郝玉青白艷艷劉健鵬楊增岐韓 斌

（1.榆林市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西 榆林 719000；2.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，陜西 楊凌 712100）

陜北白絨山羊小反芻獸疫及口蹄疫疫苗免疫方法比較

郝玉青1，2白艷艷1劉健鵬1楊增岐2*韓 斌1

（1.榆林市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西 榆林 719000；2.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，陜西 楊凌 712100）

為了合理使用小反芻獸疫疫苗和口蹄疫疫苗以及了解這兩種疫苗用于陜北白絨山羊的免疫效果，改進(jìn)免疫方法，本試驗(yàn)選取榆林市神木縣金雞灘鎮(zhèn)一家規(guī)模化陜北白絨山羊羊場(chǎng)160只基礎(chǔ)繁殖母羊?yàn)閷?duì)象，將試驗(yàn)羊分成6組，分別進(jìn)行小反芻獸疫疫苗和口蹄疫疫苗單獨(dú)注射以及間隔7天分別注射不同疫苗、同時(shí)分點(diǎn)注射不同疫苗，設(shè)不注射疫苗組為對(duì)照組。免疫后第28天頸靜脈采血并制備血清樣品，用ELISA試劑盒進(jìn)行免疫后抗體檢測(cè)。結(jié)果表明試驗(yàn)組三同時(shí)分點(diǎn)注射O型口蹄疫與小反芻獸疫疫苗后抗體陽(yáng)性率分別為80.00%和100.00%，與試驗(yàn)組四以及試驗(yàn)組五分別單獨(dú)注射一種疫苗7天后不同點(diǎn)再注射另一種疫苗后檢測(cè)抗體率之間差異不顯著。說(shuō)明O型口蹄疫疫苗與小反芻獸疫疫苗可以同時(shí)一次性分點(diǎn)注射。該研究為O型口蹄疫疫苗與小反芻獸疫疫苗的合理利用提供了可靠的試驗(yàn)依據(jù)。

陜北白絨山羊 小反芻獸疫疫苗 O型口蹄疫疫苗 疫苗分點(diǎn)注射

小反芻獸疫（Peste des petites ruminants，PPR）也稱(chēng)小反芻獸假性牛瘟、肺腸炎、口炎肺腸炎復(fù)征，是由小反芻獸疫病毒（Peste des petites ruminants virus，PPRV）引起的一種急性接觸性傳染病，主要感染小反芻動(dòng)物（山羊和綿羊等）［1］?？谔阋呤怯煽谔阋卟《疽鸬囊环N急性、發(fā)熱性、高度接觸性一種人畜共患傳染病，是動(dòng)物中傳染性最強(qiáng)的疾病［2］。O型口蹄疫作為國(guó)家強(qiáng)制免疫疫病，每年春秋兩季都必須進(jìn)行高密度的防疫。外來(lái)疫病小反芻獸疫的入侵給動(dòng)物疫病的防控帶來(lái)新的挑戰(zhàn)，致使羊疫病防控種類(lèi)增多。為了促進(jìn)防疫工作開(kāi)展，減少防疫人員的勞動(dòng)強(qiáng)度，提高免疫密度和工作效率，更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，我們開(kāi)展了山羊小反芻獸疫與O型口蹄疫分組分點(diǎn)注射的免疫試驗(yàn)，現(xiàn)將有關(guān)研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 選自榆林市神木縣金雞灘鎮(zhèn)一家規(guī)模化陜北白絨山羊羊場(chǎng)160只基礎(chǔ)繁殖母羊，試驗(yàn)羊只臨床檢查健康、無(wú)臨床疾病表現(xiàn)。試驗(yàn)羊按規(guī)范進(jìn)行飼養(yǎng)和管理，精飼料為配合飼料，粗飼料為青干草，為舍飼飼養(yǎng)。試驗(yàn)羊只從未接種過(guò)口蹄疫疫苗和小反芻獸疫疫苗，基礎(chǔ)抗體為零。

1.1.2 疫苗來(lái)源和規(guī)格 羊口蹄疫疫苗為O型、亞Ⅰ型二價(jià)滅活苗（OJMS株+JSL株），由呼和浩特市金宇保靈生物藥品有限公司生產(chǎn)。滅活前每0.1ml病毒含量≥2×107.0TCID50，免疫期為4～6個(gè)月；小反芻獸疫疫苗為新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，該弱毒苗每頭份疫苗含有的小反芻獸疫弱毒病毒≥103TCID50，免疫期持續(xù)暫為36個(gè)月。

1.1.3 診斷試劑 O型口蹄疫液相阻斷免疫抗體ELISA試劑盒（批號(hào)：2014031901）和小反芻獸疫競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒購(gòu)（批號(hào)：2014061802）均購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.1.4 診斷儀器 Eppendorf單、雙道可調(diào)移液器；美國(guó)寶特（ELX50）自動(dòng)洗板機(jī)；江蘇科析KX-303恒溫培養(yǎng)箱；美國(guó)Multiskan FC酶標(biāo)儀。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組及血清樣品的采集

選取未免疫過(guò)O型口蹄疫疫苗和小反芻獸疫疫苗且基礎(chǔ)抗體為零的在相同飼養(yǎng)條件下飼養(yǎng)的160只健康羊，隨機(jī)分成六組，前五組每組30只，第一組注射O型口蹄疫疫苗；第二組注射小反芻獸疫疫苗；第三組分兩點(diǎn)同時(shí)注射O型口蹄疫疫苗和小反芻獸疫疫苗兩種疫苗；第四組先注射O型口蹄疫疫苗隔7d后再不同點(diǎn)注射小反芻獸疫疫苗；第五組先注射小反芻獸疫疫苗隔7d后再不同點(diǎn)注射O型口蹄疫疫苗；第六組10只不注射任何疫苗。分組詳細(xì)情況見(jiàn)表1。整個(gè)免疫劑量及操作按照疫苗使用說(shuō)明書(shū)的規(guī)定進(jìn)行。免疫后28d頸靜脈采血并制備血清樣品，共計(jì)160份。

表1 試驗(yàn)分組及免疫種類(lèi)

1.2.2 檢測(cè)方法

O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)使用O型口蹄疫液相阻斷免疫抗體ELISA試劑盒（LPB-ELISA）進(jìn)行抗體合格率的檢測(cè)；小反芻獸疫免疫抗體檢測(cè)采用小反芻獸疫競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒進(jìn)行抗體合格率的檢測(cè)。

1.2.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

O型口蹄疫液相阻斷ELISA（LPB-ELISA）試驗(yàn)的抗體效價(jià)≥26（1：64）時(shí)判定為合格。小反芻獸疫阻斷ELISA 阻斷率（PB）>50判為陽(yáng)性，表述為小反芻獸疫血清學(xué)陽(yáng)性；待檢樣品阻斷率（PB）≤50，判為陰性。

2 結(jié)果與分析

小反芻獸疫疫苗與O型口蹄疫疫苗不同組免疫抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 小反芻獸疫疫苗與O型口蹄疫疫苗試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

（1）結(jié)果顯示小反芻獸疫弱毒活疫苗不論單獨(dú)免疫注射還是組合免疫，抗體陽(yáng)性率差異不大，說(shuō)明該疫苗都具有很好的免疫效果［4］，不受其他疫苗的干擾，抗體合格率都超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)70%。口蹄疫滅活苗不論單獨(dú)免疫還是組合免疫，抗體陽(yáng)性率差異相對(duì)較大，口蹄疫需要較高的抗體水平才提供有效的保護(hù)力，免疫效果普遍不好的這種現(xiàn)象可能與疫苗毒株選擇上有一定的相關(guān)性，口蹄疫基因型較多，各型間沒(méi)有交叉免疫性，同血清型的各拓?fù)湫椭g也僅有部分交叉免疫性［5］。

（2）一次分點(diǎn)同時(shí)注射兩種疫苗的免疫陽(yáng)性率與兩次分順序、分時(shí)、分點(diǎn)注射疫苗的免疫陽(yáng)性率比較差異性不大，疫苗免疫效果相當(dāng)。實(shí)驗(yàn)中觀(guān)測(cè)到所有的實(shí)驗(yàn)羊沒(méi)有出現(xiàn)副反應(yīng)，兩種疫苗的安全性較高。

（3）僅進(jìn)行一次O型口蹄疫疫苗免疫，抗體群體合略高于70%，可以看出首免，且免一次羊口蹄疫苗免疫抗體合格普遍不高，需進(jìn)行二次免疫，主要是由于口蹄疫是滅活疫苗，滅活苗僅免疫一次抗體水平不高。二次免疫抗體水平升高，是由于首免對(duì)于抗體的產(chǎn)生沒(méi)有更加明顯的積極作用，但它可以刺激免疫細(xì)胞，起到所謂的“預(yù)刺激”作用，并促使其產(chǎn)生口蹄疫特異的記憶細(xì)胞，在首次免疫后選擇合適的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行第二次免疫，此時(shí)由于第一次的預(yù)刺激會(huì)提高第二次的免疫反應(yīng)［5］。

4 結(jié)論

O型口蹄疫疫苗與小反芻獸疫疫苗兩者之間的免疫抗體相互影響不明顯，可以同時(shí)一次性分點(diǎn)注射。該研究為O型口蹄疫疫苗與小反芻獸疫疫苗的合理利用提供了可靠的試驗(yàn)依據(jù)，可在陜北白絨山羊養(yǎng)殖中進(jìn)行推廣。

［1］ 田克恭，李明.動(dòng)物疫病診斷技術(shù)理論與應(yīng)用［M］.中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社：2014：490-491.

［2］ 寧宜寶.獸用疫苗學(xué)［M］.中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2008：239-244.

陜北白絨山羊健康養(yǎng)殖與主要疫病防治關(guān)鍵技術(shù)研究與示范（2015年農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新轉(zhuǎn)化資金項(xiàng)目）

郝玉青（1988-），男，陜西 靖邊人，獸醫(yī)碩士，主要從事動(dòng)物疫病防控工作。

楊增岐由表2可以看出，口蹄疫疫苗一次免疫抗體合格為70%，而小反芻獸疫疫苗一次免疫抗體合格率達(dá)到99.17%，表明現(xiàn)有的口蹄疫疫苗的免疫效果沒(méi)有小反芻獸疫疫苗效果好，但是O型口蹄疫疫苗抗體合格率超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)70%的要求。從各組來(lái)看，小反芻獸疫疫苗和O型口蹄疫疫苗單獨(dú)使用和聯(lián)合使用，所產(chǎn)生的抗體陽(yáng)性率之間差異均不顯著（P>0.05）。尤其是試驗(yàn)組三和試驗(yàn)組四、試驗(yàn)組五之間小反芻獸疫疫苗抗體合格率分別為100%、96.67%和100%，O型口蹄疫疫苗抗體合格率各組分別為80.00%、73.33%和76.67%，各組之間檢驗(yàn)無(wú)差異（P>0.05），說(shuō)明就本試驗(yàn)采用的疫苗使用方法，小反芻獸疫疫苗與O型口蹄疫疫苗一次同時(shí)分點(diǎn)免疫和間隔7d不同點(diǎn)再注射后檢測(cè)抗體率之間差異不顯著，提示這兩種不同疫苗可以同時(shí)分點(diǎn)注射，這樣可以大大降低保定羊的勞動(dòng)強(qiáng)度和減少多次注射疫苗對(duì)羊產(chǎn)生應(yīng)激。