小管的形態(tài)結(jié)構(gòu)正常,無(wú)膽紅素管型;肺臟肺間質(zhì)無(wú)充血、水腫、肺泡隔無(wú)充血。在肝臟的組織病理比較中,除陽(yáng)性對(duì)照組的肝臟肉眼可見輕微腫脹外,其余各組的肝臟肉眼未見明顯異常。陽(yáng)性對(duì)照組肝臟組織切片鏡下見肝組織結(jié)構(gòu)有明顯損害:肝血竇有輕中度擴(kuò)張、充血;肝、膽管、肝管細(xì)胞及間隙見有棕黃色溶血浸潤(rùn)(示有鐵血黃素淤積以及膽紅素的淤積)。而正常組、洗液高、中、低濃度組則未見明顯的肝血竇擴(kuò)張和充血、無(wú)鐵血黃素淤積。見圖1。

        4 討論

        APH誘導(dǎo)的大鼠溶血性黃疸是常見的造模方法。APH是強(qiáng)氧化劑,通過(guò)干擾還原型谷胱甘肽的生成使紅細(xì)胞膜的穩(wěn)定性遭到破壞致溶血性黃疸[5-6]。實(shí)驗(yàn)中,陽(yáng)性對(duì)照組血清的ALT,AST,TBIL 含量較正常組均顯著升高(P<0.01),并以間接膽紅素升高為主。另外,在肝組織病理切片可見陽(yáng)性對(duì)照組的肝血竇擴(kuò)張,充血明顯,鐵血黃素淤積程度較正常組明顯,表明造模成功。通過(guò)動(dòng)物模型,可從機(jī)理探討疾病病理生理變化與中醫(yī)證候特征之間的關(guān)系[7],并進(jìn)行了以APH 150mg/kg腹腔注射大鼠,取得良好的效果,實(shí)驗(yàn)中無(wú)大鼠的死亡。

        經(jīng)高、中、低濃度洗液組干預(yù)后的黃疸大鼠血清TBIL、DBIL、IBIL、AST、ALT、TBA含量均明顯低于陽(yáng)性對(duì)照組(P<0.05),但仍與正常組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),表明洗液可降低APH所致的血清肝功能損害,降低黃疸水平,但未能根本糾正。各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),說(shuō)明實(shí)驗(yàn)中選擇的3種濃度新生兒退黃洗液均有效,其退黃效果相當(dāng)。另外各洗液組大鼠心肺腎組織切片均示為正常組織,表明洗液安全,對(duì)大鼠的心肺腎臟無(wú)明顯毒性損害。并可減輕溶血性黃疸大鼠的鐵血膽紅素的淤積。其退黃機(jī)理可能與模型大鼠通過(guò)藥液泡浴,藥物透皮吸收,進(jìn)入體循環(huán)而降低大鼠膽紅素、改善肝功能的作用有關(guān)。

        新生兒退黃中藥洗液中主要成分為茵陳、大黃、梔子和甘草等,具有利濕退黃、疏肝理氣、通便活血等作用。茵陳具有抗脂質(zhì)過(guò)氧化和防止肝細(xì)胞壞死及肝脂肪變性的作用[8]。大黃通過(guò)減少膽汁酸及其他有害物質(zhì)在肝臟中的蓄積,起到保肝利膽的作用[9]。茵陳、梔子可通過(guò)還原組織中活性氧簇、誘導(dǎo)膽紅素產(chǎn)生限速酶血紅素加氧酶-1(HO-1)水平上調(diào)等機(jī)制達(dá)到減少膽紅素產(chǎn)生、抗氧化作用,并可改善肝損害[10]。通過(guò)泡浴的方式,洗液中有效成分通過(guò)皮膚吸收,達(dá)到促進(jìn)膽汁分泌及排泄,降低膽紅素的功效。

        綜上所述,新生兒退黃中藥洗液通過(guò)促進(jìn)大鼠血清膽紅素代謝排出、保肝利膽從而達(dá)到退黃的作用。

        [1]高桂娥,吳曙粵,黃仕孫,等.新生兒退黃外洗液的制備及臨床療效觀察[J].中成藥,2006,28(11):附4-5.

        [2]吳曙粵,王艷寧,高桂娥,等.新生兒退黃中藥外洗液的臨床開發(fā)研究[J].廣西醫(yī)學(xué),2009,31(12):1755-1759.

        [3]劉春芳,喬利,王艷偉,等.黃連和小檗堿對(duì)大鼠紅細(xì)胞氧化性溶血及其抗氧化系統(tǒng)的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué),2010,16(6):156-159.

        [4]程生輝,張妍妍,李會(huì)芳,等.基于黃疸模型大鼠的梔子苷急性肝腎毒性研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué),2015,21(4):174-178.

        [5]杜先婕,宋林奇,謝人明,等.復(fù)方阿膠漿對(duì)乙酰苯肼所致小鼠溶血性貧血模型的實(shí)驗(yàn)研究[J].中成藥,2009,31 (5):790-793.

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        [9]傅興圣,陳菲,劉訓(xùn)紅,等.大黃化學(xué)成分與藥理作用研究新進(jìn)展[J].中國(guó)新藥雜志,2011,(16): 1534-1538,1568.

        [10]游偉良,平其能,孫敏捷,等. 梔子苷的藥理學(xué)研究新進(jìn)展[J].藥學(xué)進(jìn)展,2012,36(4) :158-162.

        (編輯:陶希睿)

        2016-07-29

        廣西科學(xué)研究技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(桂科自0832278),廣西科技廳科技攻關(guān)項(xiàng)目(桂科攻1298003-6-7)。

        王艷寧(1971-),女,副主任藥師,主要從事臨床藥學(xué)研究。E-mail:523657993@qq.com

        吳曙粵(1963-),男,主任醫(yī)師,教授,碩士生導(dǎo)師,主要從事醫(yī)院管理,兒科學(xué)等。E-mail:wushuyue@163.com

        R285.5

        A

        1007-8517(2016)20-0006-03

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