何煥清 肖自添 劉 明 潘新華

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白雪菇新菌株的培養(yǎng)特性研究

何煥清1肖自添1劉 明1潘新華2

（1. 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所廣東省蔬菜新技術(shù)研究重點實驗室，廣東廣州 510640；2. 江西仙客來生物科技有限公司，江西九江332100）

通過對新分離的白雪菇（無毒肥腳環(huán)柄菇）菌株在不同環(huán)境和營養(yǎng)條件下的生長速率和長勢等培養(yǎng)特性研究，探明了白雪菇菌絲生長的最適溫度為30 ℃，培養(yǎng)基最適含水量為55%，pH為5，最佳碳源和氮源分別為葡萄糖和黃豆粉、麩皮。

白雪菇；培養(yǎng)特性；溫度；濕度；碳源；氮源

白雪菇（（Sow.:Fr.) Part.），學(xué)名無毒肥腳環(huán)柄菇，是新分離馴化栽培成功的一種食用菌（圖1）。據(jù)中國科學(xué)院微生物研究所卯曉嵐研究員對栽培成功的子實體的鑒定結(jié)果，其屬傘菌目、蘑菇科、白鬼傘屬。經(jīng)毒理試驗證明，該菌株無毒、可食用，為了與有關(guān)文獻提及的肥腳環(huán)柄菇（有毒）[1]加以區(qū)別，命名為無毒肥腳環(huán)柄菇。本文對白雪菇菌株的適宜碳氮源和培養(yǎng)環(huán)境條件進行了研究，旨在為白雪菇人工栽培提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（1）供試菌株。白雪菇菌株由廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所食用菌研究室保存并提供。

（2）PDA綜合培養(yǎng)基。馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，蛋白胨2 g，KH2PO43 g， MgSO41.5 g，維生素B115 mg，水1 L。

（3）碳源培養(yǎng)基。在基礎(chǔ)培養(yǎng)基（KH2PO43 g，MgSO41.5 g，維生素B115 mg，瓊脂20 g，硝酸銨1.15 g，水1 L）中分別加入0.72%的葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、淀粉、果糖作為碳源培養(yǎng)基，以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為對照。

圖1 白雪菇（無毒肥腳環(huán)柄菇）

（4）氮源培養(yǎng)基。在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別加入0.03%的牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、麩皮、黃豆粉、硫酸銨、硝酸銨、氯化銨作為氮源培養(yǎng)基，以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為對照。

1.2 試驗方法

（1）不同溫度、酸堿度對菌絲生長的影響試驗。用直徑0.5 cm打孔器將經(jīng)活化的菌種接到直徑9 cm PDA綜合培養(yǎng)基平板上。設(shè)10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、28 ℃、30 ℃、35 ℃和38 ℃ 8個培養(yǎng)溫度處理，每個處理設(shè)5個重復(fù)。接種后觀察菌絲生長情況，測量菌絲生長速率。

常規(guī)滅菌后分別用已滅菌的1.0 mol·L-1HCL 和1.0 mol/L NAOH調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH至3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0和10.0，計14個梯度，然后制備平板培養(yǎng)基，每個處理設(shè)5個重復(fù)，接種后于30 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察菌絲生長情況，測量菌絲生長速率。

（2）不同濕度對菌絲生長的影響試驗。培養(yǎng)基配方：棉籽殼88.5%，麩皮8%，石膏1.5%，石灰2%。培養(yǎng)基濕度（含水量）分別設(shè)45%、50%、55%、60%、65%、70%共6個處理。含水量（%）＝水分重量/（培養(yǎng)料干物質(zhì)重量＋水分重量）×100。培養(yǎng)基充分混合后裝入30×200 （mm）的試管中，每支試管折合干料10 g，每個處理設(shè)5個重復(fù)。接入直徑為0.5 cm的菌種塊，于30 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察菌絲生長情況，測量菌絲生長速率。

（3）不同碳源對菌絲生長的影響試驗。試驗按1.1（3）設(shè)計，采用葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、淀粉、果糖6種碳源培養(yǎng)基，用直徑0.5 cm打孔器將經(jīng)活化的菌種接到直徑9 cm平板培養(yǎng)基平板上，置于30 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每處理設(shè)5個重復(fù)，觀察菌絲生長情況，測量菌絲生長速率。

（4）不同氮源對菌絲生長的影響試驗。試驗按1.1（4）設(shè)計，采用牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、麩皮、黃豆粉、硫酸銨、硝酸銨、氯化銨8種氮源培養(yǎng)基，用直徑0.5 cm打孔器將經(jīng)活化的菌種接到直徑9 cm平板培養(yǎng)基平板上，置于30 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每處理設(shè)5個重復(fù)，觀察菌絲生長情況，測量菌絲生長速率。

（5）采用Excel、DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件處理數(shù)據(jù)[5]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溫度下白雪菇菌絲的生長情況

白雪菇菌絲在15～38 ℃范圍內(nèi)均能生長（表1），其中15～30 ℃范圍內(nèi)，隨溫度上升，菌絲生長速度直線上升，長勢趨好；30 ℃時達到最高值，高于30 ℃時菌絲開始受到抑制，生長減慢；38 ℃時菌絲長勢和長速均急速下降；10 ℃時菌絲不能生長。綜上表明，該菌株為耐高溫菌株，適宜生長溫度范圍28～35 ℃，最適生長溫度為30 ℃。

表1 不同溫度下白雪菇菌絲的生長速度與長勢

注：“+”越多，表示菌絲長勢越好，以下各表同。

2.2 不同pH下白雪菇菌絲的生長情況

白雪菇菌絲在pH 3.5～9.0范圍內(nèi)均可生長（表2），其中pH 3.5～5.0范圍內(nèi)，隨pH的上升，菌絲長速加快，長勢趨好，pH 5時達到最高；此后，隨著pH的上升，菌絲生長速度減慢，長勢趨一致；pH 3時菌絲不能生長。表明該菌株喜好偏酸性，適宜pH范圍為4.5～6.0，最適pH為5。

表2 不同pH培養(yǎng)基白雪菇菌絲生長速度與長勢

2.3 不同濕度培養(yǎng)基白雪菇菌絲的生長情況

培養(yǎng)基含水量對菌絲生長速度有明顯影響，在含水量45%～55%范圍內(nèi)，隨著培養(yǎng)料含水量的升高，菌絲長速和長勢均趨好，55%時達到最高；其后隨著含水量的升高，菌絲長勢和長速均降低。表明，培養(yǎng)料最適含水量為55%。

2.4 不同碳源培養(yǎng)基白雪菇菌絲的生長情況

白雪菇菌絲可以利用多種碳源，但不同碳源對菌絲生長的影響有顯著差異（表4）。以淀粉為碳源的菌絲生長速度最快，顯著高于其他處理；但菌絲長勢較弱。其次是蔗糖和葡萄糖，以葡萄糖為碳源的菌絲長勢最好。以果糖為碳源的菌絲生長速度和長勢中等。對照中菌絲雖能生長，且長速與果糖無明顯差異，甚至比以麥芽糖和乳糖為碳源的菌絲長速快，但長勢最弱。以麥芽糖和乳糖為碳源菌絲長勢較弱，長速較慢，其中乳糖的長速尤慢，顯著或極顯著低于其他處理。綜上結(jié)果，葡萄糖是該菌株菌絲生長的最適碳源，蔗糖次之。

表3 不同培養(yǎng)料含水量的白雪菇菌絲的生長速度與長勢

表4 不同碳源培養(yǎng)基白雪菇菌絲的生長速度與長勢

2.5 不同氮源培養(yǎng)基白雪菇菌絲的生長情況

以蛋白胨為氮源的培養(yǎng)基菌絲生長速度最快，日均生長量達3.34 mm；其次為氯化銨，但兩者的長勢均較弱。以黃豆粉和麩皮為氮源，菌絲生長快且旺盛，其生長速度與蛋白胨、氯化銨沒有顯著差異。以硫酸銨、硝酸銨為氮源，菌絲長勢和長速一致，表現(xiàn)均較弱、較慢。牛肉膏在所有添加氮源中長速最慢，酵母膏次之。對照雖然能生長，但菌絲非常弱，長速也最慢。綜上結(jié)果，黃豆粉、麩皮等有機氮是培養(yǎng)該菌株較理想的氮源。

表5 不同氮源培養(yǎng)基白雪菇菌絲生長速度與長勢

3 結(jié) 論

本試驗表明，白雪菇屬耐高溫品種，適宜生長溫度范圍28～35 ℃，最適生長溫度為30 ℃；喜酸性，最適pH為5；培養(yǎng)基含水量為55%時菌絲長勢好、長速快。

白雪菇能利用多種碳源、氮源。以淀粉為碳源菌絲長速最快但長勢較弱；而以葡萄糖為碳源的菌絲生長最好，為最佳碳源。以黃豆粉和麩皮為氮源菌絲長勢最好，且生長速度較快，是理想的氮源。

白雪菇是最近分離馴化成功的一種新菌株，我們還對其開展了形態(tài)學(xué)觀察、馴化栽培、營養(yǎng)分析，以及毒理等方面的研究，將另文逐一報道。

參考文獻：

[1] 何介元. 肥腳環(huán)柄菇人工栽培初探[J]. 微生物學(xué)通報, 1996, 23(2): 67-69.

Research on the culture characteristics of

He Huanqing1Xiao Zitian1Liu Ming1Pan Xinhua2

（1.Vegetables Research Institute Guangdong Academy of Agriculture Sciences, Key laboratory of Guangdong Vegetables Newly Technology, Guangzhou, Guangdong 510640, China; 2.Jiang Xi Xian Ke Li Biotechnology Limited Company , Jiu Jiang, Jiang Xi 332100,China）

The culture conditions of the newly strain Baixue mushroom (), such as the growth rate and the growth vigor were studied , The optimal temperature ,moisture and pH for the mushroom growth are 30℃, 55%, and 5 respectively , the best carbon source for the mycelium growth is glucose, and the best nitrogen source are soybean flour, bran.

; culture characteristics; temperature; moisture; carbon source; nitrogen source

S646

A

2095-0934（2016）05-316-04

廣東省科技廳農(nóng)業(yè)攻關(guān)項目（2013B020406008）；廣東省公益研究與能力建設(shè)項目（2015A020210076）

何煥清（1964—），男，研究員，從事食藥用菌技術(shù)研究與推廣；E-mail：hhq407@sina.com