王瑛蘭 劉元昆 崔翠翠

（威海市中醫(yī)院，山東 威海264200）

葛根虎杖丸的提取工藝研究

王瑛蘭 劉元昆 崔翠翠

（威海市中醫(yī)院，山東 威海264200）

目的：篩選葛根虎杖丸的最佳提取工藝。方法：以提取次數(shù)、時間、加水量為考察因素，以葛根素、出膏率含量為指標(biāo)，采用正交設(shè)計L9（34），優(yōu)選葛根虎杖丸的最佳提取工藝條件。結(jié)果：最佳提取工藝為：藥材加10倍量水，煎煮提取2次，每次1.5小時。結(jié)論：優(yōu)選出的提取工藝合理可行，為實(shí)際生產(chǎn)及其質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

葛根虎杖丸；提取工藝；出膏率；葛根素；正交設(shè)計

葛根虎杖丸為我院自制制劑，處方由葛根、虎杖、茵陳、黨參、白術(shù)、丹參、砂仁、豆蔻等十二味中藥組成，功能主治解酒毒，化瘀滯，健脾助運(yùn)，降酶護(hù)肝。適用于酒毒瘀滯的酒精性肝病，癥見倦怠乏力，脅脹不舒，脘脹便滯等酒精引起的肝功能損害（主要表現(xiàn)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的異常升高）。原臨床用藥的制備主要是粉劑入藥，針對個體患者，制劑規(guī)模小，制備方法不規(guī)范、不統(tǒng)一。為保證生產(chǎn)工藝的科學(xué)性，對提取工藝條件進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計，優(yōu)選出最佳提取工藝，為臨床提供更有效的藥品。

本方來源于嚴(yán)用和的“葛花解酲湯”，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了大量的臨床研究，確定了本方劑。其中葛根解酒之毒，虎杖、茵陳清濕熱、降酶護(hù)肝，三者解毒降酶以恢復(fù)肝功能，共為君藥。因此本試驗(yàn)將葛根素確定為考察指標(biāo)，根據(jù)提取工藝將其與出膏率作為共同的考察指標(biāo)。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（DAD二極管陣列檢測器，四元泵），CP 214型電子分析天平（奧豪斯儀器上海有限公司）。

葛根素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110752-200912）；甲醇（色譜純，美國 Tedia公司）；其余試劑均為分析純。

試驗(yàn)所用藥材均購于山東菏澤泰山中藥飲片有限公司，符合2015年版《中國藥典》（一部）有關(guān)規(guī)定。所用樣品均為威海市中醫(yī)院制劑室生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗(yàn)設(shè)計

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，確定以出膏率、葛根素含量為考察指標(biāo)。以加水量、提取時間、提取次數(shù)作為考察因素進(jìn)行水平試驗(yàn)［1］。每個因素3個水平，見表1。

表1 因素與水平表

2.2 出膏率的測定

取處方量的1/10，共計21 g，分別取9份，按照正交試驗(yàn)L9（34）進(jìn)行提取，濾過，合并濾液并濃縮至100 mL。再取上述9份濃縮液各25 mL，濃縮，干燥，精密稱定，計算出膏率。

出膏率=（干膏質(zhì)量×4/原藥材質(zhì)量）×100%。

2.3 葛根素的含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Agilent 1100型高效液相色譜儀（DAD二極管陣列檢測器，四元泵）；流動相：甲醇-水（25∶75），檢測波長 250 nm；柱溫30℃；流速：1 mL/min。

2.3.2 供試品溶液制備 取正交試驗(yàn)提取的藥液樣品各1 mL，用甲醇稀釋溶解至5 mL，0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.3.3 對照品溶液制備 參照2015年版《中國藥典》方法［2］取葛根素對照品適量，精密稱定，加 30%乙醇制成每l mL含6.026 4 mg的溶液，即得。

2.3.4 陰性對照樣品溶液制備 取除葛根外其他藥材處方量的1/10，共計17 g，加8倍量水煎煮2次，每次煎煮 1 h，濾過，合并濾液，作為陰性對照溶液。見圖1。

圖1 葛根素HPLC圖

2.3.5 專屬性試驗(yàn)［3］

2.3.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取葛根素對照品溶液分別用30%的乙醇稀釋，分別進(jìn)樣10 μL，以進(jìn)樣濃度X與峰面積Y進(jìn)行線性回歸處理，在0.188 3～ 6.026 4 mg/mL范圍內(nèi)，葛根素進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：

Y=298.14X+0.041 74，

r=0.999 9，見圖2。

圖2 葛根素標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3.5.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.3.3”項(xiàng)下葛根素對照品溶液 10 μL，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件，測定葛根素峰面積值，重復(fù)進(jìn)樣測定6次，計算得對照品峰面積值RSD為0.63%，表明測定方法的精密度良好。

2.3.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件，分別在 0，1，3，5，7，9，12，24 h，精密吸取照“2.3.2”項(xiàng)下制備的供試品溶液 10 μL，測定供試品溶液中葛根素峰面積值，計算供試品葛根素峰面積值的RSD為0.92%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品適量，研細(xì)，按“2.3.2”項(xiàng)下制成6份供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件測定，RSD為1.42%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.3.5.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱定本品6份，每份約1 g，分別精密加入葛根素對照品溶液（濃度為0.188 3 mg/mL）10 mL，精密稱定質(zhì)量，照“2.3.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計算加樣回收率。結(jié)果見表3。樣品中葛根素平均回收率為98.00%，RSD為1.13%（n=6），表明葛根素加樣回收良好。

2.4 結(jié)果與分析

依據(jù)出膏率和葛根素的含量的權(quán)重比（1∶1）計算綜合評分，有關(guān)試驗(yàn)數(shù)據(jù)及其計算分析結(jié)果見表4～5。

表3 葛根素加樣回收率

表4 葛根虎杖丸正交試驗(yàn)設(shè)計與結(jié)果

表5 結(jié)果的方差分析

綜合評分 = （葛根素含量/最大葛根素含量）×50+ （出膏率/最大出膏率）×50。

最佳工藝的確定：由方差分析表可以看出，本實(shí)驗(yàn)中，因素 A（加水量）、C（提取時間）對出膏率、葛根素的影響比較顯著，且A＞C，因素B（提取次數(shù)）的影響不顯著。通過極差大小分析，可以得出結(jié)論，影響水提取效果的順序?yàn)锳＞C＞B，以加水量影響為最大。綜合直觀分析及生產(chǎn)實(shí)際，確定水提取最佳工藝為 A3B2C3，即加10倍量水，提取2次，每次1.5小時。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

根據(jù)上述確定的工藝參數(shù)，分別測定葛根素含量、出膏率，計算結(jié)果見表6。

表6 三批樣品的測定結(jié)果

3 討論

3.1 本次試驗(yàn)前期對該處方中葛根素含量、出膏率進(jìn)行醇提考察［4-5］，結(jié)合生產(chǎn)成本、臨床應(yīng)用等實(shí)際需要，選擇水作為該制劑提取溶劑。本次試驗(yàn)中，以提取次數(shù)、加水量和提取時間為考察因素，以出膏率、葛根素的含量作為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)L9（34）設(shè)計法，優(yōu)選葛根素的提取工藝，結(jié)果其最佳工藝為加10倍量水，煎煮提取2次，每次1.5小時。加水量是影響煎出液質(zhì)量的主要因素。驗(yàn)證試驗(yàn)說明優(yōu)選的工藝條件穩(wěn)定可行。

3.2 本次試驗(yàn)后，又對葛根虎杖丸的相對密度、粉碎細(xì)度、濕丸干燥溫度、濕丸干燥時間長短等方面進(jìn)行了相關(guān)方面的考察，結(jié)果表明采用本生產(chǎn)工藝進(jìn)行生產(chǎn)，工藝簡單、科學(xué)、合理，可以有效地提高生產(chǎn)效率，降低生產(chǎn)成本，并且生產(chǎn)出來的產(chǎn)品完全符合葛根虎杖丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（草案）的要求，說明本工藝切實(shí)可行。

［1］劉起華，文謹(jǐn)，王菲，等.葛參丸提取和干燥工藝研究［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（10）：19-21.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2015年版）一部 ［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：333.

［3］賴杰仁.HPLC測定葛根溫膽顆粒中葛根素的含量［J］.中國執(zhí)業(yè)藥師，2015，12（7）：17-18.

［4］ 張庭，吳麗華，肖丹，等.不同提取方法對葛根中葛根素提取率的影響［J］.云南中醫(yī)中藥雜志，2013，34（5）：62-63.

［5］ 張彤，徐蓮英，陶建生，等.多指標(biāo)綜合評分法優(yōu)選葛根提取工藝［J］.中草藥，2004，35（1）：38-40.

Optimization of Extraction Process of Gegen Huzhang Granules

Wang Yinglan，Liu Yuankun，Cui Cuicui（Weihai TCM Hospital，Shandong Weihai 264200，China）

Objective：To optimize the extraction process of gegen huzhang granules.Methods：Serving the extracting rate and puerarin content as indexes，while the times and time duration for extraction as well as water volume as factors，the extraction process was optimized by orthogonal experiment L9（34）.Results：The optimal extraction process was as follows：the drug materials were added with 10 volumes of water and extracted for 2 times，1.5 h for each.Conclusion：The optimized extraction process is reasonable and feasible，which provides a basis for the actual production and quality control.

Gegen Huzhang Granules；Extraction Process；Extraction Rate；Puerarin；Orthogonal Experiment

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.10.007

2016-05-18）

王瑛蘭，女，主管藥師。研究方向：中藥新藥與中藥炮制原理研究。通訊作者E-mail：wyinglan336@126.com