陳 超談賽濤 郭駿嘯 吳夏智 何鑫源 胡 琳

（1.宜興市農(nóng)林局動物衛(wèi)生監(jiān)督所，江蘇 宜興 214200；2.宜興市萬石鎮(zhèn)農(nóng)服中心，江蘇 宜興 214212；3.宜興市新建鎮(zhèn)農(nóng)服中心，江蘇 宜興 214253；4.宜興市周鐵鎮(zhèn)農(nóng)服中心，江蘇 宜興 214261；5.宜興市和橋鎮(zhèn)農(nóng)服中心，江蘇 宜興 214211；6.宜興市農(nóng)林局水產(chǎn)畜牧站，江蘇 宜興 214200）

宜興地區(qū)某豬場沙門氏菌的分離鑒定

陳 超1談賽濤2郭駿嘯3吳夏智4何鑫源5胡 琳6

（1.宜興市農(nóng)林局動物衛(wèi)生監(jiān)督所，江蘇 宜興 214200；2.宜興市萬石鎮(zhèn)農(nóng)服中心，江蘇 宜興 214212；3.宜興市新建鎮(zhèn)農(nóng)服中心，江蘇 宜興 214253；4.宜興市周鐵鎮(zhèn)農(nóng)服中心，江蘇 宜興 214261；5.宜興市和橋鎮(zhèn)農(nóng)服中心，江蘇 宜興 214211；6.宜興市農(nóng)林局水產(chǎn)畜牧站，江蘇 宜興 214200）

為了解宜興市規(guī)模養(yǎng)豬場沙門氏菌污染和耐藥狀況，從本市以規(guī)模養(yǎng)豬場采集生豬肛門拭子，鼻腔拭子，飼料、污水各30份，進(jìn)行沙門氏菌的分離與鑒定，并對分離株進(jìn)行13種常用抗生素的敏感試驗。共分離出沙門氏菌14株，陽性率為11.7%。14株分離株均為多重耐藥，對氯霉素和鏈霉素耐藥率較高，對阿米卡星和頭孢噻呋全部敏感。結(jié)果表明:宜興市該養(yǎng)豬場沙門氏菌污染情況比較普遍，耐藥率也較高，應(yīng)當(dāng)引起監(jiān)管部門的重視。

沙門氏菌 污水 耐藥

沙門氏菌作為一類常見的食源性致病菌，在人類健康和畜禽養(yǎng)殖中引起嚴(yán)重的危害。近年來，隨著規(guī)?；B(yǎng)殖的發(fā)展，抗生素不可避免的濫用，導(dǎo)致沙門氏菌的耐藥性出現(xiàn)明顯的增強，多重耐藥譜不斷增寬，為沙門氏菌的預(yù)防和治療帶來極大的困難。生豬作為沙門氏菌的主要貯藏宿主之一，在沙門氏菌的散播及其對食品的污染方面扮演著重要的角色。由于耐藥性和耐藥譜普遍存在地區(qū)差異，區(qū)域性耐藥監(jiān)控作為控制耐藥性的主要措施已成為必然趨勢。本實驗對宜興地區(qū)一家規(guī)模豬場的臨床健康豬群進(jìn)行沙門氏菌分離鑒定，并對臨床常用抗生素進(jìn)行耐藥性檢測，為本地區(qū)沙門氏菌的預(yù)防和臨床用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑

緩沖蛋白胨水（BPW）、四硫黃酸鈉煌綠增菌液（TTB）、氯化鎂孔雀綠增菌液（MM）、磺胺增菌液（SBG）、XLT4營養(yǎng)瓊脂、生化試劑、CHRO Magar沙門菌顯色板，抗生素藥敏紙片。所有試劑和培養(yǎng)基均在有效期內(nèi)使用。

1.2 樣品采集

臨床健康生豬肛門拭子，鼻腔拭子，飼料、污水各30份。肛門拭子：用SBG選擇增菌拭子管，取出拭子棒將其插入豬肛門內(nèi)取內(nèi)壁黏液，插入增菌拭子管中；鼻腔拭子：將蘸取生理鹽水的無菌棉簽插入豬鼻腔內(nèi)，取內(nèi)壁黏液，放入滅菌指形管中；飼料：100g飼料為一份，裝在滅菌采樣袋中；污水：以滅菌后的10ml指形管分點采樣，每個點 20ml左右。以上樣品均放入0℃～4℃采樣箱帶回實驗室，4h內(nèi)進(jìn)行檢驗。

1.3 細(xì)菌分離鑒定

1.3.1 肛門拭子 將含有肛門拭子的SBG管置36℃培養(yǎng)，20h后轉(zhuǎn)種沙門菌顯色平板，36℃，24h培養(yǎng)后挑取紫紅色菌落，按照GB4789.4-2010進(jìn)行沙門菌分離和鑒定。

1.3.2 鼻腔拭子 將鼻拭子加入100mlBPW增菌液，于36℃培10h后取1ml接種于10ml的TTB增菌液和10ml MM增菌液中，置42℃培養(yǎng)22h，分別劃線沙門菌顯色平板和XLT4平板，置36℃培 養(yǎng)24h，挑取可疑菌落按GB4789. 4-2010進(jìn)行檢驗。

1.3.3 飼料樣品和污水樣品 無菌操作稱取10g（飼料）或10ml（污水）樣品加入90ml BPW增菌液，于36℃培養(yǎng)，10h后取1ml接種于10ml的TTB增菌液和10ml MM增菌液中，置42℃培養(yǎng)22h，分別劃線沙門菌顯色平板和XLT4平板，置36℃培 養(yǎng)24h，挑取可疑菌落按GB4789. 4-2010進(jìn)行檢驗。

2 耐藥性的檢測

選擇鏈霉素（S）、阿米卡星（AN）、慶大霉素（GEN）、氧氟沙星（OFX）、環(huán)丙沙星（CIP）、四環(huán)素（TET）、多西環(huán)素（DO）、氟苯尼考（FFC）、氯霉素（CHL）、氨芐西林（AMP）、阿莫西林（AMX）、頭孢噻呋（EFT）、頭孢噻吩（KF）13種藥敏紙片（杭州天和生物生產(chǎn)），按CLSI推薦的Kirby-Bauer瓊脂擴散法測定細(xì)菌的耐藥性。并以ATCC25923菌株作為質(zhì)控菌株，對照CLSI（2009）判定標(biāo)準(zhǔn)，以敏感（Susceptible）、中介（Intermediate）、耐藥（Resistible）3種形式對抑菌圈大小做出解釋。

2.1 不同樣本沙門菌的檢出情況

120份樣品中，14份檢出沙門氏菌，陽性率為11.7%，其中豬肛門拭子陽性率為6.67%（2/30），鼻腔拭子3.33%（1/30），飼料10%（3/30），污水26.7%（8/30）。

2.2 分離菌株的耐藥情況

對14株分離獲得的沙門氏菌多重耐藥性的檢測結(jié)果詳見表1。

表1 14株沙門氏菌分離株的多重耐藥情況

從表1數(shù)據(jù)可以看出，本試驗沒有分離到完全不耐藥的菌株和完全耐藥的菌株。對5種及以上抗生素耐藥的分離株有6株，占所有菌株的42.9%，對3種及以下抗生素耐藥的分離株有5株，占所有菌株的35.7%。耐藥率最高的是從污水分離的菌株，耐受8種抗生素；耐藥率最低的兩株分別是從鼻腔拭子和飼料中分離。

13種抗生素的耐藥性試驗結(jié)果見表2。

從表2可以看出，所有分離株對氯霉素（85.7%）、鏈霉素（71.4%）和氟苯尼考（57.1%）的耐藥性很高，其次為四環(huán)素（50%）和多西環(huán)素（42.8%）。分離株對阿米卡星和頭孢噻呋全部敏感，對氧氟沙星和頭孢噻吩各有12株敏感。

3 討論

沙門氏菌是自然界分布極為廣泛的病原菌，絕大多數(shù)對人和動物有致病性，是世界上引起食物中毒最多的病原菌。

表2 14株沙門氏菌分離株對13種抗生素的耐藥情況

沙門氏菌極易產(chǎn)生耐藥性，動物源性攜帶耐藥質(zhì)粒的腸道菌可傳播給人類，因此，耐藥性沙門氏菌不但給獸醫(yī)臨床治療帶來了困難，加劇了治療和用藥的惡性循環(huán)，而且對人類健康和公共衛(wèi)生構(gòu)成了潛在威脅。近年來，世界各地都報道多重耐藥性沙門氏菌的分離率越來越高。本次試驗選取了本地一家典型的規(guī)模養(yǎng)殖場，對飼養(yǎng)動物和環(huán)境分別采樣，分離到14株沙門氏菌，而污水中分離到最多，達(dá)到8株，飼料、飲水中也有分離，證明養(yǎng)殖場環(huán)境中沙門氏菌普遍存在并污染嚴(yán)重。建議養(yǎng)殖場加強對圈舍環(huán)境特別是污水的消毒滅菌，從源頭上控制 沙門氏菌的污染和傳播。

沙門氏菌的耐藥性結(jié)果顯示，該養(yǎng)殖場沙門氏菌的耐藥性比較嚴(yán)重，并且都為多重耐藥菌，最少為2重耐藥，最多達(dá)到8重耐藥，說明規(guī)?；B(yǎng)豬場的沙門氏菌長期處于大抗菌藥物選擇壓力下，不斷進(jìn)化成多重耐藥菌株，這將會對沙門氏菌的防控帶來極大的困難，應(yīng)引起政府和獸醫(yī)工作者的高度重視。頭孢類藥物和第三代氟喹諾酮類抗生素是臨床上治療沙門氏菌的首選用藥，與本次試驗結(jié)果基本吻合，分離株對阿米卡星、頭孢噻呋和氧氟沙星都具有較高的敏感性，可繼續(xù)發(fā)揮臨床防治作用。而氯霉素、鏈霉素和氟苯尼考的耐藥率很高，可能與這些抗菌藥物價格低廉，在臨床上長期不規(guī)范使用有關(guān)。所以，應(yīng)該及時準(zhǔn)確的開展耐藥菌株的監(jiān)測，提高從業(yè)人員的診斷和用藥水平，減少抗生素在食品動物中的誤用和濫用，針對性的使用治療效果確切的抗菌藥物，而且必須定期更換抗菌藥的種類，以免產(chǎn)生新的耐藥菌株。

［1］ 王紅寧，劉書亮，陶勇，等.規(guī)?；i場致病性大腸桿菌、沙門氏菌藥敏區(qū)系調(diào)查［J］.西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2000，13（S1）：84-90.

［2］ Guerra B，Soto SM，Arguelles JM，et al. Multidrug resistance is mediated by large plasmids carrying a class 1 integron in the emergent Salmonella enterica serotype ［J］.Antimicrob Agents Chemother，2001，45（4）：1305-1308.

表4 大鼠每周食物利用率

2.4 每周食物利用率

雌雄大鼠每周的食物利用率均隨著時間呈下降趨勢（詳見表4），差異顯著（p<0.05）。

3 討論

大鼠的生理正常值作為毒理學(xué)安全性評價和實驗動物生長評價的重要指標(biāo)，已經(jīng)得到了科學(xué)工作者的一致認(rèn)可。但由于動物品種、來源、年齡、體重、飼養(yǎng)環(huán)境、營養(yǎng)狀況、檢測方法等條件的不同，各地的參考值范圍有一定的差異，進(jìn)而為毒理學(xué)評價試驗帶來了一定的不便和誤差。

本研究中Wistar大鼠的體重增長情況、進(jìn)食量和食物利用率與其他實驗室報道的結(jié)果總體接近，但也有一點差異。本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雄性wistar大鼠體重、增重、進(jìn)食量、食物利用率均高于相同觀察時間的同齡雌性wistar大鼠，表明雄性大鼠的生長發(fā)育速度比雌鼠快，這與文獻(xiàn)報道的SD大鼠的同類指標(biāo)結(jié)果的趨勢相符。

不同的是，本研究中wistar大鼠每周的體重、增重、進(jìn)食量、食物利用率均高于李巖［6］報道的結(jié)果，表明wistar大鼠的生長發(fā)育可能與動物的來源、營養(yǎng)狀況以及飼養(yǎng)環(huán)境等因素的影響有關(guān)。

本研究同時表明，在毒理學(xué)安全性評價試驗中，最好固定選擇一個實驗動物生產(chǎn)單位的同一批次的動物，試驗過程中要嚴(yán)格控制飼養(yǎng)間各種因素，尤其是動物飼養(yǎng)環(huán)境條件和營養(yǎng)條件，以確保動物的生理狀態(tài)保持最佳，進(jìn)而如實反應(yīng)受試物的安全性。

參考文獻(xiàn)

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［2］ 王亞東，楊海燕，王海玉.SD大鼠30d喂養(yǎng)試驗正常參考值的探討［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2007，34（7）：1265-1267.

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［4］ 徐培渝，劉曉剛，王正書.成都地區(qū)SD大鼠參考值范圍的探討（一）——體重和主要臟器正常參考值［J］現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2005，32（9）：1055-1057.

［5］ 林健，黃宗銹，張榮標(biāo).大鼠進(jìn)食量、食物利用率趨勢及其與體重相關(guān)的分析［J］.海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2005，11（6）：33-35.

［6］ 李巖，高虹，孫井江.Wistar大鼠體重和主要臟器參考值的研究［J］.適用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2009，16（6）：1708-1710.

2014年度宜興市農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新引導(dǎo)計劃項目 16號