楊克禮，楊年信，田永祥，田云華，段正贏，郭 銳，王文麗，米選高

（1. 湖北省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，動物胚胎工程與分子育種湖北省重點實驗室，湖北 武漢　430064；2. 鄂西山區(qū)畜牧獸醫(yī)局，湖北 鶴峰　445800）

鄂西山區(qū)豬圓環(huán)病毒2型感染的血清學調(diào)查

楊克禮1*，楊年信2，田永祥**，田云華2，段正贏1，郭 銳1，王文麗2，米選高2

（1. 湖北省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，動物胚胎工程與分子育種湖北省重點實驗室，湖北 武漢430064；2. 鄂西山區(qū)畜牧獸醫(yī)局，湖北 鶴峰445800）

為了解鄂西山區(qū)豬群中豬圓環(huán)病毒2型的感染情況，應用ELISA方法對鄂西山區(qū)2013-2015年間的1260份不同年齡段的豬血清進行PCV2抗體檢測，同時檢測了PRRSV、PRV gE及CSFV抗體，結(jié)果表明PCV2抗體檢測平均陽性率為56.75 %（715/1260），不同豬群的檢測結(jié)果表明，公豬的PCV2抗體陽性率最低為20 %（4/20），保育豬PCV2抗體陽性率最高為66.67 %（204/306）；全部未免疫PRRSV疫苗豬的PRRSV抗體平均陽性率為48.45 %（344/710），PRV gE抗體平均陽性率為23.73 %（299/1260），而CSFV免疫抗體平均陽性率僅為71.35 %。同時發(fā)現(xiàn)PCV2抗體感染率高的豬場PRRSV、PRV的感染率也相對較高，而CSFV的免疫抗體陽性率則相對較低。本研究結(jié)果表明PCV2感染在鄂西山區(qū)豬群中普遍存在，且與PRRSV、PRV的感染具有一定的相關(guān)性。

PCV2；抗體；ELISA；混合感染

豬圓環(huán)病毒（Porcine Circovirus， PCV）在病毒分類上屬于圓環(huán)病毒科（Circoviridae）圓環(huán)病毒屬（Circovirus），是一種環(huán)狀、無囊膜的單股DNA病毒［1］，包括豬圓環(huán)病毒1型（PCV1）和豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）兩個基因型，其中PCV1對豬無致病性，PCV2是嚴重危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重要病原之一［2］。PCV2主要感染6～12周齡豬，臨床表現(xiàn)為體質(zhì)下降、消瘦、皮膚發(fā)白、腹瀉、呼吸困難，有的豬有黃疸。PCV2感染一般不會直接引起豬的死亡，主要是引起豬體的免疫抑制［3，4］。由于PCV2能破壞豬體的免疫系統(tǒng)，造成免疫抑制，因而本病常與豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病毒、豬肺炎支原體、多殺性巴氏桿菌和鏈球菌等混合或繼發(fā)感染［5］。PCV2及其相關(guān)聯(lián)的豬病已在全世界范圍內(nèi)發(fā)生和流行，死亡率10 %～30 %不等。較嚴重的地區(qū)，豬場在暴發(fā)本病時死淘率高達40 %左右，其危害和造成的重大經(jīng)濟損失顯而易見，現(xiàn)已被公認為世界重要的豬傳染?。?，7］。

近年來，PCV2的發(fā)生呈上升趨勢，其危害除自身引起的免疫抑制以外，還容易繼發(fā)、并發(fā)其他一系列疾病，給我國乃至世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失。為了解鄂西山區(qū)PCV2的感染及與其他疫病的混合感染情況，本研究利用ELISA方法對2013年～2015年間采自鄂西山區(qū)不同養(yǎng)殖場的1 260份豬血清進行了PCV2抗體檢測，并對該豬瘟抗體、豬繁殖與呼吸綜合征抗體及豬偽狂犬病抗體進行了檢測，旨在了解鄂西山區(qū)PCV2的感染及其他疫病的感染與免疫情況，為鄂西山區(qū)PCV2的綜合防控提供理論依據(jù)，為進一步促進鄂西山區(qū)養(yǎng)豬業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展提供技術(shù)支持。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1豬血清樣本的收集

本研究于2013年～2015年間，在鄂西山區(qū)鄂西山區(qū)隨機選擇20個豬場（均未免疫商品化豬圓環(huán)病毒疫苗），按5 %的比例隨機采集不同年齡段豬的血液樣品。血液采自豬耳靜脈或前腔靜脈，分離血清，4 ℃保存?zhèn)溆没蛄⒓催M行ELISA檢測。

1.1.2檢測所用試劑盒

PCV2抗體檢測試劑盒為本實驗室利用原核表達的PCV2 cap蛋白作為抗原包被酶標板制備的試劑盒；豬偽狂犬病gE抗體檢測試劑盒、豬瘟病毒抗體檢測試劑盒、豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒均為美國IDEXX公司產(chǎn)品，購于北京愛德士元亨生物科技有限公司。

1.2檢測方法

劉靈生與第一任妻子分手了。兩人也沒有什么大矛盾，只是在吃雞蛋的問題上有點分歧。劉靈生主張?zhí)焯煲噪u蛋，每天都不可缺。妻子不這樣認為。她說，固然雞蛋要經(jīng)常吃，但經(jīng)常吃不等于天天吃。這天已經(jīng)吃了鵝蛋，還一定要吃雞蛋嗎？這天已經(jīng)吃了鴨蛋，還一定要吃雞蛋嗎？這天已經(jīng)吃過鳳凰蛋，還一定要吃雞蛋嗎？這天去人家作客，也要人家吃雞蛋？這不合人之常情嘛。劉靈生想，我說過多少次了，你這種認識不對，你怎么還么說？你太固執(zhí)了！與你這樣固執(zhí)的人真的無法一起過！

PCV2抗體檢測按如下步驟進行：

（1）樣品處理：將全血樣品4 000 rpm離心10 min，取上清備用；

（2）樣品稀釋：在血清稀釋板中按1∶2的體積稀釋待檢血清樣品（100 μL樣品稀釋液中加50 μL待檢血清樣品）；

（3）對照稀釋：在血清稀釋板中按1∶2分別稀釋陽性對照和陰性對照（100 μL樣品稀釋液中加50 μL對照血清）；

（4）取抗原包被板（根據(jù)樣品多少，可拆開分多次使用），分別將稀釋好的待檢血清樣品和對照血清各取100 μL加入到抗原包被板孔中。同時設(shè)2孔陰性對照、2孔陽性對照，輕輕混勻孔中樣品（勿溢出），置37 ℃下孵育90 min；

（5）棄去孔中的液體，每孔加入200 μL洗滌液，每次靜置3 min，棄去洗滌液，并在吸水紙上拍干，共計洗板5次；

（6）每孔加酶標記物100 μL，置37 ℃下孵育20 min，洗滌5次；

（8）每孔加終止液1滴（約50 μL），混勻后10 min內(nèi)測定結(jié)果。

結(jié)果判定：在酶標儀上測各孔OD630值。試驗成立的條件是陰性對照孔平均OD630值與陽性對照平均OD630值之差≥0.3；確定樣品OD630≥0.45時，判定為陽性，OD630＜0.45時，判定為陰性。

豬偽狂犬病gE抗體、豬瘟病毒抗體和豬繁殖與呼吸綜合征抗體的檢測均按試劑盒說明書進行。

2　結(jié)果

2.1不同豬場的PCV2抗體檢測結(jié)果

對2013年～2015年采自鄂西山區(qū)20個豬場的1 260份血清樣品進行PCV2抗體檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有被檢豬場均存在PCV2感染，豬場的抗體陽性率為100 %（20/20），全部豬的PCV2抗體平均陽性率為56.75 %（715/1 260），其中PCV2抗體陽性率最高的達77.97 %（46/59），最低的為35 %（21/60），見表1。

2.2不同豬群的PCV2抗體檢測結(jié)果

不同豬群的PCV2抗體陽性率檢測結(jié)果表明，公豬的陽性率為20 %（4/20），母豬為21.67 %（26/120），育肥豬為53.46 %（139/260），保育豬為66.67 %（204/306），哺乳仔豬為61.73 %（342/554）（表2）。由此可知，鄂西山區(qū)保育豬和哺乳仔豬PCV2感染率較高，分別達66.67 %和61.73 %。

2.3不同豬場的PRRSV抗體檢測結(jié)果

對2013年～2015年采自鄂西山區(qū)20個豬場中未免疫PRRSV疫苗的11個豬場的710份血清進行了PRRSV抗體檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有被檢豬場均存在PRRSV感染，豬場的抗體陽性率為100 %（11/11），全部豬的PRRSV抗體平均陽性率為48.45 %（344/710），其中PRRSV抗體陽性率最高的達71.67 %（43/60），最低的為32.31 %（21/65），見表3。

2.4不同豬場的PRV gE抗體檢測結(jié)果

對2013年～2015年采自鄂西山區(qū)20個豬場的1 260份血清樣品進行PRV gE抗體檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)20個被檢豬場有13個豬場存在PRV野毒感染，豬場PRV野毒感染率達65 %（13/20）；全部豬的PRV gE抗體平均陽性率為23.73 %（299/1 260），其中PRV gE抗體陽性率最高的達48.28 %（28/58），見表4。

2.5不同豬場的CSFV抗體檢測結(jié)果

對2013年～2015年采自鄂西山區(qū)20個豬場的1 260份血清樣品進行CSFV抗體檢測，所檢20個豬場均進行了CSFV疫苗的免疫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)20個被檢豬場CSFV抗體平均陽性率為71.35 %，其中CSFV抗體陽性率最高的達93.33 %（56/60），最低的僅有50 %（28/56），見表5。

3　討論

近年來，我國部分地區(qū)動物流行病學監(jiān)測結(jié)果顯示，豬圓環(huán)病毒2型的感染率及其引起的豬圓環(huán)病毒病的暴發(fā)次數(shù)都有上升的趨勢，且常與豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬偽狂犬病病毒（PRV）、豬瘟病毒（CSFV）等混合感染，表現(xiàn)出較高的病死率，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失［8，9］。本研究中被檢測豬場均存在PCV2感染，其抗體平均陽性率為56.75 %（715/1 260），比郎洪武等［10］報道的全國7個養(yǎng)豬大省42.9 %的陽性率高出近14個百分點，比趙東升［11］等報道的全國2002年～2007年P(guān)CV2血清抗體平均陽性率38.47 %高18.28個百分點，而比徐廷川［6］等報道的廣東省2002年～2007年P(guān)CV2血清抗體平均陽性率61.91 %要低5.16個百分點，說明鄂西山區(qū)的PCV2感染已經(jīng)非常普遍，這可能與近幾年頻繁到外地引種且引種時沒有嚴格檢測相關(guān)疫病，飼養(yǎng)管理水平低下等原因有關(guān)。

對于不同豬群PCV2的血清抗體檢測結(jié)果表明，受檢豬群哺乳仔豬、保育豬及育肥豬的PCV2感染陽性率較高，這與郎洪武等［10］、吳瑗等［12］報道的后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬和種公豬的PCV2感染陽性率較高有所不同。

近年來，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷壯大，在豬群中普遍存在PCV2、PRRSV及其他病原的感染的現(xiàn)象，對養(yǎng)豬業(yè)造成的危害也日益加劇［13］。本研究對所有20個豬場均進行了PRV gE抗體、CSFV抗體的檢測，對其中未免疫PRRSV疫苗的11個豬場進行了PRRSV抗體檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCV2抗體感染率高的豬場PRRSV、PRV的感染率也相對較高，而CSFV的免疫抗體陽性率則相對較低，具有一定的相關(guān)性，這可能與PCV2感染后導致的免疫抑制有關(guān)。

PCV2能夠破壞豬的免疫系統(tǒng)，造成免疫抑制，從而引起多種疾病混合感染的發(fā)生，另外還造成對疫苗的免疫失敗或?qū)χ委煙o應答的現(xiàn)象。因此，該病對豬的健康和養(yǎng)豬業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的威脅日益增大。本次檢測的20個養(yǎng)殖場均未進行PCV2免疫，這應引起廣大養(yǎng)殖場（戶）和動物疫病防控部門的高度重視。

本研究通過對采自鄂西山區(qū)的豬血清樣本進行PCV2感染抗體的檢測及其他病原抗體的檢測，系統(tǒng)分析了PCV2在豬群中的感染及流行情況，為進一步開展PCV2的診斷與防控研究提供了理論依據(jù)。

（13篇，略）

S855.3

A

1001-0769（2016）10-0033-04

湖北省科技支撐計劃項目（公益性科技研究類）（2014BKB063），湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心項目（2016-620-000-001-026），動物胚胎及分子育種湖北省重點實驗室開放課題（2015ZD156）。

楊克禮（1976- ），男，博士，副研究員，研究方向：動物傳染病學。Email：hbxms@126.com。

**通信作者：田永祥（1965- ），男，研究員，研究方向：動物疫病防控。Email：tyxanbit@163.com。